Enzimas

Exemplos: sacarase e lactato desidrogenase

Enzimas são moléculas proteicas essenciais
ao metabolismo dos seres vivos, graças à sua
Algumas têm nomes particulares, como a
capacidade de promover e acelerar reações
tripsina.
químicas em nível celular.
As enzimas possuem uma pequena região
Essas proteínas envolvem-se com os
denominada sítio ativo, que funciona como
processos metabólicos essenciais à
uma espécie de bolsa.
manutenção da vida. No entanto, dada a sua
especificidade de ação, o uso de enzimas
Ao se ligar com a substância certa, o sítio
tem sido cada vez mais explorado em nível
ativo forma o complexo enzima-substrato
industrial, seja na área médica, alimentícia
(ES), convertido em enzima-produto (EP)
ou química.
gradativamente

Os componentes de uma reação

A ciência catalítica, denominada número de
enzimática
renovação (turnover), determina a
quantidade de moléculas de substrato
As enzimas são proteínas biocatalisadoras
convertidas em produto por mol de enzimas
que regulam a velocidade de todos os
em um segundo, representando, dessa
processos fisiológicos.
maneira, a eficiência do catalisador.

não são alteradas no processo químico.

As enzimas são altamente específicas,
catalisando somente determinado tipo de
Garantem a homeostasia do organismo.
reação

Elas podem reduzir a energia de ativação,

Algumas enzimas necessitam de cofatores,
mas não alteram o equilíbrio da reação.
elementos não proteicos necessários para
sua atividade. Há dois tipos de cofatores:
Grande parte das reações do corpo humano
é acelerada por enzimas chamadas de
 Os ativadores: geralmente íons
biocatalisadores, que influenciam na
metálicos (por exemplo, Zn2+ e
velocidade dos processos sem serem
Fe2+)
consumidas ou modificadas
 As coezimas: moléculas orgânicas
frequentemente derivadas de
As enzimas são específicas para cada
vitaminas
substrato, em concentração mínima,
mantendo inalterado o equilíbrio da reação.
O conjunto enzima-cofator é denominado
holoenzima; já o termo apoenzima se refere à
Alguns tipos de RNA podem também
unidade enzimática proteica pura.
funcionar como biocatalisadores – são as
chamadas ribozimas, porém são menos
comuns.

Em relação à nomenclatura, as enzimas

podem ser nomeadas de acordo com o
substrato ou com a reação, adicionando-se o
sufixo “ase”.
O Catalisador é toda substância capaz de
modificar a velocidade de uma reação sem ser
nela consumido ou aparecer entre os
produtos.
Para que ocorra uma reação, as moléculas dos
reagentes (R), também chamados de
substratos, precisam obter uma energia extra
chamada de energia de ativação. Essa energia
de ativação faz com que as moléculas atinjam
um estado ativado (R*) mais rico em energia,
no qual uma ligação pode ser formada ou
quebrada gerando o produto (P)
O catalisador é capaz de se combinar com os
reagentes formando um composto
intermediário de menor energia. Assim, a
barreira energética a ser transposta é
diminuída, os produtos são formados e o
catalisador livre é regenerado.
As enzimas catalisam as reações porque
reduzem o nível da energia de ativação.
Nas reações catalisadas por enzimas estão
envolvidos os seguintes componentes: enzima
(E), substrato (S), complexo enzima-substrato
(ES) e produto – composto formado pela
transformação do substrato.
Principais mecanismos de catálise das
enzimas
A enzima se une ao substrato através de uma
pequena parte de sua molécula denominada
centro ativo. Uma enzima pode ter um ou
mais centros ativos.
Há diferentes tipos de ligações entre enzima e
substrato: ligações iônicas, ligações
hidrofóbicas, ligações covalentes, pontes de
hidrogênio e forças de Van der Walls.
Para que a reação enzimática se realize é
necessário que o centro ativo da enzima se
ajuste perfeitamente ao substrato para
permitir trocas de elétrons, prótons e
grupamentos.
Durante uma reação enzimática, o substrato
vai desaparecendo e o produto vai
aumentando de concentração até que a
reação chegue ao estado de equilíbrio
Quando a velocidade de formação do
complexo Enzima-Substrato for igual à
velocidade de decomposição, a reação atinge
o estado estacionário, também chamado
equilíbrio dinâmico.
Certas enzimas, quando tratadas de modo a
se tornarem proteínas puras, perdem a
capacidade de catalisar reações.
Von Euler denominou cofatores as
substâncias não proteicas necessárias à
atividade de algumas enzimas
As enzimas que necessitam de cofator para
apresentarem atividade biológica são
compostas por duas partes:
 a parte proteica denominada
apoenzima
 a parte não proteica, que recebe o
nome de cofator.
 Como vimos anteriormente, a união
cataliticamente ativa (apoenzima + cofator) é
chamada holoenzima.
Os cofatores orgânicos recebem o nome de
coenzimas, e os inorgânicos são chamados
ativadores.
Os ativadores são íons inorgânicos que
condicionam a ação catalítica das enzimas. A
grande maioria dos ativadores é constituída
por cátions, entre os quais Na+ , K+ , Mg2+,
Ca2+, Zn2+, Mn2+, Fe2+, Co2+, etc
Por sua vez, as coenzimas são cofatores
orgânicos, muitas delas derivadas de
vitaminas hidrossolúveis, que tomam parte da
reação enzimática como transportadores de
hidrogênio ou de um grupo químico
Uma única coenzima pode formar, com
diversas enzimas, proteínas conjugadas
As coenzimas não realizam a ação, somente
determinam o modo como a enzima total age,
seja transportando hidrogênio, seja
transportando grupos químicos
A ação da catálise é feita pela parte proteica
da holoenzima.
Como vimos antes, quando a coenzima está
fortemente ligada à proteína e não pode ser
dialisada, recebe o nome de grupo prostético.
Os modelos de ligação da enzima ao substrato e
os tipos de reações catalisadas
Os mecanismos de regulação da atividade
Há dois modelos conhecidos de ligação
entre enzima e substrato:
 chave-fechadura: a enzima
encaixa-se perfeitamente ao seu
substrato no sítio ativo, de forma
que nenhuma outra molécula
possa iniciar a reação com esta
enzima
 Encaixe induzido: ocorrem
pequenas variações, havendo
quebras e novas ligações
químicas entre a enzima e o
substrato. No encaixe induzido,
ocorrem alterações na estrutura
da enzima para otimizar a
energia de ligação que está
sendo formada.
As enzimas podem ser distinguidas em seis
classes:
 Oxidorredutases - reações de
oxidação-redução ou transferência
de elétrons. Exemplo:
Desidrogenases e Oxidases.
 Transferases: transferência de
grupos funcionais como amina,
fosfato, acil e carboxi. Exemplo:
Quinases e Transaminases
 Hidrolases: reações de hidrólise de
ligação covalente. Exemplo:
Peptidases e Lactases
 Liases: Adicionam ou removem
elementos (como água, amônia e
dióxido de carbono) por meio da
formação ou quebra de ligações
duplas. Exemplo: Dehidratases e
Descarboxilases.
 Isomerases: realizam a transferência
de grupos dentro da mesma
molécula para formar isômeros,
portanto são extremamente
específicas. Exemplo: Epimerases.
 Ligases: catalisam ligações pelo
acoplamento da clivagem do ATP.
Exemplo: Piruvato Carboxilase.
enzimática
Os mecanismos de regulação da atividade
enzimática são fundamentais para o
controle dos níveis de ATP, a regulação das
vias metabólicas anabólicas e catabólicas e o
bom funcionamento das reações
bioquímica.
A regulação da atividade enzimática pode
ser administrada por diferentes estruturas
da célula, de modo a garantir a homeostase
do corpo humano
Para regular as atividades enzimáticas,
temos:
 Controle da velocidade das reações das
enzimas, que permite ajustar os
processos metabólicos às necessidades
do organismo. A velocidade das reações
enzimáticas geralmente está
relacionada à disponibilidade de
substrato, a substância sobre a qual
atua a enzima. À medida que aumenta
a concentração de substrato, a
velocidade da reação enzimática
também aumenta.
 Inibição não competitiva: o inibidor e
o substrato unem-se em sítios
diferentes: enquanto o inibidor se
conecta ao complexo enzima-
substrato, ou diretamente à enzima
livre, o substrato acopla-se no centro
ativo da enzima. A velocidade máxima
não pode ser atingida por meio do
aumento da concentração do
substrato, já que a presença do
inibidor diminui a taxa de formação
de produtos (não ocorre elevação do
k m).

 Modificação covalente: neste caso, o

fosfato proveniente do ATP é
adicionado às células pelas proteínas-
-cinases e retirado pelas
fosfoproteínas-fosfatases. Essa adição
ou remoção pode, dependendo da  Inibição competitiva: o inibidor ocupa
enzima, aumentar ou diminuir a o sítio ativo e diminui a velocidade
atividade catalítica. máxima momentaneamente. O efeito
do inibidor competitivo pode ser
 Inibição enzimática (utilizada em revertido com o aumento da
muitos fármacos): Nesse regulador concentração do substrato, já que
temos: apenas o valor do k m aparente
aumenta.
1. Inibidores irreversíveis: se unem à
enzima por meio de ligações
covalentes, que são mais estáveis, e a
enzima inibida não recupera sua
função após conectar-se com o
inibidor

2. Inibidores reversíveis: se unem ao

catalisador por meio de ligações não
covalentes, que são mais fáceis de
serem rompidas, possibilitando que a
diluição do complexo enzima-inibidor
restaure a atividade da enzima após a
interação. Os inibidores reversíveis
são classificados em:
Enzimas alostéricas e seus efetores positivos e Os efetores também podem ser classificados
negativos como homotrópicos ou heterotrópicos.

As enzimas alostéricas são muito

 Homotrópicos: o próprio substrato
importantes para a regulação das rotas
atua como efetor e normalmente
bioquímicas no nosso organismo.
causa efeito positivo, pois a sua
ligação à enzima aumenta a afinidade
Enzimas alostéricas são enzimas que
dos outros sítios de ligação. Este é o
contém uma região separada daquela em
chamado efeito da cooperatividade.
que se liga o substrato, na qual pequenas
moléculas regulatórias podem se ligar e
 Heterotrópicos: o efetor é diferente
modificar a atividade catalítica destas
do substrato. Estes são geralmente
enzimas. As modificações no sítio
utilizados pelos sistemas de controle
catalítico podem diminuir ou acelerar a
de alça fechada de feedback negativo:
velocidade da reação.
quando determinado produto, no fim
de uma rota metabólica, está muito
A enzima alostérica é um oligômero,
concentrado, a enzima diminui a taxa
composto de protômeros (locais onde o
de sua síntese.
substrato se liga ao sítio ativo) e do sítio
alostérico, ao qual se ligam de modo não
covalente os efetores positivos e A regulação mediada por zimogênios e por
negativos modificação covalente

As enzimas secretadas na forma inativa,

 Efetores positivos: aumentam a
chamadas zimogênios, sofrem a clivagem
afinidade da enzima pelo
de um fragmento de sua estrutura, o que
substrato, já que ela adquire a
resulta no aparecimento do centro ativo.
forma relaxada, passível de ligação.
Com isso, a enzima passa da forma inativa
(maior atividade enzimática)
para a forma ativa.
 Efetores negativos: diminuem essa
 No trato gastrointestinal esse tipo de
afinidade, e todos os protômeros
regulação é muito comum, por exemplo,
da enzima tornam-se tensos
na conversão do pepsinogênio (inativo) à
(menor atividade enzimática).
pepsina (ativa) pelo ácido clorídrico, no pH
ácido do estômago

 Imagine que a pepsina estivesse o tempo

todo ativa no nosso trato digestivo. Ou que
os fatores da coagulação estivessem o
tempo todo se ativando, produzindo
coágulos. Seria um grande problema para
o organismo. Por isso, essa forma inativa
Mais informações
da enzima é muito importante. É um
controle para que a enzima só atue
quando realmente precisa atuar. Ela está lá
presente. Pronta para agir. Mas, precisa de
um "comando". Após realizar suas funções
 ela volta a ser inativada ou é degradada. E,
assim, o equilíbrio (homeostase) fica
garantido.
Já na modificação covalente, a regulação
ocorre por adição ou remoção de radicais,
normalmente fosfatos, de resíduos de
serina, treonina ou tirosina da enzima.
A velocidade de uma reação pode ser
definida pela quantidade de produto
formado ou pela quantidade de
substrato transformado pela unidade de
tempo.

 Este é o chamado mecanismo de

fosforilação e desfosforilação, catalisado
por proteínas quinases que fosforilam, ou
por fosfoproteínas-fosfatases, que
removem o radical fosfato.

O controle da atividade enzimática em

A atividade de uma enzima pode,
nível gênico é baseado na quantidade de
assim, ser medida pela velocidade da
enzimas presentes e pode ser regulado por
reação que ela é capaz de catalisar. Para
indução (aumento da síntese da enzima)
ser medida recorre-se à medida da
ou repressão (diminuição da síntese).
atividade expressa em unidades
enzimáticas.
 O gene estrutural responsável pela síntese
de certas enzimas é controlado por um
 Unidades arbitrárias: são
segundo gene localizado ao lado do gene
expressas em bases empíricas,
estrutural, denominado operador.
usualmente envolvendo a
quantidade de substrato
 O gene operador pode ser inibido por um
transformado em um tempo de
repressor e, neste caso, não há síntese da
incubação definido e sob
enzima. O repressor é sintetizado por um
condições padronizadas de pH,
terceiro gene, localizado em local afastado
temperatura, concentrações e etc.
do gene estrutural, denominado gene
(Esta unidade chama-se arbitrária
regulador.
por ser estabelecida pelo
Principais propriedade das enzimas pesquisador sem a obediência de
um critério técnico ou científico)
A cinética enzimática estuda a
velocidade das reações catalisadas pelas  Unidade internacional: é
enzimas e o modo pelo qual certos definida pelo número de
fatores conseguem modificar a micromols de substrato
velocidade destas reações. desdobrado ou de produto
formado por um mililitro da
 solução em um minuto em
condições padronizadas de pH e
temperatura. As principais propriedades das enzimas

 Katal: é a unidade enzimática Os catalisadores atuam em reações que,

definida pelo número de mols de em sua ausência, seriam muito lentas
substrato desdobrado ou de
As enzimas produzem resultados
produto formado por litro de
apreciáveis em concentrações ínfimas e
solução em um segundo em
aceleram as reações químicas sem
condições padronizadas de pH e
modificar o estado de equilíbrio por
temperatura.
agirem nos dois sentidos da reação.
Quando se trabalha com purificação de
Os catalisadores não são consumidos
enzimas costuma-se expressar os
nem transformados durante a reação
resultados da medida da atividade
química.
enzimática em atividade específica.

As enzimas são catalisadoras porque

 A atividade específica é o
apresentam as mesmas características
número de unidades
dos catalisadores em geral.
internacionais (UI) por miligrama
de proteínas num mililitro de
 Apenas uma quantidade mínima
material biológico que está sendo
(uma molécula) da enzima catalase
examinado.
decompõe 5 milhões de moléculas
de água oxigenada em um minuto,
A velocidade máxima da reação
em pH = 6,8
enzimática está relacionada com o
número de renovação de uma enzima,
 A renina (enzima dos rins) faz
que expressa o poder catalítico da
coagular 72,3 milhões de vezes o
enzima.
seu peso de leite desengordurado
em 10 minutos, em pH= 5,8 e a
 O número de renovação de uma
40°C de temperatura.
enzima é o número de mols do
substrato transformado em
Ao contrário, porém, dos catalisadores
produto por mol de enzima na
inorgânicos, as enzimas apresentam
unidade de tempo. As unidades do
especificidades para determinadas
número de renovação são
reações ou grupos de reações.
segundos-1 (ou unidade de
tempo-1) Quando se adiciona ácido clorídrico a
uma mistura aquecida de proteína,
triacilglicerol e glicogênio, ocorre
hidrólise dos três compostos: a proteína
 libera aminoácidos,os triacilgliceróis
formam glicerol e ácidos graxos, e o
glicogênio produz glicose.
Tal fato não ocorre quando se adiciona
à mesma mistura uma enzima capaz de
catalisar, seletivamente, a hidrólise do
glicogênio. Neste caso as proteínas e os
triacilgliceróis permanecem inalterados,
enquanto que o glicogênio é totalmente
degradado.
Os fatores que afetam a velocidade das
reações catalisadas por enzimas
Diversos fatores influem na atividade
das enzimas. Dois deles decorrem da
natureza proteica da molécula da
enzima, e dois são consequência da
formação do complexo enzima-
substrato.
pH. As variações de pH afetam
profundamente a ionização dos
grupos amino e carboxílicos
dos radicais dos aminoácidos
colaboradores, auxiliares e de
contato. Essas modificações do
caráter iônico dos radicais
determina uma pronunciada
alteração no efeito catalítico da
enzima por mudança de
conformação da proteína
enzimática.
 Em adição às modificações
puramente iônicas, a molécula
proteica pode sofrer, também,
desnaturação com consequente
perda da atividade. A
desnaturação pode ocorrer
quando o pH do meio se tornar
muito baixo ou muito alto.

1. Fatores decorrentes da natureza

2. Temperatura do meio em que se
proteica das enzimas:
desenvolve a reação enzimática.

a) pH do meio onde atua a

 Quando uma mesma
enzima.
quantidade de enzimas atua
sobre uma mesma
 Quando uma mesma
concentração de substrato no
quantidade de enzimas atua
pH ótimo, mas, em
sobre uma mesma
temperaturas diferentes, há um
concentração de substrato, em
ponto onde a atividade da
diferentes valores de pH do
enzima é máxima, essa região
meio onde a reação se efetua,
é denominada temperatura
há uma região na qual a
ótima da atividade
atividade da enzima é máxima.
enzimática.
Esta região é denominada de
pH ótimo da atividade.
 Muitas enzimas não revelam
atividade a 0°C. Com a
 A estrutura proteica das
elevação da temperatura, a
enzimas explica a influência do
enzima passa a funcionar e a
 atividade cresce à medida que
a temperatura aumenta. Existe
um determinado ponto no qual
o aumento de temperatura, ao
invés de aumentar a atividade
enzimática, causa uma
diminuição e até completa
inativação.
 O aumento da temperatura
determina, também, a
desnaturação da proteína.
 A partir de 45°C a
desnaturação da enzima se faz
rapidamente; aos 55°C a
desnaturação é acelerada, e,
acima deste valor, a enzima
chega à completa inativação
 As enzimas das bactérias que
vivem em ambientes naturais
quentes (bactérias termófilas)
podem conservar a atividade
em temperaturas superiores a
85°C.
2. Fatores decorrentes da formação do
complexo enzima-substrato:
a) concentração do substrato.
 Quando se faz variar a
concentração do substrato
b) concentração das enzimas.
mantendo-se a mesma
concentração da enzima, e a
temperatura e o pH ótimos,
observa-se que a velocidade
da reação aumenta segundo
uma reação linear.
 Porém, no momento em que
esta concentração ultrapassa
um determinado valor, a
velocidade de reação
permanece independente da
concentração do substrato.
 Se a concentração do
substrato for grande, a
concentração do complexo
enzima-substrato será maior,
e, consequentemente, maior
será a velocidade de reação.
 Com a adição de novas
moléculas de substrato,
chegará um momento em que
todas as moléculas da enzima
estarão sob a forma de
enzima-substrato, e, neste
ponto, o acréscimo de maior
quantidade de substrato não
aumenta a concentração do
complexo enzima-substrato e,
portanto, a velocidade
permanece constante.
 Além dos fatores já
mencionados, a atividade das
enzimas depende, também,
da concentração dos
cofatores.
 Fazendo-se variar a
concentração da enzima,
mantendo-se fixa uma alta
concentração de substrato, na
temperatura e no pH ótimos,
verifica-se que a velocidade
 da reação aumenta
linearmente com a
concentração da enzima.

 A influência da concentração
da enzima deve ser medida
em presença de uma elevada
concentração de substrato.

 Entende-se por afinidade da

enzima pelo substrato a maior
ou a menor capacidade da
enzima de se ligar ao
substrato.

 Já o poder catalítico é a
capacidade de uma enzima
em transformar o substrato
ligado no complexo enzima-
substrato (ES) em produto.

Na cinética michaeliana, a afinidade da

enzima pelo substrato e o poder
catalítico da enzima permanecem
constantes quando se faz variar a
concentração do substrato.

Na cinética não michaeliana, a

afinidade da enzima pelo substrato ou o
poder catalítico da enzima sofrem
modificações em função da
concentração do substrato ou outros
modificadores da velocidade (efetores).

Os parâmetros cinéticos de k m e v máx e sua

aplicação sobre a inibição de enzimas

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