BIOLOGIA CELULAR

AULA 4 - COMPLEXO DE GOLGI E TRÁFEGO VESICULAR / ENDOCITOSE E

EXOCITOSE

COMPLEXO DE GOLGI E TRÁFEGO VESICULAR

- tem esse nome em homenagem ao Camillo Golgi - pesquisador que ganhou o
prêmio nobel em 1906 junto com Santiago Cajal (pelo conjunto de informações
sobre o sistema nervoso)
- sistema original por Camillo x coloração com nitrato de prata (desenvolvida por
camillo, não é mais usada por ser tóxico)

aparato interno reticular = golgi

A estrutura de Golgi
- organizada, facilmente observada em microscopia eletrônica
- definição - organela formada por cisternas (sáculos achatados) de forma organizada
- sempre fica com uma região voltada para o núcleo/retículo (cis) e uma voltada para
a membrana (trans)
- veja as diferentes regiões do golgi
 - tudo que sair do reticulo endoplasmático via vesícula vai entrar com a rede
cis do golgi, passa pelas cisternas e sai pela rede trans
- a partir dai ela pode ir para seu destino, qualquer que seja

atenção!
- um modelo do livro que bota uma função para cada parte do golgi

- o que elas me dizem em relação a função do golgi? modificação de açúcares

- vimos na aula passada que quando uma proteína tem uma sequência
(asparagina, x, serina e treonina) a oligossacarina transfere açúcar. a
proteína final tem a mesma cadeia de açúcar? nao; mas quando ela
fosfoglicosilada, quando recebeu a cadeia de açúcar, ele tinha aquela
sequência. depois ele foi modificado nas diferentes cisternas no
complexo de golgi
- ou seja, essa proteína vai passar pelo complexo de golgi e em cada
cisterna sofrerá uma modificação (ou não)
- exemplo: tenho duas proteínas com açúcar ligado, quando elas
chegarem na cisterna a enzima pode reconhecer uma e não
reconhecer a outra… pq??
- as enzimas do golgi reconhecem a estrutura tridimensional da
proteína, e não o açúcar em sí (pois ele estará em todas elas)

Função geral do golgi

- modificação de proteínas que vem do retículo (mais especificamente, seus
açucares)
- como? via fosforilação, sulfatação e glicosilação (o principal)
Diferentes organizações do complexo de golgi nos diferentes tipos celulares
- não tão organizado em outros tipos de células
- célula vegetal - complexo de golgi trafegando via citoesqueleto devido aos
vacúolos (grandes e separam as células)
- célula de mamífero - formatação típica, o padrão
- levedura (s.cerevisiae) - cisternas do golgo dispersas

observe a comparação entre as leveduras

- nem todas vão ter as suas cisternas espalhadas
Glicosilação de proteínas
- relembre! o mecanismo de glicosilação acontece no retículo endoplasmático (a
N-LIGADA - pois o açúcar é transferido pelo aminoácido asparagina) e no golgi (...)
- veja um resumo de comparação (onde acontece, co ou pós, sequência de
aminoácidos e doador do açúcar)

- repare que o doador de açúcares para a proteína é pelo o-ligado (açúcar é

transferido para uma hidroxila de um aminoácido - podendo ser a treonina, serina ou
hidroxila)
- não existe uma sequência de aminoácidos definido para onde esse açucar
vai ser definido
- doador são nucleotídeos (não definidos também)

Veja esta tabela!

- sobre os mecanismos de glicosilação de vertebrados
 - parte em azul
- tipo: glicosilação N-Ligada
- enzima: oligosacariltransferase
- sequência de aminoácidos
- exemplo de proteínas - proteínas nascentes (que estão sendo produzidas)
- parte em vermelho
- exemplos de glicosilação O-Ligada
- um monte de tipo
- um monte de enzimas
- não tem sequência padrão, não tem uma definida
- um monte de exemplo
NÃO EXISTE UM PADRÃO!! O QUE PODEMOS AFIRMAR SOBRE A PARTE
VERMELHA? mecanismo que acontece depois que a proteína está traduzida, não tem uma
sequência de aminoácidos definida, quem doa o açúcar (transferase) são os nucleotídeos

Qual a importância da glicosilação? De termos açúcares em proteínas?

- em uma palavra = reconhecimento

Importante saber
- distribuição das enzimas é muito bem definida, obedece a distribuição do golgi

Comportamento do golgi
- sendo descrito por dois modelos, ambos sendo aceitos
- modelo de maturação de cisterna: a partir do retículo, vão sair vesículas, vão
formar um agrupamento de vesiculas e essa estrutura vai dar origem as
cisternas e rede cis do golgi; essa rede vai maturar em cisterna cis, logo em
cisterna media e depois em cisterna trans - cissternas transitórias /
maturação pois as enzimas sempre estão sendo distribuidas para a cisterna
anterior
 - modelo de transporte vesicular: cisternas fixas e elas vão se
intercomunicador via vesículas indo de um lado para o outro

Importante lembrar
- o golgi e o retículo se comunicam via transporte vesicular

Tráfego intracelular de vesículas

- comunicações entre as organelas da célula
- entre o citosol, mitocôndria, retículo, cloroplasto, peroxissomo - feita
preferencialmente via proteínas canais de membrana
- do retículo em direção a membrana - majoritariamente é feita via vesículas
- entre o citosol e o núcleo - caracterizado por transportes acoplados

- termos sobre as vesículas

- compartimento doador - de onde ela sai
- compartimento alvo - para onde ela está indo (alguma membrana)
- exemplos: em mecanismos de endocitose (membrana doadora - a
membrana plasmática / membrana alvo - lisossomo) e em
mecanismos de exocitose (membrana doadora *** - / membrana alvo
- membrana plasmática)
- vesículas de transporte pois estão transportando algo
- de forma geral, a vesícula não sai da célula! ela libera o que tem dentro de si
para o meio externo e se funde à membrana plasmática!
- existem vesículas que saem da célula, os exossomos (mas nao vem
ao caso agora)
- para que uma membrana doe uma região no formato de uma vesícula, ela precisa
ser curvada - proteínas de revestimento são responsáveis por isso (pois recobrem)
- existem 3 famílias

clatrinas possuem uma estrutura que fica como se fosse umas casinhas de abelha
(facilmente reconhecida na microscopia eletrônica)
a comunicação entre o golgi e o retículo é feita por vesículas que são formadas pro
proteínas de revestimento COP1 / retículo e golgi são formadas por COP2
as clatrinas curvam as vesículas que fazem a comunicação entre a membrana plasmática e
os endossomos, lisossomos, …

Importante saber!
- depois que a vesícula é formada, se desprendendo do compartimento doador e indo ao
compartimento alvo, ela vai se ligar a proteínas motoras do citoesqueleto (como o
microtúbulo)
- rede cis do golgi voltando pro retículo - volta via dineina
- indo para o retículo - vai via cinesina

- cada vez que uma membrana é curvada para colocar em uma vesícula uma carga
para ser transportada, ocorre o gasto de energia
- temos proteínas regulatórias que farão a regulação deste processo - enzimas
que se ligam a GTP e hidrolisa
- para que uma vesícula se forme, precisa estar carregando uma carga, que pode ser
uma proteína de membrana, proteína livre ligada ao receptor e proteína regulatória
- a carga pode ser uma proteína de membrana, uma proteína solúvel ou
- para que uma proteína de revestimento se ligue a uma região de membrana de onde
vai sair uma vesícula é preciso que a proteína de revestimento se ligue a uma
proteína regulatória - quer dizer que a revestimento não reconhecem a membrana
em si, e sim a proteína regulatória;
- como a proteína regulatória para na região de membrana? essas ficam livres,
são solúveis
- na membrana doadora, encontramos um receptor para a proteína regulatória
- ptn regulatória são enzimas que hidrolisam GPT
- quando estão livres e solúveis, estão ligadas a GDP
- quando interage com seu receptor, este além de reconhecer é trocador
(reconhece a ptn regulatória, tira o gdp e substitui por um gtp) - assim a ptn
regulatória muda de conformação, expõe uma alça hidrofobia e fica ancorada
na membrana
- com isso, as proteínas de revestimento começam a se ligar na proteína
regulatória
- na formação de uma vesícula, encontraremos várias proteínas regulatórias,
onde as proteínas de revestimento vão se ligando e essa vai gerando a
curvatura da membrana doadora até que ela se desprenda da membrana
doadora - formando a capa
- com a formação da vesícula, a ptn de revestimento se solta (ptn regulatória
hidrolisa o GTP, alça muda de conformação - se recolhendo - e a ptn
regulatória mete o pé levando junto a de revestimento)
- tudo isso que foi liberado será reciclado em um novo transporte de vesículas
- com vesícula livre, ela vai ser direcionada ao seu compartimento alvo
Como a vesícula sabe para onde ir?
- analogia com a sequência sinal *
- na membrana da vesícula livre, que veio da doadora, temos uma proteína chamada
de “Rab” - cada uma delas corresponde a um endereço
- na membrana alvo, precisamos de um receptor para ela
- a vesícula então interage com a membrana alvo via receptor rab e agora ela
está ancorada

O material precisa ser liberado, como isso ocorrerá?

- membranas precisam fusionar - através de outras proteínas (V-SNARE - na
membrana da vesícula - E T-SNARE - na membrana alvo)
- quando interagem uma com a outra, mudam de conformação e aproximam
as membranas para fusionar
- o que sobra é o complexo VT-SNARE - existem proteínas que desfazem
esse complexo para que ele possa ser aproveitado
- uma mesma membrana pode ser doadora e alvo - depende de qual processo
estou falando (ex. cisterna média do golgi)
Combinação entre os compartimentos
- quando temos uma proteína residente cuja a função é no retículo endoplasmático,
mas ela precisa ser modificada no golgi, o que irá acontecer com ela?
- empacotada via COP 2, será encaminhada para o golgi, modificada no golgi
e precisa voltar
- duas vias : progressiva (reticulo - golgi) e recuperação (que leva de volta ao
retículo)
- como volta? entre o retículo e o golgi circula o receptor KDEL que vai trazer
de volta
- esse receptor fica frequentemente sendo empacotados e sendo
enviados ao golgi
- qual é o compartimento no qual temos uma maior afinidade entre o
receptor KDEL e a proteína que tem a sequência KDEL??? vai ser
maior no golgi pois no golgi é onde ela vai se ligar para trazer, e ela
sofre uma modificação dos açúcares da pt la que aumenta a
afinidade, associado a acidificação do PH
- afinidade tem que ser maior no golgi para levar para o golgi

ATENÇÃO!!
- AS CISTERNAS DO GOLGI SÃO INDEPENDENTE
- MANTIDAS ORGANIZADAS VIA PROTEÍNAS GOLGINAS (PRESENTES NA
MEMBRANA DO COMPLEXO DE GOLGI E RESPONSÁVEIS PELO
EMPILHAMENTO ORGANIZADO)

- QUANDO A CÉLULA ENTRA EM DIVISÃO CELULAR, A ORGANIZAÇÃO DO

GOLGI SE DESFAZ POIS EXISTEM PROTEÍNAS GUINASES QUE FOSFORILAM
AS GOLGINAS E O GOLGI FICAM DISPERSAS
- QUANDO SE ORGANIZAM NAS CÉLULAS FILHAS, FOSFATASES TIRA O
FOSFATO DA GOLGINA E ELE SE REORGANIZA
ENDOCITOSE E EXOCITOSE
- envolve comunicação entre membranas via vesícula

Endocitose
- Processo através do qual a maioria das moléculas é incorporada pelas células
eucarióticas, através de uma invaginação/protusão da membrana plasmática, e a
sua internalização em uma estrutura delimitada por membrana – vesícula.
- membrana doadora é a plasmática, vesícula se encaminha para lisossomo
- mecanismo geral no qual a célula capta moléculas e fluidos no meio extracelular -
via formação de vesícula
- tipos de endocitose - fagocitose e pinocitose
- termos que vem do grego
- pinocitose / via não fagocítica - internalizado em estado líquido
(“beber”)
- fagocitose / via fagocítica- internalizado em fase sólida (“comer”)
- veja as vias
 - atente-se a tabela!

Endocitose - Fagocitose
- mecanismo de endocitose onde ocorre a protusão da membrana - pseudópodes -,
incorpora a partícula, fusiona com o lisossomo e degrada
- etapas da fagocitose
- adesão: ligação do que vai ser fagocitado com a membrana
- englobamento:
- fusão com vesículas contendo enzimas
- degradação
- vesícula formada na fagocitose se chama de fagossomo
- protrusão de membrana sendo mediada pelo citoesqueleto - pela ptn dos
microfilamentos de actina

Endocitose - Pinocitose
- incorporada em fase fluida
- pode ser dividida em:
- macropinocitose: um tipo de pinocitose onde há um prolongamento da
membrana e que gera um tamanho maior de vesícula, mesmo
comportamento de membrana do mediado por clatrina, mas o sinalizador vai
se ligar em regiões diferentes da onde vai ocorrer a protusão, não é
internalizado junto (finalidade de captação aleatória em grande quantidade)
- mediada por clatrina: clatrinas curvam a membrana plasmática; tenho uma
molécula específica e seu receptor, ela vai ser endocitose; leia tabela (ex
incorporação de LDL); dinâmica se liga ao pescoço da vesícula, o que
prende a vesícula na membrana, aproxima as membranas e deixar elas
saírem

- mediada por caveolina: caveolinas são ptn que se ligam na membrana e

geram uma estrutura chamada de garrafa ou frasco; tem como função curvar
a membrana, mas não são classificadas como proteínas de revestimento
pois elas nao levam a formação de uma capa proteica na vesícula; elas tem
uma região no qual se inserem na membrana
Atenção da imagem!
- se tem modificação na estrutura da membrana, sendo protrusão ou envaginação,
veremos microfilamentos envolvidos pois eles tão no cortex celular

Exocitose
- vesículas saindo do golgi em direção a membrana plasmática
- quando pensamos em exocitose, está mandando para fora da célula
- mas o que está na membrana da vesícula se funde à membrana plasmática -
também conhecido como exocitose (um direcionamento para a mp)
- pode seguir dois caminhos distintos
- via constitutiva: lipídios de membrana recém sintetizados se fundindo a mp,
um processo contínuo
 - via regulada: regulada por hormônio ou neurotransmissor; para que essa
vesícula seja encaminhada para membrana alguém tem que dizer pra onde
ela deve ir
vesículas de armazenamento??

- ex: insulina

-
 -
transportadores de glicose

celula nao diminui e aumenta de tamanho, ciclo de exocitose e endocitose