Você está na página 1de 172

TC IIa Imunologia

Sebenta

IMUNODEPRIMIDOS
Baseada no

ABBAS

Autores:
Catarina Jacinto Correia
Filipa Pereira
Helena Couto
Ins Pacheco Nunes
Joana Miranda
Joo Pedro Apolinrio
Joo Pedro Soares
Joo Pedro Sousa

Reviso & Correco:


Manuel Matos
Margarida Nunes
Mariana Gabriel
Marta Bento
Rui Carvalho
Tatiana Oksentyuk
Teresa Perico Pina

Mnica Santos
Rui Carvalho
Margarida Nunes
Realizada em:
Fevereiro de 2012
1

PREFCIO
Imunologia - Uma doena com imunidade adquirida
2 edio: A Imunologia Contra-ataca

Caros colegas,
Existe uma multiplicidade de stios para estudar Imunologia e sabemos que,
devido ao seu imenso valor relativo no exame de Mdulo II a), h a tendncia para a
deixar ficar para trs. Tentmos, por isso, compilar a informao de vrios stios num
s local.
A nossa ideia no era que esta sebenta fosse uma traduo do Abbas, mas
mais um resumo que aborde a matria da disciplina de forma concisa. Juntmos ento
os temas das aulas tericas, os temas principais descritos no livro aconselhado, e
tambm do Arosa, e crimos um ndice que nos parece ser o mais indicado. Para uma
mais fcil navegao, iro notar que no incio de cada tema tm o ttulo
correspondente respectiva aula terica, a data em que foi leccionada e ainda os
recursos que foram usados para aprofundar esse tema.
Esperamos que a sebenta d para desvendar ao mximo os mistrios da
Imunologia no mnimo de tempo possvel. No entanto, se desejarem aprofundar mais
os temas, devero recorrer aos livros aconselhados.
Estamos ainda vossa disposio caso queiram fazer algum reparo,
encontrem algum erro ou qualquer coisa que queiram ver esclarecida. Contactem-nos
pelo nosso mail campus. Caso no o encontrem, utilizem o e-mail da nossa comisso
de curso (comissaodecurso1016@aefml.com).
Nesta 2 edio, ps-exame da 1 fase (e, por isso, com maior conscincia do
que focado no mesmo), procurmos resumir partes excessivamente extensas,
explicar pormenores que nos escaparam e corrigir alguns erros e imprecises.
Realizada no intervalo entre as duas fases, na esperana de ainda servir quem
enfrentar nova provao no dia 2 de Maro, esta nova verso, longe de estar perfeita,
, ainda assim, um ligeiro upgrade em relao sebenta anterior.

Com votos de que o ano de 2012 seja muito bem aproveitado,

Os autores

ndice
T1: Introduo Imunologia .......................................................................... 2
T2: Imunidade Inata........................................................................................... 2
T3 I: Inflamao Resposta Inflamatria ................................................. 2
T3 II: Inflamao Migrao Leuccitos para os Tecidos .................. 2
T4: Homeostasia e Clonalidade ..................................................................... 2
TP4: Introduo/Diferenciao e Activao Linfocitria ................... 2
T5: Activao de Linfcitos T ......................................................................... 2
T6 I: Imunidade Humoral Activao de Linfcitos B e Produo
de Anticorpos........................................................................................................ 2
T6 II: Imunidade Humoral Mecanismos Efectores da Imunidade
Humoral .................................................................................................................. 2
T7: Imunidade Celular Mecanismos Efectores da Imunidade
Mediada por Clulas........................................................................................... 2
T8: Apresentao de Antignios pelo MHC .............................................. 2
T9: Imunodeficincias Primrias.................................................................. 2
T10: Tolerncia .................................................................................................... 2
*Hipersensibilidade ........................................................................................... 2
T11: Memria imunolgica, adjuvantes e vacinas ................................. 2
T12: Imunodeficincias secundrias-HIV/SIDA..................................... 2

Nota: TPs 2,3,5 e 6 abordadas nas aulas tericas correspondentes.

T1: Introduo Imunologia


Data terica de 3 de Outubro de 2011
Captulos do Abbas: 1

Elaborado por: Ins Pacheco

INTRODUO IMUNOLOGIA
Historicamente, imunidade significava proteco contra a doena, mais
especificamente, doena infecciosa. As clulas e molculas responsveis por essa
imunidade constituem o sistema imunitrio, e a sua aco colectiva e coordenada
em resposta introduo de substncias exgenas denominada de resposta
imunitria.
A funo fisiolgica do sistema imunitrio a defesa contra microrganismos
infecciosos. No entanto, at substncias exgenas no-infecciosas podem
desencadear resposta imunitria.
E ainda, mecanismos que tm como finalidade a proteco do organismo face a
ameaas externas, tambm so capazes de provocar dano ao nvel dos tecidos e, at
mesmo, doena.
Em certas situaes, at molculas do prprio podem desencadear respostas
imunitrias (assim chamadas de respostas auto-imunes).
Assim, uma melhor definio de resposta imunitria:

Reaco contra componentes de microrganismos, assim como macromolculas,


como protenas e polissacridos, e pequenos qumicos que so reconhecidos como
estranhos, independentemente das suas consequncias fisiolgicas ou
patolgicas.
Imunologia o estudo das respostas imunitrias no seu sentido mais abrangente e
dos eventos celulares e moleculares que ocorrem quando, e aps, um organismo
contactar com microrganismos ou macromolculas estranhas.

IMUNIDADE INATA E ADAPTATIVA


A imunidade inata proporciona uma primeira linha de defesa contra agentes
patognicos. Consiste num conjunto de mecanismos celulares e bioqumicos que se
encontram presentes antes da infeco e proporcionam uma resposta rpida e pouco
especfica infeco. Estes reagem principalmente aos microrganismos e clulas
danificadas, actuando da mesma forma praticamente independentemente da natureza
da infeco.
Em contraste imunidade inata, existem outro tipo de respostas imunes que so
estimuladas pela exposio a agentes infecciosos, aumentando em magnitude e
eficcia a cada exposio sucessiva. Porque esta forma de imunidade se desenvolve
em resposta infeco e se adapta mesma, denominada de imunidade adaptativa.
As caracterstica que definem esta forma de imunidade:

Especificidade

Memria

Grande especificidade entre uma enorme


variedade molculas.

Resposta imune aumenta em magnitude e


eficcia a cada exposio a um determinado
agente

Capacidade de
distingir o self do
non-self

Capacidade de distinguir entre diferentes


molculas por muito parecidas que sejam.
Habilidade de distinguir as molculas do prprio
organismo dasquelas que lhe so estranhas.

Diversidade

Sistema imunitrio responde a uma grande


variedade de antignios.

Expanso clonal

Aumenta o nmero de linfcitos especificos para


acompanhar o possvel aumento da quantidade
de antignio.

Especializao

Promoo da
Homeostasia
6

Gera respostas optimizadas de acordo com o


tipo de ameaa.
Permite ao sistema imunitrio restituir-se aps
uma resposta para que facilmente se encontre
pronto a responder a uma outra ameaa de
antignios.

T2:
Imunidade
Inataser, entre outros, abordado ao longo desta sebenta)
(O tema
da imunidade adquirida
Data terica de 4 de Outubro de 2011
Captulos do Abbas: 4

Elaborado por: Ins Pacheco

IMUNIDADE INATA
IMUNIDADE INATA (NO-ESPECFICA) CARACTERSTICAS:
Primeira linha de defesa do organismo face invaso por
microorganismos estranhos. Consiste num conjunto de mecanismos de
defesa, celulares e bioqumicos, pr-existentes infeco, que desencadeiam
uma resposta rpida no sentido de prevenir, controlar e minimizar a infeco.
Resposta sem grande especificidade.
No possui memria imunolgica.
Componentes de defesa inata reagem de modo diferente consoante a
infeco. A Imunidade Inata contra micrbios estimula a resposta imunitria
adaptativa (imunidade adquirida), optimizando-a contra diferentes tipos de
micrbios.
Reconhece produtos de clulas mortas ou danificadas, trata de eliminlas e iniciar um processo de reparao dos tecidos afectados. Reconhece
substncias intrnsecas que no se deviam encontrar em tecidos saudveis,
como cristais intracelulares.

COMPONENTES:
1- BARREIRAS ANATMICAS E
FISIOLGICAS:
Pele e mucosas:
o Epiderme: vrias camadas de
clulas epiteliais, sendo a
mais externa constituda por
clulas mortas e por uma
cama impermeabilizante, a
7

queratina.
o Derme: com vasos sanguneos, glndulas sudorparas e folculos pilosos.
Estes contm glndulas sebceas, que produzem sebum. O sebum tem
cidos lcticos e cidos gordos que mantm o pH da pele cido (3-5),
inibindo o crescimento de microrganismos.
o Mucosas: organismos de defesa aguda inata que impedem a entrada de
microrganismos nas mucosas: saliva, lgrimas e secrees mucosas.
Possuem substncias anti-bacterianas e anti-virais.

Movimentos intestinais
Oscilao dos clios bronco-pulmonares
Tosse e espirros
2- BARREIRAS QUMICAS:
Lisozimas (secrees oro-naso-farngicas e lgrimas):
o

Enzimas hidrolticas presentes nas secrees mucosas e nas


lgrimas, capazes de clivar o peptidoglicano.

Enzimas digestivas e pH baixo (sistema digestivo)


Defensinas (pptidos anti-microbianos)
Flora comensal Ex: E. coli (colicinas - protenas antibacterianas)
o

Organismos no patognicos que competem com os patognicos


por superfcies de aderncia e alimento.

3- CLULAS FAGOCITRIAS (NEUTRFILOS, MACRFAGOS), DENTRTICAS


E NATURAL KILLER (NK)
4- VASOS SANGUNEOS (VASODILATAO/VASOCONSTRIO)
5- PROTENAS:
Citocinas (regulam e coordenam actividades das clulas da imunidade
inata):
Interfero:
o

Grupo proteico produzido por clulas infectadas por vrus. Liga-se a clulas vizinhas e despoleta um estado geral anti-vrico.

Sistema Complemento
o

Grupo de protenas serosas que circulam em estado inactivo.


Quando activas, destroem as membranas dos organismos
patognicos.

Proteina C-Reactiva
8

CLULAS FAGOCITRIAS (MACRFAGOS E NEUTRFILOS)


Clulas com funes fagocitrias especializadas, primeira linha de defesa
contra microorganismos que invadem barreiras epiteliais.
Tm como funo interiorizar (fagocitar) microrganismos e elimin-los.
Produzem citocinas que promovem a resposta inflamatria.
Intensificam a funo anti-microbial de clulas no local da infeco.

Outras clulas conseguem, na sua maioria, realizar outras formas de endocitose,


como a endocitose mediada por receptores ou pinocitose.

RECONHECIMENTO DE AGENTES PATOGNICOS

Clula Fagoctica

Microorganismos

PRR

PAMPs ou MAMPs

DAMPs

(Pathogen-Associated Molecular
Patterns)
(Microbe-Associated Molecular
Patterns)

(Damage-Associated
Molecular Patterns)

(Pattern Recognition Receptors)


Receptores para
reconhecimento de padres
Cada receptor reconhece uma
classe de PAMPs comum a
vrios
microrganismos.
Podem ser:

membrane-bound,
como os TLRs (Toll-Like
receptors) ou MRs (Mannose
receptors), encontrados na
membrana celular e em
vesculas endossomais
superfcie das clulas

cytoplasmatic,
como
os
NOD,
presentes
no
citoplasma

P
Padres moleculares
A
associados a patognese
M
Classes de molculas
expressas P
por agentes
patognicos
s
Microrganismos diferentes
podem expressar o mesmo
o
PAMP, reconhecido pelo
mesmo PRR. Assim
sendo, o
u
mesmo PRR pode reconhecer
PAMPs de microrganismos
diferentes.
M

A
M
P
s
(
P
a

Clulas Danificadas

P
Padres moleculares
associados A
a dano celular

M
Molculas expressas por
P
clulas danificadas
ou a
morrer. (nosso expressas
por clulas em apoptose)

o
u
M
A
M
P
s
(
P
a
t

RESPOSTA INATA A INFECES VIRAIS


dsRNA na clula
infectada

Produo de interfero tipo I (IFN)

Activao de clulas
NK - Natural Killer

Morte das clulas


infectadas
(citotoxicidade)

SISTEMA COMPLEMENTO
Grupo de protenas serosas que circulam em estado inactivo. Quando activas,
destroem as membranas dos organismos patognicos e promovem a fagocitose.

10

Vrias dessas protenas plasmticas so activadas em cascata no sentido de


opsonizar* microrganismos, recrutar fagcitos para o local de infeco e, em alguns
casos, eliminar os prprios microorganismos.
Inclui cascatas proteolticas de activao:

PATHWAY
Classical

Alternative

Clssico, porque foi Activado


quando
C3
descoberto primeiro.
reconhece
estruturas
associadas a micrbios.
Protena plasmtica
C1q
detecta C3 encontra-se em baixos
anticorpos ligados nveis sricos pois liga-se
superfcie do agente facilmente
s
superfcies
patognico e liga-se celulares, sendo inibida por
poro Fc dos molculas
reguladoras
anticorpos activando presentes nas clulas prprias
duas protases, C1r dos mamferos.
e C1s que iniciam a
cascata proteoltica Como os micrbios no
que activa o sistema possuem estas molculas, a
complemento.
activao espontnea de C3
amplificada nessas clulas.
Como os anticorpos
naturais IgM so
eficientes na ligao
C1q, o classical
pathway
tambm
participa
na
imunidade inata.

Lectin
Desencadeado
pela
protena
plasmtica
mannose-binding
Lectin (MBL) que,
como o nome indica,
reconhece resduos
terminais de manose
em glicoprotenas e
glicolpidos
de
micrbios e liga-se a
eles.
MASP1 e MASP2 so
activadas
com
funes semelhantes
C1r e C1s associamse

MBL
e
desencadeiam
cascatas proteolticas
semelhantes
ao
classical pathway.

O reconhecimento de micrbios por algum dos trs pathways resulta num


recrutamento sequencial e activao de protenas complemento em complexos de
protases.
ver Terica 6 - Imunidade Humoral Mecanismos Efectores da Imunidade
Humoral

*Opsonizao o processo que facilita a aco do sistema imunolgico por fixar


opsoninas ou fragmentos do complemento na superfcie bacteriana, permitindo a
fagocitose.

11

T3 I: Inflamao Resposta Inflamatria


Data terica de 4 de Outubro de 2011
Captulos do Abbas: 4 (a partir pg. 74)
Captulos do Arosa: 3 (a partir pg. 56)
Elaborado por: Catarina Jacinto Correia

RESPOSTA INFLAMATRIA
Inflamao: Processo de que o organismo dispe para localizar, neutralizar ou
eliminar um agente agressor (viral, bacteriano, outro); i.e., o afluxo de leuccitos,
protenas e molculas do plasma sanguneo ao foco inflamatrio,
desencadeando-se os mecanismos reaccionais que caracterizam este processo.

Calor
Rubor
Edema
Dor

Citocinas pr-inflamatrias

12

REACO INFLAMATRIA
Neutrfilos

Moncitos

Recrutados em 1 lugar

Recrutados depois dos neutrfilos

Permanecem - tempo nos tecidos

Permanecem + tempo nos tecidos


DIFERENCIAO EM MACRFAGOS

No voltam circulao/so eliminados

Podem voltar a circular novas funes

Claro que todo este processo de recrutamento precisa de mediadores e de outros


intervenientes. H, ento, algumas protenas plasmticas que so especialmente
importantes:
Protenas do Complemento
Anticorpos
Reagentes de Fase Aguda
Para alm disso, a passagem para o local da inflamao depende de mudanas
reversveis nos vasos sanguneos do tecido lesado ou infectado, induzidas por
citocinas:
- fluxo sanguneo (devido dilatao arteriolar)
- adeso leucocitria ao endotlio de revestimento dos vasos
- permeabilidade dos capilares e vnulas a protenas plasmticas e fluidos

, assim, essencial ao desenvolvimento do processo inflamatrio o fenmeno da


vasodilatao que constitui, por assim dizer, o primum movens da inflamao.
Esta vasodilatao sobretudo desencadeada por aminas vasoactivas, histamina e
5-hidroxitriptamina (serotonina), libertadas pela desgranulao dos basfilos e
mastcitos tecidulares e plaquetas. A histamina, cujo efeito dominante, tem um
importante efeito vasodilatador, pois promove a contraco das fibras musculares lisas
de alguns esfncteres capilares e venulares, o que favorece o aumento da
permeabilidade vascular e a passagem de plasma para o espao extravascular.
Este processo de activao celular, desencadeado por alguns fragmentos do
complemento, e a gnese de algumas citocinas levam libertao de outros
importantes mediadores da inflamao, de aco mais lenta e sustentada, sobretudo
devido activao do cido araquidnico das membranas celulares.
Activao cido Araquidnico Formao Leucotrienos e Prostaglandinas

Efeitos: Contraco msc.


liso & Vasodilatao

efeito Histamina
13

Estes mediadores da inflamao, juntamente com outros sistemas de enzimas


plasmticos, consolidam o processo inflamatrio que tende a localizar, limitar e
neutralizar o agente agressor. Referimo-nos aos sistemas de coagulao,
fibrinoltico e das cininas e, claro, ao sistema do complemento cujo papel
fundamental de facto, o sistema do complemento essencial aos mecanismos de
imunidade inata mas tambm coopera nos mecanismos celulares e humorais que
levam formao de anticorpos, actuando como um elo de ligao fundamental
entre o processo inflamatrio inicial e os mecanismos imunolgicos adaptativos
(iremos abordar esta temtica mais frente).

MIGRAO CELULAR
De um modo geral a migrao celular processa-se em quatro tempos:
Fixao das clulas circulantes ao endotlio vascular e rolamento sobre este;
Activao;
Adeso mais firme s clulas endoteliais;
Travessia desse endotlio, atradas para o foco inflamatrio sob o efeito dos
estmulos quimiotcticos ali gerados.
Os padres de migrao celular so complexos: dependem no s da variabilidade
das suas molculas de superfcie como da natureza e da densidade das molculas
expressas pelas clulas endoteliais. Assim, por exemplo, as clulas endoteliais das
chamadas vnulas de endotlio alto (presentes em rgos linfides secundrios) so
muito diferentes das clulas endoteliais encontradas em tecidos no linfides. Ou seja,
com este exemplo pretende-se demonstrar que a expresso de novas molculas de
adeso, ou o aumento da sua densidade, nas clulas endoteliais, sob influncia
de citocinas produzidas no foco inflamatrio , assim, um fenmeno que
acompanha o processo inflamatrio no geral.
Para alm da migrao celular, participam activa e decisivamente no processo
inflamatrio as molculas que chegam ao foco da inflamao por transudao do
plasma processo determinado, sobretudo, pelo aumento de permeabilidade
vascular. , assim, possvel a grandes molculas, como anticorpos, componentes do
complemento e molculas de outros sistemas enzimticos do plasma aflurem ao foco
inflamatrio. Assim, geram-se factores quimiotcticos com vrias origens, citocinas e
quimiocinas.
Por sua vez, as clulas que intervm no processo inflamatrio produzem citocinas cujo
papel particularmente importante na sinalizao e interaco celular.

Citocinas Mediadores celulares pequenos, inicialmente derivados de clulas


residentes nos tecidos (macrfagos, mastcitos e clulas endoteliais) em resposta a
um estmulo PAMP ou DAMP. medida que o processo inflamatrio se desenvolve,
as citocinas podero derivar das protenas do complemento ou dos leuccitos que
migraram para os tecidos.

14

CITOCINAS DA IMUNIDADE INATA


Citocina

Origem

TNF*
(tumor necrosis
factor)

Macrfagos, Linfcitos T

IL-1*

Macrfagos, Clulas
Endoteliais, algumas
clulas epiteliais

Quimiocinas

Macrfagos, Clulas
Endoteliais, Linfcitos T,
Fibroblastos, Plaquetas

Alvos e Efeitos celulares


Cls
Endoteliais:
activao

inflamao, coagulao
Neutrfilos: activao
Hipotlamo febre
Fgado: sntese de protenas de fase
aguda
Msculo e Adipcitos: catabolismo
( caquexia)
Outros tipos celulares: apoptose!
Cls.Endoteliais:
activao

inflamao, coagulao
Hipotlamo febre
Fgado: sntese de protenas de fase
aguda
Leuccitos: quimiotaxia, activao,
migrao p/ tecidos

Linfcitos T: diferenciao TH1


Linfcitos T e NK: sntese IFN-,
actividade citotxica
Interferes Tipo I:
Todas as clulas:
IFN-: Macrfagos
IFN-
estado antiviral, expresso MHC I
IFN-: Fibroblastos
IFN-
Linfcitos NK: activao
Macrfagos e Cls. Dedrticas:
IL-10
Macrfagos, Linfcitos T inibio produo IL-12, expresso
de co-estimuladores e MHC II
Fgado: sntese de protenas de
Macrfagos, Clulas
fase-aguda
IL-6*
Endoteliais, Linfcitos T Linfcitos B: proliferao de clulas
produtoras de anticorpos
Linfcitos NK: proliferao
IL-15
Macrfagos, outros
Linfcitos T: proliferao (clulas de
memria CD8+)
IL-18
Macrfagos
Linfcitos T e NK: sntese IFN-
Macrfagos e Clulas
Linfcitos T: manuteno dos
IL-23
Dendrticas
linfcitos produtores de IL-17
Linfcitos T: diferenciao TH1,
Macrfagos e Clulas
IL-27
inibio clulas TH1
Dendrticas
Linfcitos NK: sntese IFN-
*Major Proinflammatory Cytokines (citocinas principais do processo inflamatrio)
IL-12

Macrfagos, Clulas
Dendrticas

CITOCINAS PRINCIPAIS DO PROCESSO INFLAMATRIO: TNF, IL-1 E IL-6


A secreo de citocinas pelas clulas dos tecidos afectados crucial para a resposta
inflamatria aguda. As citocinas mais importantes neste processo so, ento, a TNF, a
IL-1 e a IL-6 que provm, sobretudo, de macrfagos e mastcitos.
15

CARACTERSTICAS DESTAS CITOCINAS


TNF um mediador da resposta inflamatria aguda devido a infeces
microbianas, sobretudo bacterianas. Pode ser,
tambm, denominado TNF- para se distinguir da
linfotoxina ou TNF-, com a qual est intimamente
relacionada. Os receptores para TNF encontramse presentes na maioria dos tipos celulares e so
membros de uma grande famlia de protenas
chamada TNF receptor superfamily; a maioria
destes receptores est envolvida na resposta
imunitria e inflamatria. A produo de TNF pelos
macrfagos estimulada por PAMPs e DAMPs;
TLRs, NLRs e RLRs podem tambm induzir
expresso do gene que codifica o TNF. Assim,
muitos e diferentes produtos microbianos podem induzir a produo de TNF grande
quantidade desta citocina pode ser produzida durante infeces por bactrias grampositivas e gram-negativas, que libertam TLR-ligandos e cido lipoteico das suas
paredes celulares. O TNF ainda um dos principais mediadores do choque sptico.
Mas, como funciona a aco do TNF e dos seus receptores?
Citocinas que se ligam a algum receptor da famlia dos TNF-receptors provocam,
como resposta, o recrutamento de protenas denominadas TRAFs (TNF receptorassociated factors) que vo activar factores de transcrio. Contudo, caso as
citocinas se liguem a outros membros da famlia, como os TNF-RI, iro desencadear o
recrutamento de uma protena adaptadora que por sua vez activar caspases
desencadeando a apoptose celular.
Assim, conclui-se que diferentes membros da famlia de receptores TNF podem induzir
expresso gnica, morte celular ou ambas as coisas, tendo assim funes e
importncias diferentes.

IL-1 um mediador da resposta inflamatria aguda e muitas das suas aces


so semelhantes do TNF. A maior fonte celular de IL-1 so os fagcitos
mononucleares. Contudo, e ao invs do TNF, a IL-1 tambm produzida por muitos
outros tipos celulares (ver tabela das citocinas). Existem duas formas de IL-1: a IL-1
e a IL-1 que, apesar de as suas semelhanas moleculares serem inferiores a 30%,
se ligam aos mesmos receptores celulares de superfcie e tm a mesma actividade
biolgica. A forma activa que mais secretada a IL-1. A produo de IL-1 requer,
normalmente, dois sinais distintos: um que activa a transcrio gnica e produo de
precursor para o polipptido pr-IL-1; outro que que activa o inflammassome para
que este clive o precursor que activar a protena madura para o IL-1. A IL-1
libertada por uma via no clssica porque, contrariamente maioria das protenas,
nem a IL-1 nem a IL-1 possuem sequncias-alvo de sinalizao hidrofbica para
identificar a nascente do polipptido e permitir o seu transporte para a membrana do
RE.
Assim, uma das possibilidades sugeridas para contornar este problema de libertao
da IL-1 a de que esta ser, ento, maioritariamente libertada quando ocorre
16

morte celular das clulas infectadas ou de macrfagos activados. Algumas


bactrias patognicas induzem tanto o processamento de IL- e IL- mediado pelos
inflammassomes nos macrfagos, como a morte celular caspase-1 dependente que
leva libertao de citocinas inflamatrias. O TNF pode, tambm, estimular fagcitos
e outros tipos celulares para produzirem IL-1.
A IL-1 medeia os seus efeitos biolgicos atravs do receptor IL-1 tipo I, um receptor
de membrana que expressado em diversos tipos celulares. Este receptor uma
protena membrana que contm um domnio Ig de ligao extracelular e um domnio
de sinalizao do receptor Toll/IL-1 (TIR) na regio citoplasmtica. Os eventos de
sinalizao que ocorrem quando IL-1 se liga ao receptor IL-1 tipo I so
semelhantes aos desencadeados pelos TLRs e resultam na activao de
factores de transcrio (NF-B e AP-1).

IL-6 outra citocina importante na resposta inflamatria aguda que tem efeitos
a nvel local e a nvel sistmico. Inclui, como efeitos, a sntese de inmeros
mediadores inflamatrios no fgado, a estimulao da produo de neutrfilos na
medula ssea e a diferenciao de linfcitos TH que produzem IL-17. A IL-6
sintetizada por fagcitos mononucleares, clulas endoteliais vasculares, fibroblastos e
outras clulas em resposta a PAMPs, IL-1 e ao TNF.
O receptor para a IL-6 consiste basicamente numa cadeia polipeptdica com um
ligando para a citocina e numa sub-unidade de transduo de sinal. O receptor para a
IL-6 impulsiona uma via de sinalizao que activa o factor de transcrio STAT3.

PAPEL DESTAS CITOCINAS NA INFLAMAO


RECRUTAMENTO DE LEUCCITOS PARA O LOCAL DA INFECO
O recrutamento de um grande nmero de neutrfilos, seguido de moncitos, da
circulao para os tecidos ocorre tipicamente como parte da resposta inflamatria
aguda a infeces ou leses teciduais. O TNF, a IL-1, a IL-6 e as quimiocinas (que so
libertadas no local da infeco) tm variados efeitos nas clulas endoteliais
vasculares, nos leuccitos e na medula ssea que, juntos, aumentam a disponibilidade
de clulas que combatem infeces e reparam tecidos.
Tanto o TNF como a IL-1 induzem as clulas endoteliais das vnulas pscapilares a expressar E-selectin e a aumentar a sua expresso de ICAM-1 e
VCAM-1, ligandos para integrinas leucocitrias. Estas mudanas na adeso
endotelial resultam da activao de factores de transcrio pelo TNF e pela IL-1,
levando transcrio gnica de uma nova molcula de adeso. A expresso de Pselectin tambm induzida nas clulas endoteliais em grande parte devido ao efeito
da histamina e da trombina que estimulam a rpida mobilizao da P-selectin
armazenada nos grnulos das clulas.
TNF e IL-1 estimulam, ainda, diversos tipos celulares para que estes secretem
quimiocinas como as CXCL1 e CCL2 que se ligam a receptores nos neutrfilos e
17

moncitos, respectivamente, e aumentam a afinidade das integrinas


leucocitrias aos seus ligandos estimulando, ento, o movimento direccional
dos leuccitos. O aumento da expresso de selectina, integrina e quimiocinas leva a
um aumento da adeso dos neutrfilos e moncitos s clulas endoteliais e promove a
sua transmigrao atravs das paredes dos vasos.
A aco do TNF no endotlio e nos leuccitos essencial para a resposta
inflamatria local aos agentes microbianos. Se uma quantidade inadequada de
TNF estiver presente (ex. pacientes tratados com bloqueadores dos TNF ou em
ratinhos com knockout do gene para o TNF) uma das consequncias ser uma falha
no processo inflamatrio e na conteno de infeces.
Para alm disto, TNF, IL-1 e IL-6 podem ainda entrar na medula ssea e estimular a
produo de neutrfilos e, assim, aumentar o suprimento celular que pode ser
recrutado para combater infeces.

FAGOCITOSE E MORTE MICROBIANA ATRAVS DE CLULAS FAGOCTICAS


ACTIVADAS
Neutrfilos e Macrfagos que so recrutados para os locais de infeco ingerem
micrbios em vesculas atravs de um processo denominado fagocitose. Estas
duas linhagens celulares expressam receptores que especificamente
reconhecem os microrganismos estranhos e se ligam a eles (primeiro passo da
fagocitose ligao aos receptores).
Os receptores existentes nas membranas destas clulas podem ser:

PRRs (inclui lectinas do tipo-C e scavenger receptors)


Receptores de alta afinidade para opsoninas, inclundo anticorpos, protenas
do complemento e lectinas plasmticas. Estes receptores so cruciais para a
fagocitose de diferentes microrganismos que esto revestidos por opsoninas.
Um dos mecanismos mais eficientes para opsonizar microrganismos revestilos com anticorpos.

A partir do momento em que um microrganismo ou uma partcula se liga aos


receptores dos fagcitos, a membrana plasmtica na regio do receptor comea a
redistribuir-se e estende-se at formar uma projeco volta do
microrganismo/partcula, formando de seguida uma vescula intracelular. Esta
vescula, denominada fagossoma, contm a partcula estranha e separa-se da
membrana plasmtica.
Os receptores celulares de superfcie, para alm de permitirem a fagocitose, permitem
tambm a activao de um processo de sinalizao que estimula a actividade antimicrobiana dos fagcitos. O material fagocitado destrudo ao mesmo tempo que se
formam pptidos atravs das protenas dos micrbios que so apresentadas aos
linfcitos T para se iniciar a resposta imunitria adaptativa.

18

Macrfagos e neutrfilos activados matam os microrganismos fagocitados


atravs da aco microbicida de molculas presentes nos fagolisossomas.
Diversos receptores que reconhecem estes microrganismos (incluindo TLRs,
receptores acoplados a protena-G, anticorpo Fc, receptores C3 do complemento e
receptores para citocinas) funcionam de forma a activar os fagcitos para que estes
destruam o invasor. A fuso dos vacolos fagocticos (fagossomas) com os
lisossomas resulta na formao de fagolisossomas onde a maioria dos mecanismos
microbicidas esto concentrados. Existem trs tipos essenciais de mecanismos com
aco microbicida:
Reactive Oxygen Species (espcies de oxignio reactivas) macrfagos e
neutrfilos activados convertem oxignio molecular em espcies de oxignio
altamente reactivas (ROS) que so agentes oxidantes altamente reagentes que
destroem microrganismos. O processo atravs do qual estas espcies de
oxignio so produzidas denominado respiratory burst dado que ocorre
durante a respirao celular (quando o oxignio consumido). A gerao de
ROS txico, comummente vista como a principal funo da phagocyte
oxidase (enzima oxidase-fagocitria) no , contudo a nica funo; esta
enzima ainda responsvel pela manuteno das condies dentro dos
vacolos fagocticos necessrias actividade das enzimas proteolticas. A
oxidase cria, assim, um gradiente electroqumico atravs da membrana do
vacolo cujo resultado o aumento do pH e da osmolaridade dentro do prprio
vacolo, mudanas necessrias actividade de elastase e da catepsina G.
1. xido Ntrico os macrfagos tambm produzem muitas espcies reactivas
de nitrognio, maioritariamente xido ntrico, atravs da aco de uma enzima
chamada inducible nitric oxide synthase (iNOS), que uma enzima
citoslica que est ausente nos macrfagos em repouso mas que pode ser
19

induzida em resposta a produtos microbianos que activam TLRs. Basicamente,


a iNOS cataliza a converso de arginina em citrulina, libertando xido ntrico
em forma de gs livre. No fagossoma, o NO pode ser combinado com
perxido de hidrognio ou superxido e produzir, assim, peroxonitratos
altamente reactivos que levam destruio dos microrganismos.
Enzimas Proteolticas
macrfagos e neutrfilos
activados produzem diversas
enzimas proteolticas que
funcionam
para
destruir
microrganismos. Uma das
enzimas mais importantes
nos neutrfilos a elastase
que mata diversos tipos de
bactrias;
outra
enzima
importante a catepsina G.

Quando os neutrfilos e os macrfagos so activados de forma extrema, estes


mecanismos podem causar leses no hospedeiro saudvel atravs da libertao
das enzimas lisossomais, ROS e xido ntrico. Os produtos microbicidas destas
clulas no distinguem entre tecidos do prprio organismo e tecidos estranhos.
Como resultado, quando estes produtos entram no ambiente extracelular podem
causar leses teciduais graves nos tecidos do prprio hospedeiro.

OUTRAS FUNES DOS MACRFAGOS ACTIVADOS


Para alm de matarem o material fagocitado, os macrfagos so ainda importantes
para outras funes de defesa do organismo contra infeces.
Estas funes so sobretudo mediadas pelas citocinas que eles produzem que, em
conjunto com as quimiocinas, melhoram a resposta inflamatria contra micrbios e
permitem um maior nmero de leuccitos e protenas plasmticas no local de infeco.
Os macrfagos activados tambm produzem factores de crescimento para os
fibroblastos e clulas endoteliais, participando assim na remodelao dos
tecidos aps infeces e leses.

20

CONSEQUNCIAS SISTMICAS E PATOLGICAS DA RESPOSTA


INFLAMATRIA AGUDA

TNF, IL-1 e IL-6 produzidos durante a resposta imunitria inata a uma infeco
ou leso de tecidos tm efeitos sistmicos que contribuem para a defesa do
hospedeiro e so responsveis por muitos dos sinais de infeco e inflamao.
Podem ter efeitos positivos que ajudam no combate da seleco ou efeitos
patolgicos.

TNF, IL-1 e IL-6 actuam no hipotlamo para induzir um aumento na


temperatura corporal febre. Estas citocinas so, por isso, denominadas de
pirognios endgenos. A produo de febre em resposta ao TNF, IL-1 e IL-6
mediada pelo aumento da sntese de prostaglandinas por clulas
hipotalmicas citocino-estimuladas. A febre traz vantagens que no so ainda
bem compreendidas mas pensa-se que esto relacionadas com uma melhoria
nas funes metablicas das clulas imunitrias e talvez na criao de
condies menos favorveis para os microrganismos. Pode, contudo, ser
tambm considerado um efeito patolgico caso atinja valores que desregulem
o organismo a tal ponto que ponha em risco de vida o hospedeiro.
IL-1, TNF e IL-6 induzem a expresso de reagentes de fase-aguda, incluindo
CRP, SAP e fibrinognio, pelos hepatcitos e a sua libertao para a corrente
sangunea. CRP e SAP tm papis protectores nas infeces e o fibrinognio
contribui para a homeostase e reparao tecidual.
Em caso de infeces severas, o TNF pode ser produzido em grandes
quantidades e causar anormalidades sistmicas e patolgicas. Se o estmulo para
21

a produo de citocinas for suficientemente forte, a quantidade de TNF produzida


pode ser to excessiva que ao ser posta em circulao na corrente sangunea ir
actuar em locais distantes como hormona endcrina. As suas principais aces
sistmicas so:
Inibio da contractilidade do miocrdio e do tnus do msculo liso, resultando
numa demarcada diminuio da PA, ou at mesmo em choque;
Causa trombose intravascular, sobretudo devido perda de propriedades
anticoagulantes normais do endotlio TNF promove a expresso de tissue
factor, um potente activador da coagulao, e inibe a expresso de
trombomodulina um inibidor da coagulao. Estas alteraes endoteliais so
exacerbadas pela activao dos neutrfilos, levando a um plugging vascular. A
abilidade do TNF de causar necrose tumoral um resultado da trombose dos
vasos sanguneos.
Produo prolongada de TNF causa um desperdcio de massa muscular e
adiposa, tambm denominado de caquexia. Este desperdcio resulta de uma
supresso do apetite induzida pelo TNF e uma supresso da sntese da
lipoprotena lpase.
Outra consequncia nefasta da sobre-actuao das citocinas pode ser um
agravamento do choque sptico.
O choque sptico uma complicao sistmica de spsis provocada por
inmeras bactrias e que pode ser causado por LPS libertado por bactrias
gram-negativas (choque endotxico) ou cido lipoteico por gram-positivas.
Pode ser caracterizado pelo colapso vascular, coagulao intravascular
disseminada e distrbios metablicos e deve-se ento sinalizao induzida
por LPS ou cido lipoteico que leva produo de TNF e outras citocinas,
incluindo IL-12, IFN- e IL-1. A concentrao srica de TNF pode ser preditiva
do outcome de infeces bacterianas graves.

A inflamao aguda pode ainda causar leses nos tecidos devido aos
mecanismos efectores que os fagcitos usam para matar os microrganismos
dado que so altamente txicos para os tecidos hospedeiros. As enzimas
proteolticas e as ROS produzidas pelos fagcitos e que se acumulam nos locais das
infeces podem lesar as clulas do hospedeiro e degradar matriz extracelular se
estiverem em grandes quantidades, especialmente quando h uma resistncia
microbiana e a infeco se prolonga continuando a estimular uma resposta imunitria
inata. De facto, muitas das manifestaes patolgicas associadas a infeces devemse s respostas inflamatrias e no aos efeitos txicos dos microrganismos em si.
Inflamao aguda pode ainda causar leses teciduais que podem desencadear
doenas auto-imunes, caso em que os neutrfilos e macrfagos ficam activados
parte da estimulao do sistema imunitrio pelos antignios do prprio
organismo. Tal como na inflamao induzida por infeco, TNF, IL-1, IL-6 e IL-12
so os indutores-chave da doena auto-imune.

22

INFLAMAO AGUDA VS INFLAMAO CRNICA


Quando a reaco inflamatria no suficiente para neutralizar ou eliminar o agente
agressor, a permanncia de inflamao permite estabelecer resposta imune
adaptativa:
Resposta Humoral (com anticorpos), Resposta Celular Aco Citotxica

Inflamao Aguda

Inflamao Crnica
Desenvolve-se aps estado de
inflamao aguda quando infeco no
eliminada - Tardia
Maior perodo de durao
Envolve recrutamento e activao de
moncitos e linfcitos; [neutrfilos]
Sofre remodelao tecidual com
angiognese e fibrose
Reaco Imunolgica Adaptativa

Desenvolve-se em minutos a horas Imediata


Pode manter-se durante dias
Recrutamento da 1 linha de defesa
sobretudo neutrfilos
Sem alteraes estruturais
Reaco Imunolgica Inata

Componentes da
resposta imunolgica

Resposta Inata ou
Natural

Resposta Adaptativa ou
Adquirida

Ocorrncia Temporal
Barreira Fsica e Qumica
Clulas Fagocticas
NK/NKT
Linfcitos T
Linfcitos B
Anticorpos
Complemento
Citocinas

Imediata
+
+
+
- (excepto: T)
- (excepto: B-1)
- (excepto: naturais)
+
+

Especificidade

Largo Espectro
(pouco especfica)

Tardia
+
+
+
+
+
+
+
Restrita
(antignios particulares
para um dado agente
patognico; detalhes
estruturais)
+
+ (clonal)

Memria Imunolgica
Amplificao
+ presente; - ausente

23

T3 II: Inflamao Migrao Leuccitos para os


Tecidos
Data terica de 4 de Outubro de 2011
Captulos do Abbas: 3
Captulos do Arosa: 3.3
Elaborado por: Teresa Perico Pina

MIGRAO DOS LEUCCITOS PARA


OS TECIDOS
MOLCULAS DE ADESO E SEUS LIGANDOS, E QUIMIOCINAS E
SEUS RECEPTORES
O recrutamento dos leuccitos do sangue para os tecidos depende da adeso destes
ao endotlio das vnulas e do seu movimento atravs deste ultimo e da membrana
basal subjacente para o tecido extravascular. Este processo requer vrios passos,
cada um controlado por diferentes molculas (molculas de adeso e quimiocinas).
Embora haja diferentes tipos de leuccitos, o processo bsico de migrao
semelhante. No entanto, as molculas expressas variam de tipo para tipo, resultando
em diferentes propriedades de migrao. Para que ocorra migrao so necessrias
molculas de adeso, e os respectivos ligandos, entre os leuccitos circulantes e as
clulas do endotlio. Estas molculas pertencem a duas famlias: as selectinas e as
integrinas (NOTA: As quimiocinas NO so molculas de adeso!). A expresso
destas molculas varia entre os tipos de leuccitos e diferentes locais nos vasos
sanguneos.

SELECTINAS E SEUS LIGANDOS

As selectinas so molculas de adeso presentes na membrana plasmtica que


se ligam a ligandos glicdicos. Medeiam um passo inicial, de baixa afinidade
entre os leuccitos e o endotlio.

As selectinas so expressas nas clulas endoteliais enquanto os seus ligandos


so expressos na superfcie dos leuccitos.

O endotlio expressa 2 tipos de selectinas: P-selectinas e E-selectinas.

24

A P-selectina armazenada em grnulos citoplasmticos e distribuda pela


superfcie das clulas endoteliais em resposta a produtos microbianos, citocinas,
histamina (libertada pelos mastcitos) e trombina (gerada na coagulao
sangunea).

A E-selectina sintetizada e expressa na superfcie do endotlio 1 a 2h aps


deteco (e como resposta a esta) de IL-1, TNF e produtos microbianos como o
LPS.

Os ligandos para as selectinas existentes nos leuccitos so grupos glicdicos


existentes em glicoprotenas membranares dos granulcitos, moncitos e em
algumas clulas T efectoras e de memria previamente activadas.

A L-selectina, um caso particular, expressa na superfcie dos leuccitos mas


no nas clulas endoteliais. Os seus ligandos encontram-se expressos nas
vnulas de alto endotlio (high endothelial venules). So importantes no homing
dos linfocitos T naive nos ndulos linfticos (imunidade adaptativa).

Os linfcitos expressam L-selectina e ligandos para as P- e E-selectinas (no


cume das suas microvilosidades, facilitando a interaco com o endotlio).

INTEGRINAS E SEUS LIGANDOS

As integrinas so protenas heterodimricas, existentes na membrana plasmtica


dos leuccitos, constitudas por 2 cadeias polipeptdicas ligadas no
covalentemente. Medeiam a adeso dos leuccitos s clulas endoteliais atravs
de interaces especficas com os seus ligandos.

O domnio citoplasmtico das integrinas interage com o citoesqueleto da clula.

As duas integrinas mais importantes nos leuccitos so a LFA-1 e a VLA-4.

A LFA-1 liga-se ICAM-1, uma glicoprotena membranar expressa em clulas


endoteliais activadas por citocinas, linfcitos, clulas dendrticas e macrfagos,
entre outras.
A poro extracelular da ICAM-1 apresenta uma sequncia homloga e estrutura
terciria semelhante a domnios encontrados nas imunoglobulinas.

Outros dois ligandos para a LFA-1 so a ICAM-2, expressa nas clulas


endoteliais, e a ICAM-3, expressa nos linfcitos.

A VLA-4 liga-se VCAM-1, expressa nas clulas endoteliais activadas por


citocinas de alguns tecidos. Esta interaco importante para o recrutamento de
leuccitos para o local da inflamao.

As integrinas aumentam a afinidade para os seus ligandos como resposta a


sinais intracelulares. Esta activao provocada pela ligao de quimiocinas aos
25

seus receptores (ou do antignio ao receptor no caso dos linfcitos), o que leva
alterao da conformao do domnio extracelular das integrinas para uma
conformao em que a interaco destas com os seus ligandos mais fcil.

As quimiocinas tambm induzem o agrupamento das integrinas na membrana, o


que aumenta a avidez destas para os ligandos no endotlio, fortalecendo a
ligao leuccito-endotlio.

QUIMIOCINAS E SEUS RECEPTORES

Famlia estruturalmente homloga s citocinas que estimula o movimento


leucocitrio e regula a migrao dos leuccitos do sangue para os tecidos. So
polipptidos que contem 2 ligaes bissulfito.

As duas maiores famlias so as CC e as CXC. Regra geral, as CC e seus


receptores medeiam o recrutamento de neutrfilos e linfcitos enquanto as CXC
recrutam moncitos e linfcitos.

As quimiocinas CC e CXC so produzidas por leuccitos e por outras clulas,


como as endoteliais, as epiteliais e os fibroblastos como resposta a estmulos
externos. A sua secreo induzida pelo reconhecimento de micrbios (por
receptores da imunidade inata) e pela presena de IL-1 e TNF. Algumas CC so
tambm produzidas por clulas T previamente estimuladas por antignios
(ligao do recrutamento de leuccitos na inflamao com a imunidade
adaptativa).

Os receptores de quimiocinas pertencem superfamlia das GTP-binding-protein


G-coupled-receptors. So estes receptores que iniciam a resposta intracelular
atravs das protenas G trimricas associadas.

As protenas G estimulam mudanas no citoesqueleto, que levam ao aumento da


motilidade da clula e alterao da conformao das integrinas na sua superfcie,
aumentando a afinidade destas ultimas para os seus ligandos.

Os receptores de quimiocinas diminuem de quantidade na presena de


quimiocinas, o que pode ser um mecanismo de terminao do processo
inflamatrio.

Diferentes combinaes de receptores de quimiocinas esto presentes nos


diferentes tipos de leuccitos, o que leva a padres de migrao diferentes. So
os padres de expresso de receptores que determina que leuccito vai
responder a cada quemoquina.

As quimiocinas tm um papel fundamental:


o

26

So essenciais no recrutamento de leuccitos em circulao do sangue para


os tecidos. A entrada dos linfcitos nos ndulos linfticos e a entrada de

linfcitos, moncitos e neutrfilos nos locais de infeco so controladas por


quimiocinas.
o

As quimiocinas extravasculares estimulam o movimento dos leuccitos e a


sua migrao segundo o gradiente qumico de protenas secretadas,
processo este chamado quimiocinese/quimiotaxia. Assim, os leuccitos so
direccionados para clulas infectadas nos tecidos ou para zonas especficas
nos rgos linfides.

As quimiocinas esto envolvidas no desenvolvimento dos rgos linfodes e


regulam o trfego de linfcitos e outros leuccitos para os tecidos linfodes
perifricos.

As quimiocinas so essenciais para a migrao de clulas dendrticas do


local de infeco para os ndulos linfticos. As clulas dendrticas tm um
papel fundamental na ligao entre os sistemas imunes inato e adaptativo.

MIGRAO DOS LEUCCITOS DO SANGUE PARA OS TECIDOS


INFLAMADOS
INTERACES
LEUCCITOS

LEUCCITO-ENDOTLIO

EXTRAVASAO

DOS

As selectinas, integrinas e quimiocinas controlam em conjunto as interaces


leuccito-endotlio necessrias para a migrao dos leuccitos para os tecidos
inflamados. A migrao feita por uma sequncia de eventos comum maioria
dos leuccitos:

27

1. ROLLING: como resposta a micrbios e/ou citocinas produzidas por


clulas que estiveram em contacto com os micrbios, a expresso de
selectinas na superfcie do endotlio vai aumentar. Os leuccitos, que
se moveram para perto da superfcie endotelial das vnulas (devido
dilatao dos vasos e diminuio do fluxo sanguneo nos locais em que
ocorre a resposta imunitria inata) vo se ligar, atravs das selectinas
no endotlio e respectivos ligandos nos leuccitos, ao endotlio. Como
esta ligao de baixa afinidade, os leuccitos vo se ligando e
desligando sucessivamente, rolando ao longo da superfcie endotelial.
2. AUMENTO DA AFINIDADE DAS INTEGRINAS: no local da infeco,
como resposta a estmulos patognicos ou endgenos, as clulas vo
produzir quimiocinas. Estas vo ser transportadas para as vnulas ps-capilares e vo se ligar a proteoglicanos nas paredes destas. Uma vez
fixadas, vo se ligar aos seus receptores na membrana dos leuccitos
em rolling, alterando a conformao e distribuio das integrinas nas
membranas destes, o que aumenta a afinidade das integrinas para os
ligandos destas.
3. ADESO DOS LEUCCITOS AO ENDOTLIO MEDIADA POR
INTEGRINAS: simultaneamente com a activao das integrinas, o TNF
e a IL-1 (citocinas) vo tambm aumentar a expresso de ligandos para
as integrinas no endotlio (maioritariamente VCAM-1 e ICAM-1).
Estas alteraes vo levar a que os leuccitos adiram firmemente ao
endotlio, com a reorganizao do seu citoesqueleto, e sua disperso
pela superfcie endotelial.
4. TRANSMIGRAO DOS LEUCCITOS ATRAVS DO ENDOTLIO:
geralmente, os leuccitos atravessam a parede das vnulas entre
clulas endoteliais (migrao paracelular). Para que isto acontea,
necessria uma quebra transitria e reversvel das junes de
aderncia que mantm as clulas endoteliais fixas umas s outras.
Embora seja muito menos comum, j foi provado que por vezes os
leuccitos atravessam a clula endotelial em si (migrao transcelular).

A especificidade existente na migrao leucocitria deve-se expresso de


diferentes combinaes de molculas de adeso e de quimiocinas em cada
tipo de leuccito.

MIGRAO DOS NEUTRFILOS E MONCITOS PARA OS LOCAIS DE


INFECO OU DANO NO TECIDO

28

Aps a sua maturao na medula ssea, os neutrfilos e moncitos entram na


circulao sangunea, de onde so recrutados na resposta inflamatria por um
processo semelhante ao descrito anteriormente.

Os neutrfilos e moncitos expressam combinaes distintas de molculas de


adeso e de receptores de quimiocinas (em diferentes locais ou diferentes
alturas), o que os leva a migrar para locais (onde est a ocorrer resposta
inflamatria) diferentes, ou para o mesmo local em alturas diferentes.

Os neutrfilos so os primeiros a ser recrutados, sendo seguidos, umas horas


mais tarde, pelos moncitos, que so recrutados continuamente.

Em alguns casos, os neutrfilos no so recrutados de todo.

Os neutrfilos e moncitos expressam receptores de quimiocinas diferentes, o


que provavelmente o maior determinante da divergncia dos seus
comportamentos no que respeita a sua migrao.

PATOLOGIAS ASSOCIADAS

Existem patologias provocados por defeitos na adeso dos leuccitos s clulas


endoteliais. Estes defeitos devem-se a alteraes no mecanismo da adeso
leucocitria. So conhecidas por Deficincias na adeso leucocitria (LAD Leukocyte
Adhesion Deficiency) 1, 2 e 3. Estas esto descritas na terica n 9, correspondente s
Imunodeficincias Primrias.

29

T4: Homeostasia e Clonalidade


Data terica de 6 de Outubro de 2011
Captulos do Abbas: 1,2,8,9,14
Captulos do Arosa: 3,7,8

Elaborado por: Mariana Gabriel

NOTA INTRODUTRIA:
Neste captulo so focados os pontos essenciais sobre os temas homeostasia e
clonalidade, com base na informao contida (e dispersa por vrios captulos) no
Abbas. Para alm disso, encontram-se inseridas algumas informaes adicionais
(tambm espalhadas em diferentes captulos) do Arosa, e, ainda, informaes da aula
terica. Estas ltimas no se encontram na totalidade, visto que algumas partes da
aula incidiram sobre a parte da investigao laboratorial destes temas, que so de
difcil compreenso apenas atravs dos slides.

INTRODUO
Todas as respostas a antignios, tanto humorais como mediadas por clulas, possuem
um conjunto de propriedades fundamentais que refletem as propriedades dos linfcitos
que medeiam essas mesmas respostas. Nesse conjunto de propriedades
fundamentais encontram-se a Homeostasia e a Clonalidade.

HOMEOSTASIA
PERSPECTIVA HISTRICA
Em 1932, Walter Cannon definiu homeostasia como sendo a manuteno do
equilbrio, ou de condies constantes, num sitema biolgico atravs de mecanismos
de feedback que neutralizam perturbaes que tendem a desequilibrar esse mesmo
sistema.
Cannon, para explicar o que acontecia em sistemas biolgicos, utilizou como
modelo/paradigma a manuteno da presso na mquina a vapor.
Por exemplo, quando a presso inferior necessria para manter a funcionalidade
da mquina a vapor, accionam-se uma srie de engenhos que produzem um aumento
da presso at aos valores desejados. Da mesma forma, quando o nmero de
linfcitos insuficiente para dar resposta a um agente patognico, por exemplo,

30

existem mecanismos que levam a um aumento de produo de linfcitos, tentando-se


assim controlar as perturbaes que ocorrem no organismo.

Como acabmos de ver, esta ideia de regulao por mecanismos homeostticos pode
ser aplicada na imunidade, mais propriamente, na manuteno de um nmero
constante de linfcitos no organismo.

HOMEOSTASIA NUMA RESPOSTA IMUNE


Todas as respostas imunes normais diminuem com o tempo depois de uma ligao a
um antignio, fazendo com que o sistema imunitrio retorne ao seu estado basal, para
que este possa, posteriormente, responder com eficcia a novos antignios a este
processo designa-se de homeostasia.
A manuteno da homeostasia ocorre, principalmente, porque as respostas
imunitrias que so desencadeadas por antignios tm como objectivo elimin-los, o
que, consequentemente, gera um estmulo essencial para a activao e sobrevivncia
dos linfcitos; e tambm porque, simultaneamente, os linfcitos privados desses
estmulos morrem por apoptose.
Os mecanismos homeostticos fazem com que o sistema recupere o estado de
equilbrio e de capacidade reactiva que existia antes do estmulo antignico, o que lhe
permite responder prontamente a novo estmulo, se tal for necessrio, cumprindo
assim o seu papel fundamental de preservar a individualidade biolgica.

CLONALIDADE
Numa resposta imune, os linfcitos T naive so activados por um antignio, entram em
diviso e produzem uma descendncia de clulas-filhas ou clones, processo
designado por expanso clonal.
A expanso clonal dos linfcitos especficos de um antignio a multiplicao de
clulas que especificamente reconhecem, se ligam e so activados por um s tipo de
antignio, constituindo uma famlia de clulas morfolgica e funcionalmente idnticas,
aquilo que se designa de clone. Este aumento nas clulas antignio-especficas
confere resposta imune adaptativa a capacidade de acompanhar o nmero de
agentes patognicos infecciosos, que se dividem rapidamente.
Estudos in vitro indicam que a proliferao como resposta a um antignio promovida
pela IL-2 produzida pelos prprios linfcitos T em diviso (aco autcrina), garantido,
assim, que as clulas T antignio-especficas sejam as que mais proliferam.
31

Porm, in vivo a proliferao induzida por antignios pouco dependente da IL-2,


sugerindo que outros sinais ou factores de crescimento podem contribuir para a
diviso celular, para alm da IL-2.
Antes da exposio ao antignio, a frequncia de clulas T naive especficas para
qualquer antignio de 1 em cada 105/106 linfcitos. Aps a exposio ao antignio, a
frequncia das clulas T CD8+ especficas para determinado antignio pode aumentar
para cerca de 1 em cada 10 a 1 em 3 linfcitos (1/10 a 1/3), enquanto que o nmero
de clulas T CD4+ especficas aumenta para cerca de 1 em cada 1000 linfcitos a 1
em cada 100 linfcitos (1/1000 a 1/100).
Estudos em ratinhos mostraram pela primeira vez esta tremenda expanso da
populao celular antignio-especfica em algumas infeces virais agudas.
Constatou-se ainda que, durante esta expanso clonal, clulas T bystander (no
especficas para o vrus) no proliferaram.
Como se pode ver na figura seguinte, a fase inicial de expanso sempre seguida de
uma fase de contrao durante a qual alguns linfcitos naive inicialmente activados
sofrem morte celular programada ou apoptose, enquanto outros sobrevivem.

A morte e a sobrevivncia so processos dependentes altamente regulados. O


balano entre um e outro ir determinar, em grande medida, a magnitude da resposta
mediada pelos linfcitos T e, em ltima instncia, contribuir para a homeostasia dos
linfcitos T. Anomalias no equilbrio entre apoptose e sobrevivncia podem resultar
quer em doenas linfoproliferativas quer em imunodeficincias de clulas T associadas
a processos auto-imunes.

32

MANUTENO DE UM NMERO CONSTANTE DE LINFCITOS


Num estado de equilbrio, o pool de linfcitos naive mantido num nmero constante
porque existe um balano entre a morte espontnea dessas clulas e a produo de
novas clulas.
O turnover celular, referido na imagem abaixo, a substituio de clulas
envelhecidas por novas clulas e ocorre em cerca de 1% dos linfcitos por dia. De
uma forma simples, podemos dizer que a quantidade de linfcitos que morre
naturalmente igual s quantidades de linfcitos resultantes da produo nos rgos
linfides primrios e da proliferao por expanso clonal.

Qualquer perda de linfcitos leva a uma proliferao compensatria das clulas que
sobrevivem a essa perda, aumentando, assim, a quantidade de linfcitos. Por
exemplo, se clulas naive forem transferidas para um ratinho que possui uma
deficincia linfocitria, os linfcitos que foram transferidos comeam a proliferar e sua
quantidade aumenta at que se atinja, aproximadamente, o nmero de linfcitos que
se encontrariam num ratinho sem linfopnia. Este processo designado de
proliferao homeosttica, uma vez que o objectivo obter o nmero ptimo de
linfcitos de forma a manter a homeostasia do sistema imunitrio.
A proliferao homeosttica parece ser influenciada pelos mesmos sinais que so
necessrios para a manuteno de linfcitos naive, ou seja, o reconhecimento de
alguns autoantignios e citocinas (IL-7, principalmente).

33

COMO ESTUDAR/INVESTIGAR
LINFCITOS T?

OS

MECANISMOS

DE

MANUTENO

DE

Atravs de enxertos de timo: se, em ratinhos, aumentarmos o nmero de timos, o


nmero de linfcitos existentes aumenta, mas no directamente proporcional, como
se pode verificar no grfico a seguir.
Ao aumentar a produo tmica, a proliferao dos linfcitos diminuir por feedback
negativo, para que no se gerem mais clulas do que aquelas que morrem
naturalmente.

COMO DEMONSTRAR O FEEDBACK?


Atravs da quantificao da proliferao por diluio de CFSE (fluorocromo que marca
clulas em proliferao) e linfopenia induzida (radiao que far diminuir o nmero de
linfcitos). Primeiro, induz-se a linfopenia, em ratinhos, e posteriormente, contam-se as
clulas marcadas (linfcitos em proliferao).
Nesta experincia laboratorial verificou-se um aumento da proliferao linfocitria.
Com a ideia de turnover celular em mente, inferimos que ao aumentar a morte celular,
a proliferao de clulas sobreviventes tambm ir aumentar, estimulada pela IL-7 e
por ligandos MHC-pptido, num esforo de restabelecer o nmero de linfcitos normal.

34

CONCLUSES
O mecanismo de feedback negativo, essencial para a regulao homeosttica de
linfcitos, depende da densidade/nmero de clulas.

A IL-2 tem um papel importante na activao e proliferao de linfcitos T e a IL-7 na


manuteno de um nmero normal de linfcitos homeostasia.
Foi provado que as clulas T reg Fox p3+ controlam a expanso das restantes clulas
CD4+.
A diversidade de uma populao de linfcitos quantificada atravs da anlise da
expresso de diferentes CDR3 (regio de hipervariabilidade) por Imunoscope. Isto
feito atravs da interpretao de grficos semelhantes a estes:

Em que mais picos correspondem a maior nmero de diferentes CDR3, logo, maior
diversidade
35

TP4: Introduo/Diferenciao e Activao


Linfocitria
Captulos do Abbas: 8
Captulos do Arosa: 11
Elaborado por: Joo Pedro Sousa

NOTA INTRODUTRIA:
Este captulo tem como objectivo abordar as temticas que, apesar de no terem sido
abordadas nas tericas, foram o foco de muitos dos trabalhos realizados nas aulas
terico-prticas, em particular da 4 aula, sobre o Desenvolvimento e Activao
Linfocitria.
Posto isto, vamos centrar-nos apenas no Desenvolvimento Linfocitrio.

DESENVOLVIMENTO
LINFOCITRIO
O processo que d origem a linfcitos, B e T, capazes de reconhecer antignios
especficos denomina-se de desenvolvimento ou maturao linfocitria. Deste
processo, fazem parte mecanismos que permitem: o desenvolvimento de linhagens
diferentes de linfcitos a partir dos mesmos progenitores; o rearranjo gentico
necessrio expresso de diferentes receptores, especficos para determinados
ligandos e antignios; a proliferao dos linfcitos com os receptores adequados
aco a que esto pr-destinados e a eliminao de outros, com receptores
inadequados.
O resultado final so linfcitos de vrias populaes distintas, com receptores
devidamente funcionais e capazes de dar uma resposta o mais rpido e eficazmente
possvel presena de antignios estranhos ao organismo.
Neste processo de maturao, muitas fases e mecanismos so comuns a todas as
populaes linfocitrias. Portanto, antes de especificar o desenvolvimento para os dois
diferentes tipos de linfcitos que pretendemos abordar (B e T), convm abordar os
aspectos comuns ao desenvolvimento dos linfcitos em geral.

DESENVOLVIMENTO LINFOCITRIO: VISO GERAL


Todos os linfcitos provm, tal como as restantes clulas do sangue, de clulas
estaminais hematopoiticas (hematopoietic stem cells, ou HSCs). Estas clulas so
pluripotentes e, portanto, no so especficas para qualquer uma das linhagens de
clulas que podem originar. Estas clulas provm quer da medula ssea, quer do
fgado fetal.
36

Posteriormente, as HSCs iro desenvolver-se em progenitores linfocitrios comuns


(CLPs) capazes ento de dar origem a linfcitos T, linfcitos B e algumas clulas
dendrticas.
Os progenitores linfocitrios comuns vo, de seguida, atravessar alguns passos
comuns ao desenvolvimento de todos os linfcitos:
Comprometimento (commitment) dos progrenitores linfocitrios a
uma das duas linhagens linfocitrias, B ou T;
Proliferao, no sentido de aumentar o pool de clulas, quer de
progenitores comuns, quer de precursores j comprometidos a uma
linhagem;
Rearranjo gentico sequencial e expresso dos genes que
codificam os receptores prprios a cada populao linfocitria
Seleco, no sentido de preservar apenas os linfcitos com receptores
eficazes e eliminar receptores que reconhecem antignios self (do
prprio organismo)
Diferenciao dos linfcitos B e T nas suas diversas subpopulaes;
Migrao para os rgos linfides perifricos (gnglios), onde
aguardam activao por outros factores.
A localizao anatmica onde ocorre o desenvolvimento varia consoante o tipo de
clula que vo originar e o estado da sua maturao. De um modo geral, aps o
commitment, os precursores de linfcitos B terminam o seu desenvolvimento na
medula ssea, ao passo que os precursores de linfcitos T (ou timcitos) migram para
o timo no sentido de continuar a sua maturao.

COMMITMENT
O processo que define a linhagem a que pertence cada progenitor linfocitrio
comum depende de diversos receptores superfcie das clulas e de factores de
transcrio. So fundamentais, por um lado, para induzir protenas essenciais
diferenciao e ao rearranjo gentico. Por outro, vo tornar os genes que codificam os
37

receptores correctos acessveis a essas mesmas protenas isto feito


descondensando a cromatina em pores particulares do DNA do progenitor
linfocitrio. Assim sendo, num progenitor de linfcitos B, o locus codificante das
imunoglobulinas (Ig) libertado; nos precursores de linfcitos T, corresponde poro
codificante do TCR (T-cell receptor).

Para os linfcitos T (excepto os NK), o Notch-1, em colaborao com o GATA-3,


que compromete um progenitor a esta linhagem. No caso dos linfcitos B, destaca-se
a aco dos factores de transcrio EBF e E2A, que vo induzir um outro factor de
transcrio, o Pax-5, e no seu conjunto iro comprometer um progenitor formao de
linfcitos B.

PROLIFERAO
A proliferao garante, como j foi dito, um pool de clulas precursoras considervel,
para que se possa originar uma quantidade aceitvel de linfcitos funcionais (contando
que haver mutaes, nem todos os linfcitos formados inicialmente so devidamente
eficazes, sendo eliminados).
Para promover a proliferao, so necessrios sinais mediados por citocinas.
Experincias permitiram saber que a IL-7, produzida na medula ssea e no timo,
importante sobretudo na proliferao dos progenitores de linfcitos T. A doena da
imunodeficincia combinada severa ligada ao cromossoma X (X-linked severe
sombined immunodeficiency disease) corresponde a uma mutao numa cadeia da IL7, e resulta em graves bloqueios no desenvolvimento de linfcitos T e NK, mas com
normal desenvolvimento de linfcitos B.
A proliferao cessa quando expressa a primeira cadeia do receptor de antignios
especfico. No caso do BCR B-cell receptor, que corresponde Ig -, expressa-se
inicialmente a cadeia pesada do Ig. No caso do TCR, expressa inicialmente a cadeia
do TCR. Este um passo essencial sobrevivncia, expanso e continuao do
desenvolvimento de um linfcito.

REARRANJO GENTICO E EXPRESSO DOS RECEPTORES DE ANTIGNIO


O rearranjo dos genes codificantes dos receptores de antignio, Ig e TCR, tambm
denominado rearranjo V(D)J, importantssimo na gerao de diversidade de
receptores de antignio. Este rearranjo permite obter milhes de receptores
antignicos diferentes a partir do mesmo locus.
Caso contrrio, seria necessria uma poro muitssimo maior de DNA a codificar
estes receptores para que essa variedade ocorresse. Note-se, ainda, que tudo isto
ocorre antes do contacto do linfcito com qualquer antignio.
Esta variabilidade atingida a partir da recombinao de regies/segmentos de genes,
dentro do locus que codifica os receptores. As regies seleccionadas so
denominadas variveis (variable regions, V), de diversidade (diversity, D) e de juno
38

(juction, J). As restantes regies, de domnio constante, designam-se como regies C


(constant). O resultado desta recombinao, devido aco das enzimas RAG1 e
RAG2 (Recombination Activating Gene) um exo novo, funcional, resultante da
juno de um segmento V com um segmento J, ou de trs segmentos, se um
segmento D estiver ainda presente (nem sempre acontece). Este exo ir codificar a
regio varivel de cada receptor de antignio, e ao mesmo tempo conferir
especificidade a esse receptor.
Esta juno aleatria, podendo um segmento V juntar-se com um de vrios
segmentos J ou D, pelo que a variabilidade atingida imensa. Assim sendo, a
variabilidade aumenta consoante o nmero de segmentos V, (D) e J que esto
presentes num determinado locus. No entanto, o factor que mais contribui para a
diversidade nos receptores acaba por ser a adio ou deleo aleatria de nucletidos
nos locais de juno dos segmentes V-D, D-J ou V-J. Esta adio de nucletidos
mediada pela enzima terminal deoxynucleotidil transferase, ou TdT.

Resultante desta diversidade na juno, h uma regio de hipervariabilidade em todos


os receptores Ig e TCR, localizada na juno do segmento V com o segmento
constante C, denominada CDR3. a regio mais importante na determinao da
especificidade de um receptor ao antignio.
Inicialmente, todas as clulas possuem a mesma linhagem de genes, a ocupar sempre
as mesmas posies no DNA. S aps este rearranjo so criados os genes que
verdadeiramente codificam os receptores de antignio. Claro est, nem todos os
receptores expressos aps o rearranjo so teis ou funcionais, pelo que grande parte
destes linfcitos eliminada nos processos de seleco.

SELECO
Vrios mecanismos no decurso da maturao linfocitria checkpoints - permitem
que apenas linfcitos com os devidos receptores, capazes de reconhecer antignios
estranhos e, alm disso, de no reconhecer antignios self, sobrevivam e proliferem
39

futuramente. No geral, muitos desses mecanismos dividem-se em processos de


seleco positiva e processos de seleco negativa. O primeiro induz mecanismos
de sobrevivncia, ao passo que o segundo activamente provoca a morte celular de um
linfcito indevidamente desenvolvido. Estes processos sero descritos com maior
detalhe mais frente, relativamente a cada um dos tipos de linfcitos, B e T.
De seguida, apresenta-se um esquema que resume alguns dos processos que
regulam e seleccionam a populao linfocitria no organismo.

DIFERENCIAO
No final do desenvolvimento, sero obtidas no apenas duas populaes de linfcitos,
B e T, mas vrias subpopulaes dentro de cada uma das duas principais. Assim
sendo, um linfcito B pode desenvolver-se num linfcito B folicular, num linfcito B-1,
ou num linfcito B de zona marginal. Por sua vez, encontramos quatro subtipos de
linfcitos T: CD4+, CD8+, linfcitos T e linfcitos T NK.

Agora, iremos abordar em particular alguns aspectos especficos do desenvolvimento


dos linfcitos B e posteriormente, dos linfcitos T.

40

DESENVOLVIMENTO DE LINFCITOS B
O desenvolvimento dos linfcitos B decorre, na maior parte dos casos, totalmente na
medula ssea, sendo que independentemente da provenincia dos progenitores
linfocitrios comuns, l que terminam a sua maturao em clulas B maduras.
Consideram-se vrias fases no desenvolvimento de um linfcito B, consoante os
marcadores de superfcie que apresentam e pelo receptor que os caracterizam. So
elas:
linfcito pr-B
linfcito pr-B
linfcito B imaturo
linfcito B maduro

Vamos agora descrever o que caracteriza cada uma destas fases e que processos
ocorrem, especificamente, em cada uma.

LINFCITO PR-B
So os linfcitos que se seguem imediatamente ao commitment de progenitores
comuns, correspondendo linhagem precursora de linfcitos B. Distinguem-se de
outros linfcitos imaturos por expressarem CD19 e CD10, entre outros marcadores de
superfcie.
41

Nesta fase, comeam a ser expressadas as protenas Rag, essenciais ao incio do


rearranjo V(D)J dos genes codificantes do receptor Ig. Inicialmente, apenas se inicia
o rearranjo e a expresso da cadeia pesada deste receptor.

LINFCITO PR-B
Estes linfcitos diferem dos anteriores na medida em que j expressam a protena ,
resultado do rearranjo da cadeia pesada do receptor Ig. Assim, pode-se dizer que
expressam Ig - correspondente cadeia pesada do receptor Ig maduro. Esta
associa-se a outras protenas, como a V pr-B e a 5, produzidas pelo pr e prlinfcitos B e anlogas s cadeias leves do receptor Ig, substituindo-as
temporariamente (denominam-se, por isso, cadeias de aluguer). Fazem tambm parte
deste complexo protenas Ig e Ig, que depois iro constituir parte do receptor BCR
maduro. No conjunto, este novo receptor tambm denominado receptor pr-B, ou
pr-BCR.
No se sabe ao certo quais os ligandos deste receptor, ou o que ele reconhece. No
entanto, sabe-se que a presena de um pr-BCR funciona como checkpoint, emitindo
sinalizaes que permitem o avano para a fase seguinte. Mais propriamente,
produzida uma enzima, a BTK (Brutons tyrosine kinase), que a partir deste ponto se
torna importante para mediar sinais do pr-BCR no sentido de regular a sobrevivncia,
proliferao e maturao dos linfcitos pr-B, seja nesta fase ou em fases seguintes
do desenvolvimento.
Alm disso, o pr-BCR tem um papel na continuidade do rearranjo das cadeias que
faro parte do receptor maduro. Isto faz-se de duas formas:
a presena de uma protena produzida pelo rearranjo num dos
cromossomas inibe o rearranjo dos genes que codificam a cadeia pesada
do Ig no outro cromossoma, permitindo que cada linfcito produza apenas
um receptor BCR, mantendo a especificidade deste. Este fenmeno
denomina-se excluso allica. Isto permite, ainda, que o rearranjo seja
terminado caso o primeiro tenha sido mal sucedido, induzindo o rearranjo
no cromossoma restante, ou que a clula sofra apoptose caso ambos os
cromossomas tenham efectuado rearranjos ineficazes.
o Ig vai ainda induzir o rearranjo da cadeia leve do BCR, e inactivar a
expresso das cadeias anlogas que as substituam e que foram
inicialmente produzidas pelo linfcito pr-B (as cadeias de aluguer).

LINFCITO B IMATURO (NAVE)


No estgio seguinte, os linfcitos pr-B adquirem no s um receptor BCR com cadeia
pesada, mas tambm completado o rearranjo e expresso de uma cadeia leve
seja uma cadeia ou uma cadeia (normalmente, s se forma uma cadeia quando o
rearranjo do locus para uma cadeia no foi bem sucedido, e fenmenos de excluso
de isotipo de cadeia leve previnem a expresso de ambos os tipos de cadeia leve).

42

Em ambos os casos, estamos perante uma molcula IgM completa. A partir deste
ponto, o linfcito denomina-se linfcito B imaturo.
A molcula de IgM, em associao com as protenas Ig e Ig, vai servir como ponto
de ancoragem do antignio, conferindo a especificidade a este. Se o linfcito, nesta
fase, no for reactivo a antignios self, so emitidos sinais pelo BCR que permitem a
sua sobrevivncia e cessam a expresso das protenas Rag, impedido o posterior
rearranjo de quaisquer genes de Ig.
Nesta fase, no h proliferao ou diferenciao perante o contacto com antignios,
dado que uma reaco intensa com antignios na medula ssea significaria
demasiada reactividade com antignios self, e portanto iria induzir edio do receptor
(veremos melhor mais frente) ou morte celular. Pelo contrrio, se os linfcitos nesta
fase forem pouco reactivos com antignios self, migram para o bao onde vo
completar a sua maturao.

LINFCITO B MADURO
Quando falamos de linfcitos B maduros, consideramos diferentes subpopulaes,
com diferenas na sua origem, diferenciao e mesmo nos locais anatmicos de
maturao. Assim, distinguimos:

Linfcitos B foliculares (FOB)


Linfcitos B-1 (B1-B)
Linfcitos de Zona Marginal (MZB)

43

LINFCITOS B FOLICULARES
A maioria dos precursores de linfcitos B do origem a linfcitos maduros deste tipo
os quais expressam no s uma cadeia pesada como outra cadeia pesada ,
sendo esta a sua particularidade. Expressam igualmente duas cadeias leves, sejam
ou , e cada uma delas se associa a uma das duas cadeias pesadas.
O resultado a expresso no s de IgM (contendo a cadeia pesada ), como
tambm de um IgD (que contm a cadeia pesada ). Esta transcrio de dois
receptores diferentes provm do splicing alternativo de um mesmo exo VDJ (como
mostra a figura abaixo).

Estes dois receptores de membrana tm a mesma especificidade a um antignio


reconhecem o mesmo, portanto.
No se sabe ao certo os processos de sinalizao que levam expresso tanto do
IgM como do IgD. Mas sabe-se que a sua presena fundamental para permitir ao
linfcito B maduro entrar em circulao e adquirir competncia funcional o que leva
ideia de que o IgD o principal receptor de activao do linfcito B. No entanto, no
surgiram evidncias que distingam o IgM do IgD a nvel funcional.
Os linfcitos B foliculares so, tambm, designados por linfcitos B recirculantes, j
que migram de um rgo linfide para outro, residindo em pequenos nichos
conhecidos como folculos de linfcitos B. A sobrevivncia destas clulas nestes
nichos permitida em parte por citocinas da famlia do TNF, designadas por BAFF ou
BlyS.
As clulas B maduras naive respondem a antignios, e caso no reajam activamente a
um antignio alguns meses aps a maturao, acabam por morrer.
LINFCITOS B-1
Estes linfcitos B so particulares, na medida em que os seus progenitores tm origem
no fgado fetal, e no na medula ssea. A sua constituio e funo esto mais bem
definidas nos roedores, onde a maioria destas clulas expressam CD5 e parecem
formar populaes auto-suficientes no peritoneu e nas mucosas.
44

Estes linfcitos desenvolvem-se mais cedo que os linfcitos B comuns e no


apresentam um grau muito elevado de rearranjo e diversidade na juno, j que a TdT
no expressa no fgado fetal.
Tal como os linfcitos de zona marginal (abordados posteriormente), os linfcitos B-1
secretam anticorpos IgM que reagem com polissacardeos e lpidos microbianos.
Secretam ainda, nas mucosas, anticorpos IgA. Assim sendo, estes linfcitos so
importantes na rpida produo de anticorpos contra microrganismos em
determinados locais anatmicos e tecidos.
No Homem, estes linfcitos foram descritos, mas no expressam CD5. Este, por sua
vez, expresso por linfcitos em transio e algumas populaes de linfcitos B
activos.

LINFCITOS B DE ZONA MARGINAL


Os linfcitos de zona marginar (MZB) expressam, por sua vez, um receptor IgM e o
co-receptor CD21. No Homem, estes linfcitos podem ser encontrados no bao e
ndulos linfticos. Respondem muito rapidamente presena de microrganismos
circulantes atravs da produo de anticorpos IgM. Alm disso, so capazes de
mediar respostas dependentes de linfcitos T.

SELECO DE LINFCITOS B
Alguns dos processos de seleco de linfcitos B tm vindo a ser discutidos at aqui.
O primeiro de todos trata-se, precisamente, da seleco positiva dos linfcitos cujo
rearranjo gentico foi bem-sucedido e que expressaram devidamente o receptor Ig.
Destes so emitidos sinais tnicos BCR no sentido de manter mecanismos de
sobrevivncia da clula e de parar a expresso de protenas RAG, cessando
definitivamente o rearranjo gentico.
Os linfcitos B imaturos que reconhecem antignios self, por outro lado, podem tornarse perigosos (dado o risco de desenvolvimento de doenas auto-imunes). Estes
linfcitos, no entanto, no sofrem imediatamente morte celular: antes disso, so
induzidos a alterar a sua especificidade, por um processo designado edio do
receptor.
Neste processo, o reconhecimento do antignio leva reactivao dos genes RAG e a
novos rearranjos VJ e expresso de uma nova cadeia leve Ig (normalmente,
corresponde cadeia leve ). Isto permite clula expressar um novo receptor, no
sensvel ao antignio self que desencadeou esta alterao.
Por outro lado, se a edio do receptor falhar, induzida a apoptose da clula. Este
processo tambm designado por seleco negativa. Esta induo feita pelos
prprios antignios self, que so abundantes na medula ssea.
45

Assim sendo, e em ambos os processos, os antignios self so eles prprios


responsveis pela tolerncia generalizada que os linfcitos B maduros apresentam
para eles.
Aps a expresso de IgM e IgD (no caso dos linfcitos B foliculares que
correspondem maioria da resposta imunitria humoral), o reconhecimento de um
antignio leva proliferao e diferenciao, no sentido de induzir a resposta
adequada no ocorrem, nesta fase, novos processos de seleco (edio ou
apoptose), pois esta j foi garantida em fases anteriores.

DESENVOLVIMENTO DE LINFCITOS T
De seguida, vamos aprofundar o processo de desenvolvimento e maturao de
linfcitos T, especificamente.
Como j foi referido, o timo o rgo onde se d a maior parte do desenvolvimento
dos precursores de linfcitos T. No timo, estes precursores passam a designar-se
como timcitos. Como sabemos, o timo vai involuindo com a idade: isto traduz-se
num decrscimo de maturao de linfcitos na idade adulta. No entanto, possvel
aos indivduos adultos imunocomprometidos recuperar a funo imunitria atravs do
transplante de medula ssea, o que nos leva a crer que ainda ocorre alguma
maturao linfocitria no timo.
O timo oferece as condies necessrias seja para o transporte entre as diferentes
zonas deste rgo, para a sua proliferao, ou para o prprio desenvolvimento dos
linfcitos T. Este possui clulas dendrticas, macrfagos e clulas epiteliais que
formam redes de prolongamentos citoplasmticos, pelas quais os linfcitos T imaturos
passam e recebem estmulos essenciais maturao. Entre eles, destacamos a
produo de MHCs (Major Histocompatibility Complex), que sabemos serem
essenciais na apresentao de antignios ao receptor TCR. Neste caso, so
importantes no pela apresentao de antignios por si s, mas pelo facto de essa
apresentao precoce no timo ser necessria aos processos de seleco (como
veremos mais adiante). Alm destas, as clulas estromais do timo produzem citocinas
e quimiocinas, responsveis respectivamente pela proliferao de linfcitos e pela
transio do crtex para a medula que estes devem realizar no sentido de completar o
desenvolvimento.
Dentro das citocinas mais importantes, tem-se a IL-7 (que j foi referida
anteriormente). Dentro das quimiocinas, considera-se importante o papel da CCL25,
que se liga ao receptor CCR9 que os progenitores linfocitrios apresentam, permitindo
a migrao destes para o timo. J as CCL19 e CCL21, reconhecidas pelo receptor
CCR7, so importantes na transio do crtex para a medula tmica.
O desenvolvimento dos linfcitos T considera-se dividido em vrias fases, conforme a
expresso dos diferentes componentes que os caracterizam: ou seja, a expresso do
TCR e, se for aplicvel, de CD4 ou CD8. De acordo com este critrio, destacamos
cinco etapas:
46

Linfcito pr-T (duplo-negativo)


Linfcito pr-T (duplo-negativo)
Linfcito T duplo-positivo
Linfcito T imaturo
Linfcito T maduro

LINFCITO PR-T (DUPLO NEGATIVO)


Os linfcitos pr-T so os mais imaturos, estando localizados no crtex tmico,
imediatamente provenientes da medula ssea. So designados como duplonegativos, uma vez que no expressam CD4 nem CD8. Da mesma forma, no
expressam qualquer tipo de receptor TCR, co-receptor CD3 ou cadeias zeta
(estruturas normalmente presentes num linfcito T maduro, como veremos mais
frente).
As primeiras protenas a ser expressas nesta fase so as RAG1 e RAG2, no sentido
de avanar com o rearranjo dos genes codificantes do TCR. Como j referimos, este
rearranjo inicia-se pela cadeia do receptor.

47

LINFCITO PR-T (DUPLO NEGATIVO)


No final da fase pr-T, teremos a expresso da cadeia TCR , pelo que se considera
que estamos perante um receptor pr-TCR dando incio a uma nova etapa no
desenvolvimento de um linfcito T, o linfcito pr-T. Note-se que este ainda se
considera duplo-negativo, pelas mesmas razes que referimos anteriormente (no
apresenta CD4 ou CD8). A constituir o complexo pr-TCR esto tambm cadeias CD3,
cadeias , protena Lck (lymphocyte-specific protein tyrosine kinase) e uma protena
pr-T.
Nesta fase, o pr-TCR tem funes anlogas ao pr-BCR no desenvolvimento dos
linfcitos B. Assim sendo, a formao do complexo pr-TCR importante para mediar
sinais essenciais sobrevivncia dos linfcitos T, proliferao destes, ao incio da
recombinao do locus da cadeia do TCR e a transio da fase de duplo-negativo
para duplo-positivo. Ir, ainda, promover excluso allica no sentido de fechar o
locus da cadeia TCR do cromossoma que no sofreu rearranjo, para que no sejam
produzidas duas cadeias .

LINFCITO T DUPLO-POSITIVO
Esta fase caracteriza-se pela expresso, simultnea, de CD4 e CD8, pelo que se
afirma que estes linfcitos so duplo-positivos (CD4+/CD8+). De seguida, ocorre
ainda o rearranjo do locus codificante da cadeia do TCR, resultando num linfcito T
que expressa CD4, CD8, CD3, cadeias , Lck e um receptor TCR , ou seja, um
receptor TCR completo. Para o rearranjo e expresso da cadeia do TCR, so
expressas novamente protenas RAG.
Ao contrrio do que acontece na expresso da cadeia , no h excluso allica no
caso das cadeias . Logo, um mesmo receptor TCR pode expressar duas cadeias ,
acontecendo em 30% dos linfcitos T maduros.
Tal como seria de esperar, a no-transcrio bem-sucedida de pelo menos uma
cadeia leva apoptose da clula.
Note-se ainda que o rearranjo e expresso do TCR leva deleo do locus que
codifica o TCR impedindo, portanto, que aquele linfcito se desenvolva num
linfcito T (um dos diferentes linfcitos T maduros, como veremos mais frente).
Assim, um linfcito que expresse a cadeia , ou por outras palavras, um complexo
TCR , est comprometido linhagem de linfcitos T CD4+ ou CD8+. E, tal como
ocorre com os linfcitos B, a expresso de protenas RAG termina a este ponto no
havendo hiptese de outro rearranjo gentico.

48

LINFCITO T IMATURO
Nesta fase, que ocorre na transio do crtex para a medula tmica, cessada a
produo de um dos dois co-receptores que tm vindo a ser expressos pelo linfcito
na fase anterior: ou expresso apenas CD4, ou apenas o CD8 denominam-se
single-positive. Este passo fundamental no desenvolvimento futuro de linfcitos T
maduros CD4+ e CD8+. Os processos que levam expresso de um dos co-receptores
e ao cessar da expresso do outro no esto muito bem estudados; surgem, no
entanto, algumas teorias, que iremos abordar mais frente.

LINFCITO T MADURO
Os linfcitos, logo que se tornam positivos apenas para CD4 ou para CD8, completam
a sua maturao a nvel fenotpico. Estruturalmente, esto completos. Esta maturao
acompanhada de uma maturao a nvel funcional, e portanto logo que os linfcitos
T se tornam single-positive, abandonam o timo para os rgos linfticos perifricos e
tornam-se linfcitos T maduros naive. Nesta fase, resta aos linfcitos aguardar por
activao.
Dentro dos linfcitos T maduros, encontramos vrias subpopulaes. Temos vindo a
descrever o desenvolvimento de linfcitos T CD4+ ou CD8+ (os mais comuns e com
papel mais preponderante na imunidade celular), mas outros existem e apresentam
diferenas ao nvel da sua diferenciao, maturao e funo. Assim sendo,
consideram-se:

Linfcitos T CD4+
Linfcitos T CD8+
Linfcitos T
Linfcitos T NK

49

LINFCITOS T CD4+ OU CD8+


O desenvolvimento destes linfcitos decorre, sobretudo, da forma que foi descrita at
aqui. Tm a particularidade de serem restritos a MHCs, na medida em que
necessitam que esta molcula lhes apresente o antignio no conseguindo
reconhec-lo por si s. Esta molcula de MHC no participa apenas na sua funo
imunitria: tambm parte dos fenmenos de seleco, como j vimos antes (vamos
aprofundar, ainda, estes processos de seleco).
Os linfcitos desta linhagem, consoante so positivos para CD4 ou CD8, tm funes
diferentes. Os CD4+, designados como helpers, produzem citocinas em resposta a
estmulos antignicos e expressam molculas efectoras, importantes resposta
imunitria geral (como por exemplo o CD40L). Isto importante, por exemplo, na
mediao da resposta imunitria de linfcitos B, clulas dendrticas e macrfagos. J
os CD8+ adquirem a capacidade de produzir molculas que matam outras clulas.
So, por isso, designadas por clulas T citotxicas.
LINFCITOS T
Todos os linfcitos duplo-negativos possuem, no seu DNA, locus codificantes de
cadeias e . Em 90% dos casos, recombinada e expressa em primeiro lugar uma
cadeia , comprometendo esses linfcitos linhagem de T . Como j foi dito, aps a
expresso da cadeia eliminado o locus codificante da cadeia . No entanto, em
10% dos linfcitos, ocorre em primeiro lugar a expresso de uma cadeia , o que
compromete esses linfcitos linhagem de T .
Estes linfcitos T tm menos diversidade que os , e pensa-se que correspondero a
uma resposta imunitria precoce deteco de microrganismos mais comuns nas
barreiras epiteliais.

LINFCITOS T NK
Estes linfcitos no so restritos a MHC, e expressam TCRs restritos a CD1 (molcula
estruturalmente semelhante a uma molcula de MHC classe I) e um marcador de
superfcie encontrado nas clulas NK (da o nome destes linfcitos T. Ateno: no
confundir os 2 tipos de clulas! As clulas NK pertencem imunidade inata). Assim
sendo, estas clulas reconhecem antignios lipdicos apresentados por molculas
CD1. Estes antignios lipdicos podem derivar de micrbios endocitados ou podem ser
antignios self.
No crtex do timo, linfcitos T duplo-positivos cujos TCR reconhecam molculas CD1
so induzidos a diferenciarem-se neste subtipo de linfcito T. Estas clulas so
capazes de secretar citocinas, participar na defesa contra microrganismos e regular
outras respostas imunes.

50

SELECO DE LINFCITOS T RESTRITOS AO MHC


Os processos de seleco para os linfcitos CD4+ e CD8+ so, em parte, semelhantes
aos de seleco para os linfcitos B e alguns deles foram j mencionados. No entanto,
outros so relativamente mais complexos, e alguns deles ainda esto por explicar.
Veremos os exemplos mais importantes e as teorias que tentam abordar esta
temtica.
Antes de mais, importante ter presente que a seleco de linfcitos T ocorre no timo,
atravs da interaco com molculas de MHC que nele so produzidas. O objectivo
desta seleco obter linfcitos T capazes de interagir com molculas de MHC self,
que apresentem antignios estranhos ao organismo.
Isto atingido, sobretudo, por dois mtodos. O primeiro passa por promover a ligao
do TCR do linfcito a um MHC self, que apresente um antignio self produzido no
timo. Aos linfcitos cujo TCR se liga com pouca reactividade ao MHC permitida a
sua sobrevivncia e proliferao. Este processo designa-se de seleco positiva. Os
linfcitos cujos TCRs no se ligam de todo ao MHC, acabam por morrer (death by
neglect).
Em segundo lugar, tem-se em conta a fora da ligao entre o antignio self e o TCR.
Aos linfcitos cuja ligao com um antignio self muito intensa, induzida a
apoptose estes linfcitos, como fcil perceber, so perigosos, uma vez que podem
induzir doenas auto-imunes. Aos linfcitos cujos TCRs no reconhecem de todo
antignios self, ou a ligao fraca, permitida a sobrevivncia. Este tipo de seleco
designa-se por seleco negativa, e permite a tolerncia a antignios self
caracterstica dos linfcitos T. Esta tolerncia, desenvolvida no timo, designa-se como
tolerncia central.
Este fenmeno pode ocorrer tanto na fase de linfcito T duplo-positivo como na fase
single-positive que imediatamente se segue, sempre na medula do timo. Na medula,
existe uma protena, o AIRE (autoimmune regulator), capaz de produzir uma srie de
pptidos especficos a alguns tecidos que podem ser reconhecidos pelo TCR e que
facilitam este processo de seleco negativa.
Curiosamente, existe um outro destino para clulas capazes de reconhecer antignios
self que no a apoptose: podem diferenciar-se em clulas T reguladoras, que
previnem reaces auto-imunes. No se sabe ao certo o que leva a um destino ou a
outro, mas sugeriu-se que depende da fora da interaco com um antignio self: se
ultrapassar um determinado nvel, induzida a apoptose.
Para alm desta seleco fundamental, outra consequncia resulta da mesma
interaco com MHCs precoce no timo, mais precisamente, do processo de seleco
positiva: cada linfcito diferenciado num de dois subtipos, CD4+ ou CD8+.
Inicialmente, os linfcitos imaturos que passam por este processo so duplo-positivos;
no final, apenas vo apresentar um destes co-receptores.

51

A molcula de MHC que se liga a um linfcito CD4+ no igual molcula de MHC


que se liga a um CD8+. Existem duas classes de molculas de MHC: classe I e
classe II. A primeira, classe I, est associada aos linfcitos T CD8+ e apresenta
antignios provenientes do interior de qualquer clula no organismo. Os MHC classe II
esto associados a linfcitos T CD4+ e apresentam antignios extracelulares que so
capturados por clulas apresentadoras de antignios: apenas estas clulas expressam
MCH classe II.
Tendo isto em conta, aps o processo de seleco positiva, fica definido se aquele
linfcito ser CD4+ ou CD8+. Se for ligado com sucesso a um MHC classe II, ser
CD4+; por outro lado, se ligar a um MHC classe I, ser CD8+.

Dois Modelos Explicativos


No entanto, o que decide a qual dos MHCs se deve ligar um TCR no est bem
explicado. Surgiram dois modelos. O primeiro, probabilstico, afirma que se trata de
um processo aleatrio: um MHC liga-se ao TCR de um linfcito, se for o MHC correcto
sobrevive, e caso contrrio acaba por morrer. Haveria, portanto, uma probabilidade de
50% de um MHC se ligar ao receptor TCR errado (um que estaria destinado a ser
outro tipo de linfcito).
Outro modelo, instrutivo, defende que a ligao de um MHC a um TCR est
dependente da fora ou durao de sinais emitidos pelo MHC. Para compreender
isto, preciso ter em conta que, naturalmente, existem mais CD4 que CD8 expressos
na membrana de um linfcito T duplo-positivo. Assim sendo, e em tom de exemplo, um
MHC classe II emitiria um sinal com fora x para o TCR. Uma vez que o MHC II
interage fortemente com CD4 e com a Lck, e que existem muitos CD4 na membrana
do linfcito, esse sinal seria forte. O linfcito iria interpretar esse sinal forte no
sentido de induzir a expresso de CD4 (activando factores de transcrio como o
ThPok) e parar a produo de CD8, tornando-se CD4+. Pelo contrrio, um MHC I
emitiria um mesmo sinal para o TCR, e esse sinal seria mais fraco que o anterior, j
que h menos CD8 na membrana do linfcito e o CD8 interage pouco com a Lck. Um
linfcito destinado a tornar-se CD8+ iria interpretar esse sinal fraco no sentido de
parar a produo de CD4 e produzir apenas CD8 (activando factores de transcrio
como o Runx3). Este modelo , no geral, mais aceite que o descrito anteriormente.

52

T5: Activao de Linfcitos T


Data terica de 7 de Outubro de 2011
Captulos do Abbas: 9
Captulos do Arosa: 8

Elaborado por: Rui Carvalho

ACTIVAO DE LINFCITOS T
VISO GERAL
A activao inicial dos linfcitos T ocorre nos gnglios linfticos (rgos linfides
secundrios), onde os linfcitos T nave circulam e encontram clulas dendrticas
maduras.

53

Estas clulas dendrticas, apresentadoras de antignios, migraro para os gnglios


linfticos aps encontrarem os antignios nos seus tecidos de origem.
Por exemplo, na pele, os antignios so detectados pelas clulas de Langerhans
(clulas dendrticas) e, caso o antignio se encontre na circulao sangunea,
detectado por clulas dendrticas do bao. De seguida, estas migram para gnglios
linfticos para apresentar o antignio encontrado. As clulas T nave e as clulas
dendrticas maduras (que reconheceram um antignio no seu tecido) vo encontrar-se
nestes rgos linfides secundrios, pois so ambas atradas para l devido a
quimiocinas produzidas nos gnglios linfticos quimiocinese/quimiotaxia.
A activao vai consistir no reconhecimento pelas clulas T nave do antignio
apresentado pelas clulas dendrticas, processo que provocar alteraes que
permitiro que os linfcitos se tornem clulas efectoras ou clulas de memria
especficas para um dado antignio que lhes foi apresentado e, portanto, com
capacidade de migrao e de realizarem a sua funo.
No fundo, o objectivo da activao dos linfcitos T gerar, a partir de um pool
reduzido de clulas T nave, um grande nmero de clulas efectoras com capacidade
de eliminar um dado antignio e uma populao de clulas de memria que
permanecem em circulao durante longos perodos de tempo e que tm a
capacidade de rapidamente responder a esse antignio caso esse seja reintroduzido
no sistema.
A activao vai levar a proliferao celular expanso clonal dos linfcitos T,
resultante de mitoses sucessivas, mediada principalmente por uma combinao de
sinais dos receptores, co-estimuladores e ainda factores de crescimento autcrinos
(produzidos pelos prprios linfcitos), tal como a InterLeucina 2 (IL2).
A diferenciao em clulas efectoras praticamente simultnea e envolve a
aquisio dos mecanismos que iro permitir a estas clulas cumprir a sua funo.

54

Activao

Proliferao e
Diferenciao

Contraco

Memria

Aps a eliminao do antignio, ocorrer apoptose de um grande nmero de clulas:


contraco. Este perodo necessita da expresso de CTLA-4 (CD152) pelos linfcitos
T Helper (tambm encontrada em alguns T Reg). Esta, ao ligar-se s protenas da
famlia B7 de um outro linfcito, iro induzir a sua inactivao funcional (em oposio
ao CD28, que estimula a activao). Intuitivamente se entende que aumentar a
expresso de CTLA-4 pode ser uma medida para combater doenas auto-imunes, ao
inibir-se a activao e proliferao de linfcitos T.

Quando estas clulas reencontram em circulao o antignio para o qual so


especficas ocorre uma outra activao que culminar com a eliminao do antignio.
No fim, restaro as clulas de memria. Para o desenvolvimento destas, h dois
modelos de explicao: um linear (em que as clulas de memria seriam as clulas
efectoras sobreviventes); e um ramificado (em que estas seriam um estado alternativo
da diferenciao das clulas nave), isto devido a fenmenos de transcrio diferentes.
Abordar-se- agora a sinalizao que leva activao dos linfcitos T.

SINALIZAO PARA A ATIVAO DOS LINFCITOS T


Para a proliferao e diferenciao dos linfcitos T so necessrios 3 sinais:
1. Reconhecimento do antignio
2. Co-estimulao
3. Citocinas

RECONHECIMENTO DO ANTIGNIO- sinal 1


O reconhecimento do antignio o primeiro sinal para a activao dos linfcitos T.
Este reconhecimento deve-se apresentao do antignio pelas clulas dendrticas
maduras (que so APCs Antigen Presenting Cells). Esta apresentao feita pelas
molculas do MHC, que um complexo proteico Major Histocompatibility Complex.
O MHC vai apresentar superfcie da clula dendrtica pores peptdicas do
antignio. Existem duas classes de MHC: MHC I e MHC II. O MHC classe I apresenta
pptidos que se encontram presentes
no interior da clula, no citosol,
enquanto que o classe II apresenta
pptidos que resultaram de protenas
endocitadas ou da digesto de
microrganismos fagocitados. Isto ser
importante, pois cada classe de MHC
apresentar antignios a linfcitos T
nave diferentes: MHC I apresenta
antignios a linfcitos T CD8+ e o MHC
II a CD4+, que tero respostas
diferentes na eliminao posterior do
antignio.
O pptido apresentado pelo MHC ser reconhecido pelo complexo TCR/CD3
(TCR: T Cell Receptor).
55

Aos linfcitos T CD4+ sero, ento, apresentados pptidos que podem ser
provenientes, por exemplo de bactrias fagocitadas (b). Para os linfcitos T CD8+, os
antignios apresentados pelas APCs derivam de protenas presentes no interior das
clulas (a) que l se encontram porque estas foram infectadas por um vrus ou porque
fagocitaram uma clula infectada ou tumoral, processando-a e seleccionando o
antignio, apresentando-o no MHC I (fenmeno a que se chama cross presentation
ou apresentao cruzada (c)).

(a) Apresentao de antignios a linfcitos T CD8+ pelo MHC I


(b) Apresentao de antignios a linfcitos T CD4+ pelo MHC II
(c) Apresentao cruzada a linfcitos T CD8+

Apresentao cruzada: Apresentao de pptidos contidos em clulas fagocitadas


(por exemplo, clulas tumorais ou infectadas com vrus) pelas clulas apresentadoras
de antignios atravs do MHC I (em vez do MHC II, como seria de esperar). um
processo essencial para a resposta imunitria a tumores ou a vrus que no infectam
clulas apresentadoras de antignios, sendo necessria, portanto, a fagocitose de
uma clula que contenha protenas virais.

CO-ESTIMULAO sinal 2
Vimos ento que o sinal de activao primrio dos linfcitos T CD8+ a ligao do
complexo TCR/CD3 com as molculas de MHC I com o antignio sinal 1 que
confere especificidade resposta do linfcito T.
No entanto, d-se ainda co-estimulao atravs de sinais acessrios sinal 2 , entre
os quais se destacam os sinais transmitidos pelos co-receptores (por exemplo, CD28,
CD27, CD40L) que se ligam a co-estimuladores presentes na membrana das clulas
apresentadoras de antignios (por exemplo, glicoprotenas da famlia B7).
56

Dos co-receptores, o mais estudado o CD28, cujo mecanismo de transduo de


sinal (sinal 2), desencadeado aquando da ligao a molculas da famlia B7 (CD80 e
CD86), amplifica a mensagem transduzida pelo sinal 1, aumentando a transcrio
gentica.
Esta co-estimulao essencial para a activao dos linfcitos T.
Co-receptores e Co-estimuladores:

CITOCINAS sinal 3
As citocinas tm um papel crtico na activao dos linfcitos T. Provm de clulas
dendrticas ou outras clulas apresentadoras de antignios, mas tambm podem ser
originrias de clulas T Helper sua principal fonte.
, portanto, essencial a influncia das clulas CD4+ diferenciadas (T Helpers) na
activao dos linfcitos citotxicos. Estas clulas iro 1) secretar citocinas promotoras
da transcrio (como a IL-2) e, 2) expressar CD40L, que reconhecido pelo CD40 das
clulas apresentadoras de antignios, induzindo nestas clulas alteraes que as
tornaro mais eficazes na activao dos linfcitos T CD8; induzem, nomeadamente,
uma maior expresso de protenas da famlia B7 e uma maior secreo de citocinas
promotoras de diferenciao. Licensing via CD40

57

RESPOSTAS FUNCIONAIS DOS LINFCITOS T ACTIVAO


DIFERENCIAO DOS LINFCITOS T CD4+
CLULAS HELPER: TH1, TH2 e TH17
As clulas TH1, TH2 e TH17 diferenciadas
desenvolvem-se a partir de linfcitos T CD4+ nave
dependendo da resposta a citocinas produzidas pelas
APCs ou por outras clulas imunitrias e presentes em
fases iniciais da diferenciao.
Estas citocinas sero reconhecidas por receptores
presentes na membrana das clulas CD4+ e induziro
diferenciao consoante a citocina correspondente.
Cada subtipo celular ter um papel diferente na
resposta imunitria:

DIFERENCIAO DOS LINFCITOS T CD8+


CLULAS T CITOTXICAS
A diferenciao de Linfcitos T CD8+ em Linfcitos T Citotxicos (CTLs Cytotoxic T
Cells) envolve a aquisio dos mecanismos que iro permitir a estas clulas cumprir a
sua funo: target cell killing. Assim, ocorre o desenvolvimento de grnulos
citoplasmticos contendo as enzimas granzima e perforina ( necessrio possuir as
duas!).

CRIAO DE CLULAS DE MEMRIA


Algumas clulas T activadas diferenciam-se em clulas de memria de sobrevivncia
prolongada. A sua principal funo constituir uma reserva celular especfica, que, em
caso de nova infeco pelo mesmo agente, tm uma aco bastante mais rpida. A
sobrevivncia destas clulas est dependente de IL-7.
(Ver T7: Imunidade Celular Mecanismos Efectores da Imunidade Mediada por
Clulas )
58

T6 I: Imunidade Humoral Activao de Linfcitos B e


Produo de Anticorpos
Data terica de 13 de Outubro de 2011
Captulo do Abbas: 11

Elaborado por: Joo Pedro Soares

INTRODUO
Dois grandes tipos de antignios podem provocar uma resposta imunolgica
antignios multivalentes (com vrios eptopos semelhantes) de origem microbiana
que actuam directamente no receptor dos linfcitos B (BCR) e antignios proteicos
apresentados por linfcitos T-helper. Neste ltimo caso, os anticorpos produzidos
ligam-se com maior afinidade ao antignio em causa, do que sem a ajuda de
linfcitos T, da que os anticorpos contra protenas antignicas sejam os melhores
mediadores da imunidade humoral.
Neste captulo so descritos os estmulos que induzem a proliferao e diferenciao
de linfcitos B e como esses estmulos influenciam o tipo de anticorpo produzido.

IMUNIDADE HUMORAL
Como j sabido, linfcitos B maduros so desenvolvidos na medula ssea, da qual
partem para colonizar tecido linfide, maioritariamente o bao, onde lhes so
apresentados antignios, atravs das IgM e IgD de membrana. Isto culmina no
desenvolvimento de linfcitos B de memria e plasmcitos, estes ltimos os
produtores de anticorpos.
Depois do reconhecimento antignico, existem mecanismos que orientam para a maior
eficcia: produo de anticorpos que no IgM nem IgD (troca da cadeia pesada e,
portanto, troca do isotipo) e maturao da afinidade, em que os linfcitos produzem
gradualmente anticorpos com mais afinidade.

59

Respostas T-dependentes (nos centros germinativos.)


A descendncia de linfcitos B activados constituir ento quer plasmcitos
produtores de anticorpos quer linfcitos B de memria, ambas com um longo tempo
de vida. Os plasmcitos, que migram para a medula ssea, produzem continuamente,
durante anos, anticorpos que proporcionam uma resposta imediata.
As protenas so antignios timo-dependentes, porque tm de ser reconhecidas e
internalizadas por linfcitos B, e um fragmento desta protena apresentado a
linfcitos T-helper CD4+, que depois activam os mesmos linfcitos B.
A troca de isotipo das Ig (troca da cadeia pesada) resulta de uma estimulao Tdependente, nomeadamente atravs do ligando CD40 (CD40L) (apenas presente na
membrana do linfcito T activado) e das citocinas tambm produzidas pelos linfcitos
T.
Tambm a maturao da afinidade dependente do CD40L, envolve a mutao
somtica de genes Ig V rearranjados em linfcitos B activos, tendo por consequncia a
seleco positiva dos linfcitos B com alta afinidade para o antignio em causa.

Respostas T-independentes
As respostas humorais a antignios no-proteicos, como polissacardeos, alguns
lpidos e cidos nucleicos, ou seja polmeros compostos de numerosas unidades
qumicas repetitivas (so geralmente multivalentes), no requerem linfcitos T-helper
e por isso no induzem memria imunolgica.
Linfcitos B da zona marginal do bao e outros tecidos linfides reconhecem
antignios multivalentes e esto, portanto, associados a respostas T-independentes
(=TI).

60

Clulas B B-1 tambm esto bastante associadas a respostas TI, mas j em


mucosas e no peritoneu.

Podemos distinguir a resposta humoral em primria e secundria. A primria


resulta da activao de linfcitos B naive, ou seja, no estimulados, enquanto a
secundria resultado da expanso clonal de linfcitos B de memria. Assim de
esperar que uma resposta secundria se d de forma mais clere, com uma
produo elevada de anticorpos.

61

De seguida, ser abordado:

A interaco do antignio com os linfcitos B;


o papel dos linfcitos T-helper, no s na apresentao protenas antignicas,
mas tambm nos mecanismos de troca de isotipo e maturao da afinidade;
a resposta T-independente

RECONHECIMENTO DE
ANTIGNIOS E ACTIVAO DOS
LINFCITOS B
INTRODUO
Para iniciar respostas que envolvem anticorpos, existe:
captura e transporte de antignios para reas dos rgos linfides
activao de linfcitos B, em conjunto com outros sinais gerados pela
imunidade inata.
Resposta funcional dos linfcitos B.

CAPTURA DE ANTIGNIOS E APRESENTAO AOS LINFCITOS B


Os linfcitos B residem e circulam pelos folculos dos rgos linfides perifricos em
busca de um antignio que os active. A entrada nos folculos (os linfcitos B passam a
chamar-se foliculares ou
recirculantes) guiada
pela quimiocina CXCL13
segregada pelas clulas
dendrticas e pelas clulas
do estroma do folculo.
CXCL13 liga-se ento ao
receptor de quimiocina
(CXCR5) nos linfcitos B,
o que atrai essas clulas
para os folculos. A
mesma
quimiocina
tambm vai atrair clulas T
activadas para o folculo.
No entanto, a vida dos
linfcitos
B
naive
62

foliculares limitada enquanto no encontram o seu antignio. A sua sobrevivncia


depende de sinais derivados do seu receptor (BCR), assim como de estmulos
recebidos de uma citocina da famlia do factor de necrose tumoral (TNF) denominada
BAFF (factor de activao da cula B da famlia TNF), a qual proporciona sinais de
maturao e sobrevivncia atravs do receptor de BAFF. BAFFe o ligante APRIL
podem tambm activar dois outros receptores, TACI e BCMA, que participam de
estdios mais avanados de activao e diferenciao. Estas citocinas so produzidas
principalmente por clulas mielides no folculo e medula ssea.

Nos rgos linfides perifricos, os antignios, que chegam pelo sangue ou linfa, so
quase sempre capturados pelas clulas dendrticas e ligam-se aos receptores
antignicos dos linfcitos B. As clulas dendrticas podem internalizar e processar o
antignio mas podem, tambm, aproveitar o antignio para a superfcie da clula,
onde ele fica disponvel para os linfcitos B especficos para o antignio.

ACTIVAO DE LINFCITOS B POR ANTIGNIOS E OUTROS SINAIS


A activao dos linfcitos B especficos para o antignio ocorre pela seguinte ordem:
1. ligao do antignio s molculas de Ig da membrana constituindo o complexo
receptor-antignio das clulas B maturas. O receptor antignico do linfcito B
desempenha dois papis essenciais na sua activao:
1.1. O agrupamento (cluster) dos receptores induzidos pelo antignio permite
sinais bioqumicos para as clulas B que iniciam o processo de activao.
1.2. Internalizao do complexo Ig-Ag atravs de vesculas endocticas. As
protenas so processadas a pptidos que vo para a superfcie para
reconhecimento pelos linfcitos Th.
2. Co-receptor CR2 ou CD21 reconhece fragmentos do complemento
(nomeadamente o C3d) ligados ao antignio ou que fazem parte de complexos
imunes que contm o antignio.

63

3. Os receptores Toll-like (TLRs) dos linfcitos B reconhecem os PAMP, que


contribuem para activao de linfcitos Th e para produo de citocinas, APRIL e
BAFF, que induzem respostas linfocitrias B T-independentes.

RESPOSTAS FUNCIONAIS DOS LINFCITOS B AO


ANTIGNICO

RECONHECIMENTO

1. As clulas, anteriormente em repouso,


entram em fase G
2. So produzidas Protenas antiapoptticas (especialmente Bcl-2), o
que aumenta a sobrevivncia das
clulas. Estas podem agora proliferar
e produzir anticorpos.
3. Aumenta a produo de MHC classe
II e B7 coestimuladores, e por isso
que os linfcitos B antignio-activados
so melhores activadores dos Th que
os B naive.
4. Aumenta a expresso de receptores
de citocinas T-derivadas, o que
aumenta a sensibilidade a linfcitos
Th.

Diferentes antignios na ligao cruzada do BCR provocam diferentes tipos de


eventos celulares:

antignios multivalentes provocam proliferao e diferenciao. A


repetio dos eptopos neste tipo de antignios permite ligao cruzada com
receptores antignicos, to eficiente que dispensa a actuao dos linfcitos Th.
antignios proteicos preparam as clulas B para interaces subsequentes
com linfcitos Th, pois so estes que estimulam a proliferao e diferenciao
nas respostas T-dependentes.

Depois de linfcitos B especficos reconhecerem os antignios, os passos


subsequentes na reposta humoral so muito diferentes quando comparamos
respostas T-dependentes com T-independentes:

64

RESPOSTAS COM ANTICORPOS T-DEPENDENTES A ANTIGNIOS


PROTEICOS
SEQUNCIA DE EVENTOS DURANTE RESPOSTAS COM ANTICORPOS
T-DEPENDENTES

1. O antignio capturado por clulas dendrticas (CDs) e


apresentado aos linfcitos Th atravs do MHC classe II; as CDs
passam a produzir ligandos B7, co-estimuladores
2. Os linfcitos Th so activados e induzidos a expressar
protenas, como o caso de CD40L e receptores de citocinas
que, como j vimos, permitem a migrao em direco ao
folculo, atravs do gradiente quimiocintico.
3. Os linfcitos B so ento activados pelo antignio, que est na sua
forma solvel ou mostrado por CDs.
4. Os linfcitos B processam e apresentam o antignio, alteram o seu
perfil de receptores de superfcie para quimiocinas e migram em
direco zona de clulas T do rgo linfide.
5. Linfcitos B e Th activados interagem no interface T-B e as clulas B
so activadas por CD40L e citocinas.
6. Pequenos focos de linfcitos B extrafoliculares formam-se nas zonas
de clulas T, onde ocorre alguma mudana de isotipo e secreo de
Imunoglobulinas.
7. Os linfcitos B activados migram de volta para dentro do folculo.
Formam-se centros germinativos dentro dos folculos e so esses os
locais de extensa mudana do isotipo e mutao somtica que
seleccionam as clulas, levando maturao da afinidade e gerao de
linfcitos B de memria e plasmcitos que migram para a medula
ssea, onde produziro durante anos anticorpos.

ACTIVAO INICIAL E MIGRAO DE LINFCITOS Th e B (activao (I))

Linfcitos Th que tenham sido activados proliferam, expressam CD40L e segregam


citocinas, tambm alteram o perfil de receptores de quimiocinas, regulando
negativamente o receptor de quimiocina CCR7 e aumentando a expresso de CXCR5,
e como resultado deixam a zona de linfcitos T e migram em direco ao folculo.
65

CXCL13, o ligante para CXCR5, segregado por clulas dendrticas foliculares e


outras clulas do estroma folicular e contribui para a migrao de linfcitos T CD4+
activadas para o folculo.
Pelo contrrio, os linfcitos B activados saem do folculo e migram em direco
zona dos linfcitos T, levados pelo gradiente de CCL19 e CCL21, ligandos do mesmo
CCR7. A ltima imagem resume bem esta seco.

EFEITO HAPTENO-TRANSPORTADOR (activao (II))


Os princpios delineados para a
colaborao entre linfcitos T
linfcitos B proporcionam a base
para compreender o efeito
hapteno-carregador.
Haptenos, como o dinitrofenol,
so
pequenos
compostos
qumicos que podem ser ligados
por anticorpos especficos, mas
no so por si s imunognicos.
Se entretanto os haptenos
estiverem
conjugados
com
protenas de transporte, este
conjunto j sim capaz de induzir
uma resposta de anticorpos
especficos para os haptenos.
Primeiro, tais respostas requerem
tanto linfcitos B especficos para o hapteno, assim como Th especficos para a
protena transportadora.
Os linfcitos B detectam o hapteno e endocitam o conjunto hapteno-protena
transportadora. Os pptidos resultantes da destruio da protena transportadora so
apresentados aos linfcitos Th especficos para essa protena, havendo cooperao
entre os dois tipos de linfcitos, para diferentes eptopos do mesmo antignio.
Este efeito a base para o desenvolvimento de vacinas conjugadas, como veremos
mais frente.

PAPEL DO LIGANDO DE CD40 (CD40L) (activao (III))


Como j vimos linfcitos Th activados expressam CD40L que se liga ao seu receptor,
CD40, existente em linfcitos B antignio-estimulados, e essa interaco estimula a
proliferao da clula B e a diferenciao inicial, bem como a formao de um
centro germinativo.

66

Da ligao do CD40L, decorre proliferao e segregao aumentada de Ig. Factores


de transcrio CD40-induzidos so tambm importantes para a formao do centro
germinativo e para a sntese de AID (activation-induced deaminase), crucial para
mutao somtica e troca de isotipo.
Mutaes no gene do CD40L resultam na sndrome de hiper-IgM ligado ao X, que
se caracteriza por defeitos na produo de anticorpos, na troca de isotipo, na
maturao da afinidade e criao de linfcitos B de memria, porque a AID no
activada.

ACTIVAO DE LINFCITOS B EXTRAFOLICULAR ES (activao (IV))


Depois da interaco inicial dos linfcitos B com os Th na fronteira entre o folculo e a
zona dos linfcitos T, uma subsequente activao de linfcitos B pode ocorrer em
duas localizaes diferentes uma fora dos folculos e outra nos folculos, nos
centros germinativos. Assim como os locais, as respostas dos linfcitos B sero
tambm diferentes. Nos focos extrafoliculares a activao geralmente efectuada logo
no princpio da resposta imune; nos centros germinativos, nos quais actuam linfcitos
T helper foliculares, a activao ocorrer dias mais tarde.
H hipermutao dos genes Ig (que compreende a maturao da afinidade), mas em
muito menor extenso que no centros germinativos.

A REACO DOS LINFCITOS B NO CENTRO GERMINATIVO E A FUNO


DOS LINFCITOS TH FOLICULARES (resposta funcional)
Os eventos mais caractersticos da resposta T-dependente incluem:
1. maturao da afinidade
2. troca de isotipo
3. produo de plasmcitos de longa vida
4. produo de linfcitos B de memria
Estes ocorrem primariamente nos centros germinais dos folculos linfides. Alguns
linfcitos T que migram para estabelecer contacto com os linfcitos B, diferenciam-se
em linfcitos T foliculares (Thf), que apresentam nveis elevados do receptor de
quimiocina CXCR5, e so ento levados para os folculos linfides em busca do seu
ligando.
Os mecanismos que levam transformao dos linfcitos T CD4+ em linfcitos Thf e
activao dos linfcitos B pelos Thf ainda no so totalmente conhecidos, mas,
do que j se conhece, participam variadas molculas.

67

Como retratado, o co-estimulador ICOS


essencial para a reaco do centro
germinativo, e a sua ligao com o seu ligando
(presente nos linfcitos B) promove a
diferenciao em linfcitos Thf. A formao
do centro germinativo ento marcantemente
dependente desta clula, nomeadamente pelas
interaces CD40, como se verifica pela
imagem. O CD40L, presente nos linfcitos T,
essencial para a proliferao dos B, assim
como para a troca de isotipo e maturao da
afinidade.

1.TROCA DE ISOTIPO
Como reposta interaco CD40 e s citocinas, alguma da progenia dos linfcitos B,
que produzem IgM e IgD, atravessam pelo processo de troca de isotipo, levando
produo de cadeias pesadas de diferentes classes, como , e . Esta capacidade
dos linfcitos B poderem produzir anticorpos com isotipos diferentes confere uma
plasticidade marcvel em respostas humorais imunes, pelo que os anticorpos tm
diferentes funes efectoras e agentes-alvo.
Deste modo, a resposta a diferentes tipos de microrganismos regulada pelos tipos
de citocinas produzidas pelos linfcitos T, que so activados por aqueles, como fica
resumido na ilustrao em baixo.

68

No caso de bactrias com cpsulas ricas em polissacardeos, a resposta humoral


(T-independente) consiste basicamente em anticorpos IgM, que se ligam bactria,
activam o sistema do complemento e induzem fagocitose por opsonizao; existe
pouca ou nenhuma troca de isotipo para IgG.
J a resposta a outras bactrias e muitos vrus, envolve a produo de IgG, que
impede a colonizao de clulas-hospedeiras e promove fagocitose. Estes agentes
patognicos activam linfcitos Th do tipo TH1, que produzem a citocina IFN- .
A resposta a parasitas maiores, como as tnias, feita maioritariamente por IgE, que
participa na eliminao destes parasitas por parte dos mastcitos e eosinfilos. Estes
parasitas activam os linfcitos Th do tipo TH2, que produzem IL-4, a citocina que induz
troca para IgE.
Especificamente, clulas em mucosas trocam para IgA, que o anticorpo mais
eficientemente transportado pelo epitlio para secrees da mucosa, o que nos
defende contra micrbios que tentam penetrar o epitlio.
A troca para IgA feita pelo TGF- (transforming growth factor) e tambm por
citocinas da famlia TNF, BAFF e APRIL.

Papel da AID na Troca de Isotipo


A interaco CD40 induz a AID (activation-induced deaminase) que crucial para a
troca de isotipo e mutao somtica. Nos casos em que h produo deficiente de
CD40, do seu ligando ou de AID a resposta com anticorpos dominada pelas IgM,
havendo troca de isotipo e maturao da afinidade limitadas.

69

O mecanismo molecular de troca de isotipo o processo em que o exo rearranjado


VDJ, que codifica um domnio V da cadeia pesada das Ig, recombina com uma regio
C do gene, pelo que o DNA presente no intervalo entre o exo e aquela regio
eliminado.
Processo de troca de isotipo:
1. Actuao da enzima RNA polimerase que vai envolver apenas uma cadeia de
DNA, deixando uma ala
aberta de DNA unifilamentar
denominada R-loop.
2. A AID converte resduos de
citosina em uracilo, nesse
R-loop.
3. A enzima uracil N-glicolase
remove os resduos de U,
deixando esses locais livres
de bases azotadas
4. Enzima endonuclease Ape
1, que cliva esses locais livres
que contribuem para quebras
nas duas cadeias, resultando
na eliminao do DNA e na
unio das duas regies
afectadas, fazendo a clula
uso
de
maquinaria
de
reparao.
A ilustrao ao lado resume o
pargrafo anterior.

2. MATURAO DA AFINIDADE

Ocorre ao longo da resposta T-dependente e resultado da mutao somtica dos


genes das Ig mais a seleco positiva que se segue dos linfcitos B que produzem
os anticorpos com a maior afinidade. Ocorre numa maior extenso nos centros
germinativos. O facto de essencialmente envolver linfcitos Th deve-se s
interaces CD40, que so necessrias para induzir AID e proliferao de
linfcitos B.
H que realar trs caractersticas destacveis das hipermutaes:
As mutaes ocorrem em regies V, maioritariamente em regies de
ligao determinantes na complementaridade com o antignio;
H muito mais mutaes em anticorpos IgG que em IgM.
A presena de mutaes est relacionada com a afinidade crescente
dos anticorpos para o antignio que induziu a resposta.
70

No centro germinativo, os linfcitos B so estimulados por IL-21 produzida pelos


linfcitos Thf que induz a apoptose, a no ser que sejam salvas por uma ligao a
um antignio com afinidade.
Com pequenas concentraes de antignio, os linfcitos com mais afinidade ligamse preferencialmente, o que os privilegia selectivamente.
A seleco positiva est relacionada com muitos mecanismos, nomeadamente:
Reconhecimento antignico est relacionado com a produo de
protenas anti-apoptticas (famlia das Bcl-2).
Linfcitos com maior afinidade endocitam preferencialmente antignios
e interagem com os linfcitos Thf, que activam a interaco CD40.
As clulas T expressam o ligando Fas que se liga ao seu receptor nas
clulas B, criando um sinal apopttico. Linfcitos B com maior afinidade,
que melhor reconhecem o antignio, produzem Fas-inibidores, criando
mais presso selectiva sobre os linfcitos com baixa afinidade.
Como bvio, este processo de seleco extremamente ineficiente: milhares de
clulas tm de morrer para privilegiar um grupo de clulas que combater a infeco
com a mxima eficcia e por isso que os centros germinais so locais de extrema
actividade apopttica.
O outro lado da moeda destes mecanismos o risco das hipermutaes ocorrerem em
locus genticos onde no seria suposto, como em oncogenes ou tendo como
resultado anticorpos extremamente auto-reactivos. devido a isto que ocorrem
linfomas malignos e doenas provocadas por auto-imunidade.

3.DIFERENCIAO DOS LINFCITOS B EM PLASMCITOS

Os plasmcitos encontram-se terminalmente no desenvolvimento linfocitrio B e so


gerados depois de sinais dos BCR, CD40, TLRs e outros receptores, que incluem os
das citocinas.
H dois tipos de plasmcitos - os de respostas T-independentes e os de respostas
T-dependentes. Migrando para medula ssea, estas clulas so mantidas por
citocinas da famlia BAFF, que se liga ao receptor do plasmcito BCMA, permitindo
com que estas sobrevivam por longos perodos produzindo anticorpos, durante anos,
muitas vezes durante toda a vida do indivduo.
Para se tornar num plasmcito, o linfcito B passa por vrias processos a clula
aumenta de tamanho drasticamente, aumentando tambm a relao
citoplasma/ncleo. O retculo endoplasmtico torna-se proeminente.
O tipo de imunoglobulinas tambm sofre uma alterao, simples, mas fundamental
as imunoglobulinas tm de passar de membranares sua forma secretada, o que

71

resultado da alterao da poro terminal da cadeia pesada, esta poro


responsvel pela ancoragem membrana).

4. DIFERENCIAO DOS LINFCITOS B EM LINFCITOS B DE MEMRIA E


RESPOSTAS SECUNDRIAS

Alguns dos linfcitos B antignio-activados emergem dos centros germinativos com


a capacidade de sobreviver por longos perodos (porque expressam elevados nveis
da protena anti-apopttica Bcl-2), montando rpidas respostas subsequentemente a
uma apresentao antignica; estas clulas so linfcitos B de memria.
Algumas destas clulas permanecem no rgo linfide onde foram geradas, outras
entram em circulao, patrulhando entre o sangue e os rgos linfides.
A produo de grandes quantidades de anticorpos de alta afinidade muito
acelerada depois de uma exposio secundria, e deve-se aos linfcitos B de
memria.
Este desenvolvimento de memria levado a cabo por respostas T-dependentes.
til na criao de Vacinas Conjugadas: Devido aos casos de bactrias com
cpsulas constitudas por polisacardos, em que os linfcitos T no actuam, criaram-se
vacinas que se baseiam no j falado efeito hapteno-transportador, em que a vacina
contm protenas com a capacidade de se ligarem cpsula, podendo deste modo
activar uma resposta T-dependente, significando mais rapidez e eficcia no combate
ao antignio, permitindo a formao linfcitos B de memria para uma eventual
infeco secundria.

PAPEL DOS FACTORES DE TRANSCRIO NO DESTINO DOS LINFCITOS


B ACTIVADOS (CELL FATE)
semelhana do que acontece com o controlo do cell fate dos linfcitos T, o dos
linfcitos B controlado em grande medida pela expresso de vrios activadores e
repressores da transcrio de DNA
Nos centros germinativos de linfcitos B, os sinais provocados por CD-40 e o receptor
de IL- 21 induzem a expresso de um repressor da transcrio, Bcl-6, que antagoniza
outro repressor, Blimp-1, o qual necessrio para a transformao em plasmcitos.
Isto permite que os linfcitos B, aquando da intensa proliferao nos centros
germinativos no se transformem em plasmcitos numa fase precoce da resposta. J
os linfcitos B dos focos extrafoliculares expressam baixos nveis de Blc-6, a
causa da existncia de plasmcitos de vida curta.
Os dois passos chave para o desenvolvimento de um plasmcito so a perda de
expresso do factor de transcrio, Pax-5 (que necessrio para a manuteno do
72

linfcito B maduro), e a represso de Bcl-6. Durante a diferenciao, o activador da


transcrio IRF4 e o repressor Blimp-1 so induzidos; estes juntos promovem a
expresso e o splicing de XBP-1, um factor de transcrio que desempenha um papel
fundamental na resposta s protenas sem conformao, resultado de uma sntese
proteica massiva. XBP-1 protege ento os plasmcitos de consequncias negativas.
Sendo ainda uma matria incerta, parece que baixos nveis de IRF4 esto associados
a linfcitos B de memria, por sua vez, altos nveis esto associados a diferenciao
em plasmcitos.

Diferenciao
em Plasmcitos

Diferenciao
em Clulas B de
Memria

Diminuio de IRF4

Expresso Pax-5
Represso Bcl-6
Expresso IRF4
Expresso Blimp-1
Expresso XBP-1

RESPOSTAS COM ANTICORPOS A ANTIGNIOS T-INDEPENDENTES


Muitos antignios no proteicos, como os polissacardeos e lpidos estimulam
produo de anticorpos na ausncia de linfcitos Th.

TIPO DE LINFCITOS
T-INDEPENDENTES

QUE

RESPONDEM

ANTIGNIOS

As famlias B1 e da zona marginal dos linfcitos B so especialmente importantes no


que toca a respostas T-independentes, ao contrrio das T-dependentes onde os
linfcito B folicular a famlia maioritria.
So os linfcitos da zona marginal que respondem a polissacardeos antignicos
depois de activados, estes linfcitos do origem a plasmcitos de vida curta que
produzem maioritariamente IgM (h quem lhes chame linfcitos B de memria IgM,
so clulas memory-like, na verdade). Os linfcitos B B-1 representam outra
linhagem que responde a antignios no peritoneu e nas mucosas.
As respostas T-independentes podem ser iniciadas no bao, medula ssea, cavidade
peritoneal e mucosas. Macrfagos localizados na zona marginal dos folculos do bao
so particularmente eficientes a fagocitar polissacardeos. Os antignios podem
persistir por longos perodos superfcie de macrfagos da zona marginal, onde so
reconhecidos por linfcitos B especficos.

73

MECANISMOS DAS RESPOSTAS T-INDEPENDENTES

Os antignios T-independentes, ou seja, polissacardeos, glicolpidos, lpidos e cidos


nucleicos, induzem produo especfica de anticorpos, mesmo em animais aos quais
se fez knock-out de linfcitos T. Estes antignios no podem ser incorporados em
molculas de MHC e, portanto, no podem ser reconhecidos pelos linfcitos Th CD4+.
Por serem multivalentes estes anticorpos activam o BCR de tal forma (mecanismos de
ligao cruzada) que a assistncia de linfcitos T dispensada. Como tambm j
vimos, os polissacardeos activam o sistema do complemento, gerando C3d, que se
liga ao antignio e reconhecido pelo CR2 dos linfcitos B, amplificando ainda mais o
sinal. Tambm temos os TLRs, receptores que reconhecem padres moleculares
especficos de antignios (PAMPs), que facilitam ainda mais a resposta Tindependente.
Apesar de se associar a troca de isotipo a respostas T-dependentes, alguns antignios
T-independentes tm tambm a capacidade de gerar troca de isotipo, obviamente
em muito menor escala. As citocinas produzidas em clulas que no linfcitos T
podem estimular troca de isotipo como j foi descrito, BAFF e APRIL produzidos em
clulas de origem mielide podem induzir sntese de AID atravs do receptor TACI,
da famlia dos receptores BAFF.
As citocinas produzidas nas mucosas por clulas no linfides, como a TGF-, ajudam
a mediar a troca das IgA, o que contribui para a secreo de anticorpos IgA dirigidos a
antignios no proteicos.

FUNES DAS RESPOSTAS T-INDEPENDENTES

A importncia funcional dos antignios T-independentes a defesa contra as paredes


celulares das bactrias, cujos componentes no so proteicos, por isso a defesa
humoral torna-se indispensvel contra bactrias capsuladas.
Os antignios T-independentes contribuem para produo de anticorpos naturais,
que esto presentes em circulao em indivduos normais e aparentemente so
produzidos sem exposio prvia observvel a patognicos; por exemplo: anticorpos
ligados aos grupos sanguneos (A e B).

FEEDBACK DOS ANTICORPOS: REGULAO DE RESPOSTAS IMUNES


POR RECEPTORES Fc
O feedback dos anticorpos o mecanismo pelo qual respostas da imunidade humoral
so ajustadas quando h j uma quantidade suficiente de anticorpo em circulao e
complexos solveis anticorpo/antignio esto presentes. A Ig de membrana dos
linfcitos B e o receptor destes para as pores Fc das IgG (FcRIIB), esto
aglomerados por complexos anticorpo/antignio. Isto activa uma cascata de
sinalizao inibitria que interrompe a activao do linfcito B.

74

T6 II: Imunidade Humoral Mecanismos Efectores da


Imunidade Humoral
Data terica de 13 de Outubro de 2011
Captulos do Abbas: 12
Captulos do Arosa: 7.7

Elaborado por: Margarida Nunes


Neste captulo sero discutidos os mecanismos efectores usados pelos anticorpos
para eliminar antignios:
Neutralizao
Opsonizao
Sistema de Complemento
Imunidade Neonatal

IMUNIDADE HUMORAL
CARACTERSTICAS IMPORTANTES DA DEFESA HUMORAL

A funo principal dos anticorpos neutralizar e eliminar microorganismos e toxinas


microbianas, utilizando vrios mecanismos, como fagcitos e protenas do
complemento.
Muitas das funes dos anticorpos so mediadas pela cadeia pesada da regio
constante das Ig, e cadeias pesadas das Ig diferentes vo ter funes diferentes.
(Funes resumidas na Tabela 1). O sistema humoral especializado de tal modo
que a exposio a diferentes micrbios estimula as clulas B a fazer a troca de
classe de isotipo, para o isotipo que mais eficaz seja a combater esse mesmo
micrbio.
Apesar de muitas funes dependerem da cadeia pesada das Ig, todas estas
funes so desencadeadas pela ligao de antignios s zonas variveis. A ligao
de um anticorpo a um antignio compacta a regio Fc dos anticorpos e esta
compactao das molculas dos anticorpos leva activao do sistema de
complemento e permite a ligao da regio Fc aos receptores Fc dos fagcitos.
Assim est assegurada a activao de vrios mecanismos efectores, mas apenas
quando necessrio, e no quando os anticorpos circulam numa forma livre de
antignio (forma livre = descompactada).

75

Tabela 1 - Funes dos isotipos dos Anticorpos

Isotipo

Funes Especficas desse Isotipo

IgG

IgM

Opsonizao de antignios para fagocitose, por macrfagos e


neutrfilos, atravs da ligao aos seus receptores Fc
Neutralizao: nica funo independente da regio constante das Ig
Activao da via clssica de complemento
Citotoxicidade mediada por clulas dependente de anticorpos, mediada
por clulas NK
Imunidade Neonatal: transferncia de anticorpos maternos pela placenta
Feedback Negativo sobre a activao dos linfcitos B

Activao da via clssica de complemento


Receptores de antignios dos linfcitos B nave *

Imunidade das mucosas: secreo de IgA para o lmen dos tractos GI e


respiratrios
Activao do complemento por via da lectina/via alternativa

IgA

IgE
IgD

Desgranulao dos mastcitos (reaces de


imediata), atravs da ligao aos seus receptores Fc.

Receptor de antignios dos linfcitos B nave *

hipersensibilidade

*estas funes so mediadas por anticorpos de membrana e no anticorpos livres.

Ilustrao 1 - Funes Efectoras dos anticorpos

76

NEUTRALIZAO DE MICRBIOS E TOXINAS MICROBIANAS


Os anticorpos contra microrganismos ou suas toxinas bloqueiam a ligao destes a
receptores celulares. Deste modo, os anticorpos inibem/neutralizam a infecciosidade
dos microorganismos (Ilustrao 2). Muitos microrganismos
entram nas clulas do hospedeiro, ligando-se por molculas da
sua superfcie s protenas ou lpidos da membrana do
hospedeiro. Anticorpos que se ligam a estas estruturas
interferem com a capacidade dos microrganismos interagirem
com receptores celulares. O mesmo acontece com as toxinas
(p.e. tetnica, diftrica, ).
A neutralizao mediada por anticorpos requer apenas a
ligao das regies ligantes ao antignio por parte dos
anticorpos. Por isso, tal neutralizao pode ser mediada por
anticorpos de qualquer isotipo, em circulao e secrees
mucosas, desde que estes tenham alta afinidade para estes
antignios. Os anticorpos neutralizantes no sangue so
maioritariamente IgG; nos rgos com mucosas, so
maioritariamente do tipo IgA.
Muitas vacinas profilticas trabalham por estimulao da
produo de anticorpos neutralizantes de alta afinidade.
Porm, os microorganismos desenvolveram mecanismos de
evaso a estes anticorpos, mutando os genes que codificam
antignios de superfcie.
Ilustrao 2 - Neutralizao de micrbios e
toxinas pelos anticorpos

OPSONIZAO MEDIADA POR ANTICORPOS E FAGOCITOSE


Anticorpos do isotipo IgG cobrem (opsonizam) microorganismos, como se os
marcassem para a sua fagocitose, pois os Ig ligam-se aos receptores Fc dos
fagcitos. Depois de ingeridos, vo ser mortos e degradados. A opsonizao no
obrigatria, pois estes fagcitos tm receptores que se ligam directamente aos
microrganismos, constituindo a imunidade inata (mas menos eficaz).
Fagcitos mononucleares e neutrfilos expressam receptores para as pores Fc dos
anticorpos IgG, que se ligam a antignios (ou seja, que esto a opsoniz-lo). Os
microrganismos podem ainda ser opsonizados por um produto da activao do
complemento, o C3b, pois este liga-se ao receptor para o C3b (como veremos
adiante).
O processo de revestimento dos micrbios com partculas que facilitam a fagocitose
chama-se opsonizao. Essas partculas (anticorpos e protenas de complemento)
tomam o nome de opsoninas.

77

RECEPTORES Fc LEUCOCITRIOS
Os leuccitos expressam receptores Fc que se ligam regio constante dos
anticorpos. Eles entregam sinais que estimulam as actividades microbicidas dos
leuccitos e induzem a inflamao.
Os receptores Fc para a cadeia pesada de cada Ig so expressos em vrias
populaes leucocitrias. Existem vrios tipos de receptores Fc (FcRn - neonatal
expresso na placenta, endotlio, epitlio intestinal; poly-Ig; Fc da IgE), mas o mais
importante neste tema a fagocitose de partculas opsonizadas so os receptores
para a cadeia pesada das IgG: receptores Fc (FcR).
A maioria dos receptores Fc resultam numa activao celular quando activados
(excepto o FcRII, que um receptor inibitrio). Os vrios receptores Fc so:

FcRI (CD64) (Erro! A origem da referncia no foi encontrada.)


Principal receptor dos fagcitos.
Transcrio do gene deste receptor estimulada pelo IFN- (interfero
gama).

FcRII (CD32) ( Ilustrao 4)


Expresso nos macrfagos, neutrfilos, eosinfilos
FcRIIA: expresso nos neutrfilos, fagcitos mononucleares e
plaquetas. Activa os fagcitos
FcRIIB: um receptor inibitrio, pois em vez de um ITAM tem um
ITIM (immunoreceptor tyrosine-based inibition motif). expresso nos
linfcitos B e o nico receptor Fc em clulas B.
FcRIIC: expresso nos fagcitos mononucleares, neutrfilos e clulas
NK.

FcRIII (CD16)( Ilustrao 3)


Baixa afinidade para as IgG
FcRIIIA expressa nas NK.
FcRIIIB expresso nos neutrfilos. No medeia fagocitose nem
activa neutrfilos. Funo = ?.Transcrio do gene deste receptor
estimulada pelo IFN- (interfero gama). Este estimula ainda a
produo da classe dos anticorpos que ligam melhor aos Fc.

78

Ilustrao 4 Receptor FcRI

Ilustrao 4 Receptor FcRII

Ilustrao 3 Receptor FcRIII

PAPEL DOS RECEPTORES FcNA FAGOCITOSE E ACTIVAO DE FAGCITOS


(Ilustrao 5)

Ilustrao 5 - Opsonizao e fagocitose mediada por anticorpos

A fagocitose de partculas revestidas por IgG mediada pela ligao das pores Fc
das opsoninas (IgG) aos receptores Fc dos fagcitos. H ento internalizao da
partcula nos fagcitos e a sua activao. As vesculas de endocitose fundem com os
lisossomas, originando fagolisossomas, onde as partculas so destrudas.
Se no houver fagocitose (agente demasiado grande), sero secretadas enzimas
hidrolticas ou intermedirios das espcies reactivas de oxignio para o exterior, o que
pode lesar os tecidos (importante nas doenas de hipersensibilidade).Se no houver
fagocitose (agente demasiado grande), sero secretadas enzimas hidrolticas ou
intermedirios das espcies reactivas de oxignio para o exterior, o que pode lesar os
tecidos (importante nas doenas de hipersensibilidade).

79

CITOTOXICIDADE
(ADCC)

CELULAR

DEPENDENTE

DE

ANTICORPOS

As clulas NK e outros leuccitos ligam-se a clulas revestidas por anticorpos atravs


dos receptores Fc e destroem estas clulas, num processo chamado citotoxicidade
celular dependente de anticorpos (ADCC) (Ilustrao 6). No caso das NK, usado o
receptor FcRIIIA para se ligarem s clulas opsonizadas por anticorpos. Este
receptor no se liga aos IgG circulantes, por isso, ADCC ocorre apenas quando a
clula-alvo est revestida por anticorpos.

Ilustrao 6 - ADCC

Quando o receptor activa a clula, so produzidas citocinas, tais como o IFN-, e a


clula levada desgranulao, mediando morte dos micrbios.
Este um importante mecanismo para a eliminao de clulas indesejveis, tais como
clulas tumorais derivadas dos linfcitos B, atravs da administrao de anticorpos
anti-CD20 (especficos para linfcitos B) ficam marcadas para a citotoxicidade.

CLEARANCE DE HELMINTAS MEDIADA POR ANTICORPOS


Os mastcitos e eosinfilos funcionam
com alguns anticorpos para mediar a expulso
e morte de alguns parasitas helmnticos
(Ilustrao 7). Os Helmintas so demasiado
grandes para serem ingeridos pelos fagcitos,
e os seus integumentos so relativamente
resistentes aos produtos microbicidas dos
neutrfilos e macrfagos. No entanto, podem
ser mortos por uma toxina catinica
(protena), a protena major dos grnulos dos
eosinfilos.

Ilustrao 7 - Helminta

As IgE, IgG e IgA revestem os helmintas, e ligam-se aos receptores Fc dos


eosinfilos, FcRI (receptores de alta afinidade), desencadeando a sua
desgranulao, e libertando esta protena e outros contedos dos grnulos.

80

SISTEMA COMPLEMENTO
INTRODUO
um dos mecanismos principais da imunidade humoral e tambm da imunidade
inata. Consiste em protenas sricas ou de superfcie, que interagem umas com as
outras ou com outras molculas do sistema imunitrio, de forma altamente regulada e
originam produtos que eliminam micrbios.
Estas protenas esto, normalmente, inactivas; so activadas apenas sob condies
particulares. Para perceber bem as vrias vias de activao necessria a
observao das imagens das seces seguintes.

CARACTERSTICAS DA ACTIVAO DO SISTEMA DE COMPLEMENTO

activado por micrbios e por anticorpos ligados a micrbios ou outros


antignios.
Activao do complemento envolve a protelise sequencial de protenas para
gerar complexos enzimticos com actividade proteoltica. s protenas que
adquirem actividade proteoltica pela aco de outras proteases chamam-se
zimognios. Este processo permite uma tremenda amplificao, pois cada
enzima activada gera mltiplas outras enzimas activadas.
Os produtos da activao do complemento ligam-se covalentemente s
superfcies microbianas ou aos anticorpos ligados a estas. Elas circulam
inactivas ou temporariamente activas, ficando activas e estveis apenas
quando ligam aos microorganismos.
Activao do complemento inibida por protenas reguladoras que esto
presentes em clulas do hospedeiro normais e ausentes nos micrbios. Assim,
os efeitos lesivos sobre as clulas do prprio so minimizados. Como os
microorganismos no tm estas protenas, o complemento activa-se apenas na
superfcie destes.

VIAS DE ACTIVAO DO COMPLEMENTO


Como j foi falado, h 3 principais vias de activao do complemento:
clssica (na presena de anticorpos, raros vrus e micoplasmas),
alternativa (na ausncia de anticorpos, alguns vrus, enzimas proteolticas)
da lectina (lectina une-se aos resduos de manose dos micrbios).
Apesar de as vias diferirem no modo como se iniciam, todas elas geram complexos
enzimticos capazes de clivar a protena de complemento mais abundante, C3.

81

O evento central na activao do complemento a protelise da protena de


complemento C3 circulante, originando, entre outros, C3b, que vai ligar superfcie
dos micrbios ou aos anticorpos ligados aos antignios. C3 est constante e
lentamente a ser activada no plasma, mas se no se ligar a nenhum antignio
estranho, vai voltar ao estado normal, para no haver leso dos tecidos do prprio.
A activao do complemento depende da gerao de dois complexos proteolticos: a
convertase C3 (cliva C3 em dois fragmentos: um menor C3a; e um maior C3b) e a
convertase C5 (origina C5a e C5b). O C3b fica covalentemente ligado superfcie
microbiana ou aos anticorpos do local de activao do complemento uma
opsonina.
Esta activao promove a fagocitose porque os fagcitos (neutrfilos e macrfagos)
expressam receptores de C3b, e os pptidos resultantes da protelise de C3
estimulam a inflamao.
O complexo enzimtico C5 apenas se junta aps a gerao de C3b; esta contribui
para a inflamao e para a formao de poros nas membranas dos alvos microbianos.
Depois da formao do complexo C5, as trs vias de activao so iguais.

Formao Convertase C3
(3 vias diferentes)

Formao Convertase
C5

Fase final: Formao do


complexo MAC

VIA ALTERNATIVA
( Ilustrao 8 )

Consiste na protelise do C3 e uma


ligao estvel do seu produto C3b s
superfcies microbianas, sem auxlio
dos anticorpos:

Se o complexo C3bBb se ligar a uma


clula
do
prprio,
protenas
reguladoras negativas terminam essa
reaco, degradando o complexo
(estas protenas reguladoras no
existem nos micrbios, facilitando a
sua eliminao). Para alm disso, h
uma protena reguladora positiva, a
properdina que se liga e estabiliza o

82
Ilustrao 8 - Via de activao do complemento: Alternativa

complexo C3bBb. Esta ligao s ocorre nas clulas microbianas.


Algumas da C3b formadas vo se ligar ao complexo C3bBb, que funciona como a
convertase C5 da via alternativa, que cliva o C5, iniciando as etapas terminais da
activao do complemento.

VIA CLSSICA

(Ilustrao 9)

A via clssica iniciada pela ligao da protena de complemento C1 s IgG ou s


IgM ligadas a antignios:

Ilustrao 9 - Via de activao do complemento: Clssica

83

C1 um complexo proteico constitudo pelas subunidades C1q, C1r e C1s.


(Ilustrao 10):

Ilustrao 10 - Complexo Proteico C1

A C1q tem a funo de reconhecimento e liga-se s regies Fc das cadeias pesadas.


Cada C1q tem de se ligar a pelo menos duas Ig para se
activar. Este fenmeno explica porque que os anticorpos
ligados aos antignios, e no os anticorpos livres,
conseguem iniciar a via de activao clssica: vrias IgG tm
de se aproximar (cluster) antes de C1q se poder ligar, e as
IgG s sofrem cluster quando esto ligadas a um antignio.
A IgM enquanto Ig livre por causa da sua conformao
planar no se liga s C1q. A ligao das IgM a um
antignio induz uma mudana conformacional que expe o
local de ligao C1q, na regio Fc da Ig, permitindo ento a
ligao.
Aps ligao protena C1q, vai haver protelise por parte
dos outros dois componentes do complexo: C1r e C1s, que
iniciam protelise de C4, que contribuir para a formao do
complexo que clivar C3 (=C3 convertase).
O complexo final formado: C4b2a3b, a convertase C5 da
via clssica.

VIA DA LECTINA

(Ilustrao 11)

semelhante via clssica, diferindo apenas no incio.


tambm desencadeada na ausncia de anticorpos,
reconhecendo padres repetitivos e/ou ausncia do cido
silico, havendo ligao de polissacridos microbianos a
lectinas circulantes, tais como as MBL (mannose-binding
lectin ) e as ficolinas.
As ficolinas e as MBL ligam-se a MASPs (MBL-associated
serine proteases), que so homlogas C1r e C1s,
servindo funo semelhante: clivagem de C4 e C2. Eventos
subsequentes so idnticos aos da via clssica.
Ilustrao 11 - Via de activao
do complemento: da Lectina

84

LTIMAS FASES DA ACTIVAO DO COMPLEMENTO


As convertases C5 originadas por qualquer uma das vias iniciam a activao de
componentes do complemento que culminam na formao do complexo de ataque
membrana (MAC) (Ilustrao 12).

Ilustrao 12 - Formao do complexo MAC

A convertase C5 cliva o C5 num fragmento pequeno C5a, que libertado, e um


fragmento maior C5b, que permanece ligado s protenas de complemento na
superfcie celular. As restantes protenas de complemento, C6, C7, C8 e C9 so
protenas sem funo enzimtica. Logo aps a clivagem do C5, o C5b tem a
capacidade transitria de ligar s prximas protenas: C6 e C7. O complexo C5b,6,7
hidrofbico e, por isso, insere-se na membrana bilipdica, constituindo um receptor de
alta afinidade para a C8 (complexo C5b-8). A formao de um MAC completo
terminada com a juno da ltima protena do complemento, C9, a esse complexo. C9
homloga s perforinas das clulas T citotxicas e das clulas NK, formando poros
na membrana que destabilizam o controlo osmtico da clula, provocando a sua lise.

RECEPTORES PARA AS PROTENAS DO COMPLEMENTO


Muitas das funes do complemento advm da ligao dos fragmentos do
complemento a receptores de membrana expressos em vrias clulas. Os que esto
melhor descritos so os receptores de C3, existindo, porm, receptores para os tais
fragmentos menores libertados: C3a, C4a e C5a, que estimulam a inflamao.

RECEPTOR DE COMPLEMENTO TIPO 1 (CR1 OU CD35)


85

Funo principal: promover a fagocitose de partculas revestidas por C3b ou


C4b; eliminar imunocomplexos da circulao.
Expresso em clulas originadas na medula (eritrcitos, neutrfilos, moncitos,
macrfagos, eosinfilos, linfcitos T e B) e ainda em clulas foliculares
dendrticas dos orgos linfides.

RECEPTOR DE COMPLEMENTO TIPO 2 (CR2 OU CD21)

Funo: estimula a resposta humoral ao melhorar a activao das clulas B


por antignios; promove o aprisionamento de complexos Ag-Ac nos centros
germinais.

RECEPTOR DE COMPLEMENTO TIPO 3 (CR3 OU Mac-1 OU CD11bCD18)

Funo: uma integrina que funciona como receptor para o fragmento iC3b
(que vem da protelise do C3b).
Expresso em neutrfilos, fagcitos mononucleares, mastcitos e clulas NK
Promove a fagocitose de micrbios opsonizados com iC3b. Pode reconhecer
directamente bactrias para a fagocitose.

RECEPTOR DE
CD11c/CD18)

COMPLEMENTO

TIPO

(CR4

OU

p150,95

OU

Semelhante ao Mac-1 (ver acima).

RECEPTOR DE COMPLEMENTO PARA A FAMLIA DAS IMUNOGLOBULINAS


(CRIg)

86

Expresso nas clulas de Kupffer


Liga-se aos fragmentos do complemento C3b e iC3b.
Funo: eliminao de bactrias opsonizadas.

REGULAO DA ACTIVAO DO COMPLEMENTO


A activao e estabilidade das protenas de complemento tm uma regulao fina para
prevenir activao do complemento contra clulas do hospedeiro e para limitar a
durao dessa activao, mesmo contra clulas microbianas.
As protenas circulantes e de membrana responsveis por esta regulao formam a
famlia RCA (reguladores da actividade do complemento).
O controlo da activao essencial porque: (1) existe uma activao constante
mnima, que no pode prosseguir para no danificar as clulas do prprio; (2) mesmo
que o complemento esteja activado e a actuar sobre micrbios, deve ser controlado
para que os produtos de degradao no difundam para as clulas adjacentes.
Ento o que permite direccionar o sistema complemento para os micrbios e evitar a
sua activao contra clulas do prprio?
A actividade proteoltica de C1r
e C1s inibida por uma protena
plasmtica chamada inibidor de C1
(C1 INH) (Ilustrao 13), que s h
no plasma do prprio. Leva
dissociao do complexo C1r2-C1s2 do
C1q (impede a via de activao
clssica e impede a acumulao de
cada vez mais complexo C1r2-C1s2
activo que danifique as clulas).

Ilustrao 13 - Aco de C1 INH

A montagem dos complexos


das convertase C3 e convertase C5
inibida pela ligao de protenas
reguladoras ao C3b e C4b, nas
superfcies celulares do prprio
(Ilustrao 14). Ao se ligarem a
C3b ou C4b, estas protenas esto a
inibir, por competio, a ligao dos
outros componentes da convertase
C3
e,
consequentemente,
a
continuao do processo. Estas
protenas so produzidas pelas
clulas do hospedeiro e no pelos
micrbios, por isso o complemento
actua apenas nos micrbios.
Exemplos
destas
protenas
reguladoras:
MCP ou CD46 (membrane
cofactor protein),
Ilustrao 14 - Inibio da formao das
Convertases C3

87

CR1 (receptor de complemento tipo 1),


DAF (decay-accelerating factor)
factor H (inibe apenas a ligao do Bb ao C3b, e por isso regula a via alternativa
e no a via clssica).
C4BP (C4 binding protein).

Se o C3b (ou C4b) de facto se conseguir unir a clulas do prprio, vai


ser degradado por uma protease srica, o factor I, que se activa apenas na presena
de protenas reguladoras (existentes apenas nas clulas do hospedeiro) e, por isso,
estas funcionam como co-factores do factor I. o factor I que, pela degradao do
C3b, origina o iC3b, C3d e o C3dg. (Ilustrao 15)

Ilustrao 15 - Clivagem do C3b mediada pelo factor I

A formao do MAC
inibida por uma protena de
membrana: CD59 (Ilustrao
16). Esta incorpora-se nos
MACs que esto a ser
acoplados, mesmo antes da
ligao da ltima pea: C9,
por isso no consegue terminar
o processo de formao do
MAC. O CD59 est presente
nas clulas do hospedeiro, mas
no nos microorganismos.
Se ordenarmos por ordem de
importncia,
as
protenas
inibidoras do complemento,
teremos
algo
como:
CD59>DAF>MCP (o que pode
estar de acordo com a sua
abundncia
na
superfcie
celular).

88

Ilustrao 16 - Regulao da formao do MAC

FUNES DO COMPLEMENTO
OPSONIZAO E FAGOCITOSE (Ilustrao 17)

Ilustrao 17 - Funes do complemento: Opsononizao e Fagocitose

Micrbios sobre os quais o complemento foi activado via clssica ou via alternativa vo
estar revestidos de C3b, iC3b ou C4b e vo ser fagocitados pela ligao destes a
receptores de superfcie especficos dos macrfagos e neutrfilos. O C3b e o C4b
ligam-se ao CR1 e o iC3b liga-se ao CR3 (Mac-1) e ao CR4.
A fagocitose mediada pelo complemento (que pertence ao sistema imunitrio inato
e ao humoral) importante no caso de bactrias com cpsulas ricas em
polissacridos, como o pneumococos ou o meningococos. Aps opsonizao, estas
bactrias so fagocitadas no bao (em caso de esplenectomia, aumenta a
probabilidade de septicmia pneumo/meningoccica).

ESTIMULAO DAS RESPOSTAS INFLAMATRIAS (Ilustrao 18)

Ilustrao 18 - Funes do complemento: Estimulao das respostas inflamatrias

Os fragmentos proteolticos do complemento C5a, C4a e C3a induzem inflamao


aguda ao activarem os mastcitos e neutrfilos (Cada protena origina um fragmento
a, normalmente o mais pequeno e de papel inflamatrio, e um fragmento b, com um
papel opsonizante). Os trs pptidos referidos estimulam a desgranulao dos
mastcitos, em que h libertao de mediadores vasoactivos como a histamina,
sendo por isso chamados de anafilatoxinas. Nos neutrfilos, C5a estimula a
motilidade, firma a adeso das clulas ao endotlio e estimula o burst oxidativo. Pode

89

ainda actuar directamente no endotlio, para aumentar a permeabilidade vascular e


melhorar a adeso dos neutrfilos ao endotlio.
Nos mastcitos, C5a o mediador de desgranulao dos mastcitos mais importante.
Tem ainda a funo estimuladora da produo de PGE2 e leucotrienos.

CITLISE MEDIADA PELO COMPLEMENTO (Ilustrao 19)

mediada pelo MAC. Alguns microorganismos tm a membrana celular muito


espessa e o MAC no faz grande efeito. apenas eficaz em bactrias como a
Neisseria que tm a membrana muito fina.

Ilustrao 19- Funo do complemento: Citlise

OUTRAS FUNES

SOLUBILIZAO DOS IMUNOCOMPLEXOS E A SUA CLEARANCE PELOS


FAGCITOS

Os imunocomplexos que se formam em circulao, quando h uma resposta dos


anticorpos a um antignio, podem acumular e depositar nos vasos sanguneos,
levando a uma reaco inflamatria que danificam os tecidos. Quando os
imunocomplexos revestidos por C3b se ligam aos receptores CR1 dos eritrcitos,
vo para o fgado e bao para serem fagocitados.

ACTIVAO DOS LINFCITOS B PELA LIGAO DE C3d AO CR2 DESSAS


CLULAS

C3d um produto da clivagem do C3b, e ambos ligados a um antignio resulta na


activao do complemento. Assim, os linfcitos B ligam-se ao antignio pelos seus
receptores Ig e ao mesmo tempo ligam-se ao C3d pelo seu receptor CR2 (coreceptor).

DESTRUIO CELULAR NAS DOENAS AUTOIMUNES

Nas doenas auto-imunes, em que h produo de auto-anticorpos, a aco do


complemento que causa a destruio dos tecidos.

90

EFEITOS PATOLGICOS DE UM SISTEMA DE COMPLEMENTO


NORMAL
Efeitos lesivos das infeces esto muitas vezes relacionados com a aco do
complemento, mesmo em pessoas saudveis (para alm da infeco); exemplos:
trombose intravascular, isqumia dos tecidos.
Processo da trombose (em caso de transplantes de rgos vascularizados): criam-se
anticorpos anti-endoteliais, onde se formam imunocomplexos. Para alm disso, o MAC
danifica as clulas endoteliais, o que leva coagulao.
Vasculite e Glomerulonefrite: derivam da deposio de imunocomplexos nas
paredes dos vasos e nos glomrulos renais. Esses imunocomplexos activam o
complemento que danifica o endotlio e os glomrulos.

EVASO DOS MICRBIOS AO SISTEMA COMPLEMENTO


Como?
PAREDES CELULARES
So muito espessas, impedindo a ligao do MAC, entre outros. Exemplos: Gram + e
alguns fungos. O lpido A dos Gram tambm confere resistncia.
As paredes sofrem constantes mutaes, com grande diversidade de eptopos

RECRUTA/SNTESE DE PROTENAS DO HOSPEDEIRO REGULADORAS DO


COMPLEMENTO
Alguns desenvolvem vias de sntese especiais ou capturam as protenas/factores
reguladores de complemento para a sua prpria superfcie, ficando protegidos da
activao do complemento.

BLOQUEIO DA
MICROBIANOS

INFLAMAO

PELOS

PRODUTOS

DOS

GENES

Pela sntese de protenas inibidoras das anafilatoxinas.

91

IMUNIDADE NEONATAL
Os fetos mamferos esto protegidos das infeces por anticorpos produzidos pela
me, que atravessam a placenta (IgG) e entram em circulao fetal, e por anticorpos
ingeridos com o leite materno (IgA e IgG), que atravessam o epitlio intestinal dos
recm-nascidos, num processo chamado Transcitose. Como os recm-nascidos no
tm a capacidade de responder eficazmente contra os micrbios, utilizam a
imunidade passiva como defesa, que se baseia na neutralizao dos organismos
patognicos.
Para as IgA serem transportados para o leite, necessitam do receptor polimrico Ig,
que secretado juntamente com 2 IgA. Para as IgG serem transportadas pela
placenta e pelo intestino do recm-nascido, precisam do receptor Fc especfico para
as IgG: FcRn (neonatal Fc receptor. Este assemelha-se ao MHC I estruturalmente.
Nos adultos tem como funo proteger as IgG do catabolismo. Exemplo clnico da aula
terica: Me com Doena de Graves, onde h anticorpos anti-TSHR; estes so
transferidos pela placenta, e o beb quando nasce tem a mesma doena. Como a
causa no intrnseca, a doena curada atravs da realizao de plasmafrese no
beb).

Ilustrao 20 - Slide da aula terica: esquema resumo do sistema de complemento

92

T7: Imunidade Celular Mecanismos Efectores da


Imunidade Mediada por Clulas
Data da terica: 14 de Outubro de 2011
Captulos do Abbas: 10
Elaborado por: Joana Miranda

IMUNIDADE CELULAR
Ao contrrio da imunidade humoral, a imunidade celular actua nos agentes invasores
intracelulares, contra os quais os anticorpos no conseguem actuar. Esta imunidade
celular pode ser transferida para outro indivduo no imunizado, atravs da
transferncia de clulas T, e no pela transfuso de anticorpos.
Defeitos neste tipo de imunidade resultam num aumento da susceptibilidade a
infeces por vrus e por bactrias intracelulares, tal como por algumas bactrias e
fungos extracelulares que so fagocitados. As respostas mediadas por clulas T so
tambm importantes na rejeio de enxertos, imunidade anti-tumoral, e doenas
inflamatrias auto-imunes (immune-mediated inflammatory diseases).

TIPOS DE RESPOSTAS IMUNES MEDIADAS POR CLULAS


Diferentes populaes de clulas T evoluram para combater diferentes tipos de
patognios infecciosos, e por isso, a imunidade mediada por clulas consiste num
exemplo excelente de especializao da imunidade adaptativa. Existem vrios
princpios gerais importantes para estas respostas imunitrias:
Clulas T efectoras CD4+ ligam o reconhecimento especfico de
microrganismos ao recrutamento e activao de outros leuccitos para a
destruio destes agentes infecciosos. Cada tipo de leuccito est
especialmente adaptado para destruir certas categorias de microrganismos,
por isso, a natureza dos leuccitos recrutados e activados, tem de ser
determinada pela subcategoria de clula T CD4+ efectora que induzida na
resposta imune, o que depende do microrganismo invasor. Em geral, clulas
TH1 activam macrfagos, clulas TH2 recrutam e activam eosinfilos, e as
respostas por clulas TH17 so dominadas por neutrfilos (e um nmero
varivel de macrfagos).
Esta cooperao entre linfcitos T e outros leuccitos ilustra um elo importante
entre as imunidades adaptativa e inata: atravs da secreo de citocinas, as
clulas T estimulam e focam a actividade de clulas efectoras da imunidade
93

inata (como os fagcitos), convertendo assim estas clulas em agentes da


imunidade adaptativa.
Resposta a microrganismos fagocitados que vivem dentro dos fagossomas
de macrfagos, mediada por clulas TH1, que reconhecem antignios
microbianos e activam os macrfagos para destrurem os agentes fagocitados.
Resposta a microrganismos extracelulares, incluindo variados fungos e
bactrias, mediada por clulas TH17, que recrutam neutrfilos e alguns
moncitos, para fagocitarem e destrurem os microrganismos.
Resposta a parasitas helmnticos (helminthic parasites) mediada por
clulas TH2, atravs da produo de anticorpos imunoglobulina E (IgE) e da
activao de eosinfilos e mastcitos para eliminarem os vermes parasitas
(helminths).
A resposta imune adaptativa a microrganismos que infectam e
conseguem replicar-se no citoplasma de diversos tipos celulares,
incluindo clulas no fagocticas, mediada por linfcitos T citotxicos (CTLs)
CD8+, que matam clulas infectadas e eliminam os reservatrios de infeco.
Isto porque se as clulas infectadas no tm funo microbicida intrnseca, a
infeco apenas pode ser eliminada pela destruio destas mesmas clulas.
Este tambm um mecanismo para eliminao de microrganismos que so
ingeridos por clulas fagocticas, mas que conseguem libertar-se dos
fagossomas mantendo-se no citosol.
Respostas imunes mediadas por clulas consistem no desenvolvimento de clulas T
efectoras a partir de clulas nave em orgos linfides perifricos, migrao destas
clulas T efectoras e de outros leuccitos para os locais de infeco, e activao de
leuccitos mediada por citocinas para destruio de microrganismos, ou eliminao
directa da clula infectada.

MIGRAO DE LINFCITOS T EFECTORES PARA LOCAIS DE


INFECO
A diferenciao de clulas T nave em clulas T efectoras est associada a uma
mudana na expresso de receptores de quimiocinas e molculas de adeso, que
determina o comportamento migratrio destas clulas. A expresso de molculas
envolvidas no alojamento das clulas T nave dentro de ndulos linfticos, que inclui
selectina-L e CCR7, diminui pouco aps a activao destas clulas induzida por um
antignio, e a expresso do receptor de esfingosina 1-fosfato (S1PR1) aumenta. Como
resultado, as clulas efectoras que se desenvolvem j no so obrigadas a
permanecer no ndulo, e so atradas a entrar na circulao sangunea ou nos vasos
linfticos eferentes.
Ao contrrio das clulas T nave, as clulas T efectoras expressam receptores de
quimiocinas e molculas de adeso que se ligam a quimiocinas e a molculas de
adeso endoteliais, induzidas por citocinas como IL-1 e TNF (tumor necrosis factor), e
94

que so produzidas em locais de infeco. Ou seja, aps entrarem em circulao, as


clulas T efectoras alojam-se preferencialmente em locais de infeco.
Cada uma das categorias TH1, TH2 e TH17 de clulas T CD4+ tem um fentipo de
alojamento distinto, que as direcciona a migrar para diferentes locais de infeco.
QUIMIOCINAS QUE ATRAEM T HELPERS
Por exemplo, durante a diferenciao de precursores nave, as clulas TH1
desenvolvem a capacidade de produzir ligandos funcionais para selectina-E e
selectina-P, enquanto que as clulas TH2 expressam nveis baixos deste ligandos.
Outro exemplo refere-se aos receptores CXCR3 e CCR5, que se ligam a
quimiocinas elaboradas nos tecidos durante respostas imunes inatas, e que so
expressos em nveis elevados por clulas TH1, mas no por clulas TH2. Por isso,
as clulas TH1 tendem a ser mais abundantes em locais de infeco onde os
agentes infecciosos desencadeiam uma resposta imunitria inata forte. Em geral,
as CTLs migram de forma semelhante s clulas TH1.
Em contraste, as clulas TH2 expressam os receptores de quimiocinas CCR3,
CCR4, e CCR8, que reconhecem quimiocinas expressas em nveis muito altos em
locais de infeco por parasitas helmnticos e em reaces alrgicas,
particularmente em mucosas, e por isso as clulas T H2 tendem a migrar para
estes tecidos.
As clulas TH17 expressam CCR6, ao qual se liga a quimiocina CCL20, produzida
por vrias clulas dos tecidos e tambm por macrfagos durante muitas infeces
fngicas e bacterianas, por isso, a migrao de clulas T H17 para locais
inflamatrios dependente da expresso de CCR6.
Aps a entrada de clulas T efectoras nos locais de infeco, e aps estas serem
novamente activadas pelo antignio, estas produzem mais citocinas e quimiocinas, e
estimulam uma maior migrao leucocitria. Esta inflamao tardia por vezes
chamada de Inflamao Imunitria (Immune Inflammation), para indicar o papel dos
linfcitos T no processo.
A migrao de clulas T controlada por molculas de adeso e quimiocinas, resulta no
recrutamento inespecfico destas clulas (pois no considera a especificidade do
antignio), assegurando que o mximo possvel de clulas T anteriormente activadas
tenham a oportunidade de localizar microrganismos infecciosos, e erradicar a infeco.
At algumas clulas T de memria migram para os tecidos perifricos no-linfticos.
Uma vez nos tecidos, as clulas T encontram antignios microbianos apresentados
por macrfagos e outras clulas apresentadoras de antignios (APCs), e ao
reconhecerem especificamente algum antignio recebem sinais, atravs dos seus
receptores de antignios, que aumentam a afinidade das integrinas para os seus
ligandos. Duas destas integrinas, VLA-4 e VLA-5, ligam-se a fibronectina de matrizes
extracelulares, e uma terceira molcula de adeso, CD44, que expressa em clulas
T efectoras e de memria, liga-se a cido hialurnico (hyaluronan). Como resultado, as
clulas T (efectoras e de memria) especficas para aquele antignio so
preferencialmente retidas no local extravascular onde ele est presente, e as clulas T
95

no especficas que migraram para aquele local podem morrer no tecido, ou regressar
circulao.

FUNES EFECTORAS DE CLULAS T HELPER CD4+


As clulas T efectoras da linhagem CD4+ desempenham a sua funo produzindo
citocinas e outras molculas de superfcie, que vo activar outras clulas para
eliminarem microrganismos. As funes das clulas T efectoras CD4+ na imunidade
celular podem ser divididas em diferentes passos:

Ilustrao 1 Sequncia de eventos nas reaces de clulas T CD4+ efectoras

Recrutamento de outros leuccitos - Este recrutamento de neutrfilos,


moncitos e eosinfilos para o local de resposta mediado por quimiocinas
produzidas pelas prprias clulas T, ou por outras clulas em resposta as
citocinas produzidas pelas clulas T. Diferentes tipos de clulas efectoras
CD4+ recrutam diferentes tipos de leuccitos, como foi mencionado
anteriormente.

96

Activao dos leuccitos recrutados Os mecanismos pelos quais as


clulas T CD4+ activam outros leuccitos envolvem a expresso da protena de
superfcie ligando CD40 (CD40L) e a secreo de citocinas, ambas pelas
clulas T. A via mediada por CD40L mais definida para a activao de
macrfagos por clulas TH1, e ser descrita mais a frente neste contexto.
Amplificao da resposta Tal como em todas as respostas imunes
adaptativas, existem vrios loops de feedback positivo (como um crculo
vicioso) que servem para amplificar a resposta; por exemplo as citocinas
produzidas pelas clulas T activam os macrfagos a produzir citocinas, sendo
que estas por sua vez actuam sobre as clulas T aumentando a sua resposta.
Inibio da resposta As clulas T efectoras no tm uma vida muito longa,
morrem logo aps terem completado a sua funo, e quando o antignio
eliminado os estmulos para propagar a resposta so perdidos, e esta diminui
com o tempo. Mecanismos de controlo especiais podem tambm limitar as
respostas efectoras, sendo um exemplo destes mecanismos a IL-10, cuja
funo principal inibir a contnua diferenciao linfocitria em TH1 e a
activao de macrfagos, e que produzida tanto pelas clulas T H1 como
pelos macrfagos activados. Mecanismos inibitrios adicionais, como outras
citocinas anti-inflamatrias e receptores que inibem a activao de clulas T,
podem estar envolvidos no controlo das respostas mediadas por clulas T.
As clulas T CD4+ tambm participam indirectamente na defesa do hospedeiro
ajudando linfcitos B a produzir anticorpos de alta afinidade contra microrganismos
extracelulares, e promovendo o desenvolvimento de CTLs funcionais que combatem
microrganismos intracelulares.
Em seguida desenvolvem-se as funes das trs categorias principais de clulas T
CD4+ efectoras na imunidade celular.

FUNES DAS CLULAS T H 1


A principal funo das clulas TH1 activar macrfagos para ingerir e destruir
microrganismos; Mas para compreender a activao dos macrfagos necessrio
perceber a aco do interfero- (IFN-), a citocina responsvel pela maior parte das
funes especializadas desta linhagem de clulas T.
CITOCINAS PRODUZIDAS PELAS CLULAS TH1
Interfero- (IFN-) a principal citocina para activao de macrfagos e
desempenha funes cruciais na imunidade contra microrganismos
intracelulares, por isso, indivduos que herdam mutaes raras
inactivadoras do receptor IFN- so mais susceptveis a este tipo de
infeces. Este interfero apresenta alguma actividade antiviral apesar de
no ser uma citocina antiviral potente, e produzido no s pelas clulas
TH1 CD4+ mas tambm pelas clulas NK e T CD8+. Na aco deste
interfero intervm as cinases JAK1 e JAK2 que levam fosforilao e
dimerizao de STAT1, que estimula a transcrio de vrios genes. As
principais funes do IFN- so:
97

Activar macrfagos para que estes eliminem microrganismos


fagocitados. O IFN- produzido pelas celular TH1 alia-se ao ligando
CD40, tambm expresso pelas clulas T, para activar numerosas vias
de sinalizao e factores de transcrio, que estimulam a expresso de
vrias espcies de oxignio e azoto reactivas e de enzimas nos
fagolisossomas dos macrfagos.
Estas substncias so responsveis pela funo microbicida dos
macrfagos activados, e so elas que destroem os microrganismos
ingeridos.

Actuar sobre clulas B para promover a produo de subclasses de


IgG, e inibir istipos dependentes de IL-4, como a IgE. Estas
subclasses de IgG ligam-se aos receptores Fc nos fagcitos e activam
o complemento, e ambos estes mecanismos promovem a fagocitose
dos microrganismos opsonizados.

Promover a diferenciao de clulas CD4+ em clulas TH1 e inibir a


diferenciao em clulas TH2 e TH17, com o objectivo de amplificar a
resposta por TH1.

Estimular a expresso de diferentes protenas que contribuem para


melhorar a apresentao de antignios associados ao MHC e iniciar e
amplificar a resposta imune por clulas T. Estas protenas incluem:
molculas do MHC, protenas envolvidas no processamento de
antignios, componentes do proteassoma, HLA-DM, e co-estimuladores
B7 em APCs.

Outras citocinas produzidas por clulas TH1 so: TNF, e IL-10 (que
inibidora de clulas dendrticas e macrfagos, e por isso suprime a activao
de clulas TH1, exemplo de um loop de feedback negativo).
ACTIVAO DE MACRFAGOS MEDIADA POR CLULAS TH1 E ELIMINAO DE
MICROORGANISMOS FAGOCITADOS
Em qualquer local de infeco, como parte da resposta imunitria inata, so
recrutados moncitos, desde a corrente sangunea at aos tecidos, por quimiocinas
produzidas por macrfagos e outras clulas residentes. Estes moncitos transformamse em macrfagos, fazem a sua primeira fagocitose, e se o microrganismo tiver
evoludo para resistir eliminao por macrfagos, ele sobrevive no interior dos
fagossomas. Nestas clulas infectadas os pptidos microbianos so processados, e
apresentados como pptidos associados a molculas MHC classe II. Ao mesmo
tempo, clulas TH1 efectoras so geradas numa resposta imunitria adaptativa nos
tecidos linfides secundrios, e so recrutadas ao local de infeco onde reconhecem
pptidos antignicos (os mesmos que iniciaram a resposta imunitria) apresentados
pelos macrfagos que contm o microrganismo. Os macrfagos so expostos a sinais
das clulas TH1 efectoras, que os activam para eliminarem os microrganismos
ingeridos.

98

Esta activao consiste numa expresso aumentada de vrias protenas que conferem
aos macrfagos activados a capacidade de desempenhar funes especializadas,
como por exemplo aces microbicidas mais eficientes.
A activao de macrfagos feita no s por aco do IFN-, mas tambm por sinais
mediados por contacto, baseados em interaces CD40L-CD40. Quando as
clulas TH1 so estimuladas por um antignio, estas expressam CD40L na sua
superfcie e produzem IFN-.
As aces de IFN- nos macrfagos so sinrgicas com as aces do ligando CD40, e
em conjunto so estmulos potentes para a activao de macrfagos. A necessidade
de interaces de contacto entre a molcula de superfcie CD40, presente nos
macrfagos, e o seu ligando, presente nas clulas T, assegura que os macrfagos que
apresentam antignios s clulas T so os mais eficientemente activados por estas
clulas. Os mesmos princpios se aplicam activao de linfcitos B pelas clulas T,
pois as clulas T helper estimulam a proliferao e diferenciao dos linfcitos B, por
sinais mediados por CD40 e citocinas.
Os macrfagos activados eliminam os microrganismos fagocitados principalmente pela
aco de espcies reactivas de oxignio, azoto, e enzimas lisossomais, potentes
agentes microbicidas produzidos dentro de lisossomas de macrfagos, que digerem os
microrganismos aps a fuso do fagossoma com o lisossoma. Estas substncias
txicas podem tambm ser libertadas em tecidos adjacentes, onde podem eliminar
microrganismos extracelulares, e causar dano a tecido saudvel devido sua falta de
especificidade.
Esta via de activao de macrfagos intitulada de via clssica para ser distinguvel
da via de activao alternativa, descrita mais frente.
Os macrfagos activados esto envolvidos em vrias outras reaces de defesa do
hospedeiro. Eles estimulam a inflamao atravs da secreo de citocinas,
principalmente TNF e IL-1, e mediadores lipdicos como as prostaglandinas, os
leucotrienos e factor de activao plaquetria (PAF). Esta aco colectiva leva ao
recrutamento de mais leuccitos, o que melhora a capacidade de destruir agentes
infecciosos. Os macrfagos activados ampliam a resposta imunitria mediada por
clulas ao tornarem-se APCs mais eficientes devido aos maiores nveis de molculas
envolvidas no processamento de antignios e maior expresso de molculas MHC
classe II na sua superfcie, mas tambm pela produo de citocinas (como a IL-2) que
estimulam a diferenciao de linfcitos T em clulas T efectoras.

FUNES DAS CLULAS T H 2


As clulas TH2 estimulam as reaces mediadas por IgE e por eosinfilos, com o
objectivo de eliminar infeces por parasitas helmnticos. Estes parasitas so
demasiado grandes para serem fagocitados por neutrfilos e macrfagos, e podem ser
mais resistentes s aces microbicidas destes fagcitos do que a maioria das
bactrias e vrus, por isso so necessrios mecanismos especiais para eliminar estas
infeces.

99

CITOCINAS PRODUZIDAS PELAS CLULAS TH2


Interleucina-4 (IL-4) Esta interleucina desempenha funes tanto de citocina
indutora como efectora, e o principal estmulo para produo de anticorpos
IgE e para o desenvolvimento da linhagem TH2 a partir de clulas T CD4+
nave. tambm produzida em mastcitos activados. Os seus mecanismos
incluem a via JAK-STAT (JAK3 ou JAK4 e STAT6) e uma via que envolve IRS
(insulin response substrate) chamada IRS-2. IL-4 pode tambm ligar-se ao
receptor da IL-13, devido s suas semelhanas estruturais.
As funes da IL-4 so:

Estimular o desenvolvimento de clulas TH2 e desempenhar funo


de um factor de crescimento autcrino para as clulas TH2
diferenciadas.

Estimular em clulas B a mudana de classe Ig da cadeia pesada


para o istipo IgE Os anticorpos IgE desempenham papis na
defesa mediada por eosinfilos contra infeces helmnticas (e algumas
infeces por artrpodes), e so tambm os principais mediadores em
reaces alrgicas.

Contribuir para uma via de activao de macrfagos alternativa


Esta activao descrita mais frente.

Estimular os movimentos peristlticos no tracto gastrointestinal


Contribui para a eliminao de microrganismos em superfcies
epiteliais.

Estimular o recrutamento de leuccitos Recrutamento


principalmente de eosinfilos, promovendo a expresso de molculas
de adeso no endotlio, e a secreo de quimiocinas que se ligam os
receptores presentes nos eosinfilos.

Interleucina-13 (IL-13) Esta interleucina estrutural e funcionalmente


semelhante IL-4 e tambm desempenha um papel crucial na defesa contra
parasitas e em reaces alrgicas. produzida principalmente pela linhagem
TH2, mas tambm por basfilos, eosinfilos e clulas NKT. O receptor de IL-13
permite a ligao tanto de IL-13 como de IL-4 com grande afinidade,
possibilitando a partilha dos efeitos biolgicos de IL-13 com IL-4. O receptor
expresso por uma grande variedade de clulas, incluindo clulas B, clulas
dendrticas, eosinfilos, basfilos, fibroblastos, etc, mas as clulas T no
expressam este receptor. A sinalizao de IL-13R semelhante de IL-4R. A
IL-13, ao contrrio da IL-4, no est envolvida na diferenciao da linhagem
TH2. A interleucina-13 apresenta:

100

Aces em comum com a IL-4 Induzir activao de macrfagos pela


via alternativa (que contribui para fibrose e para reparao de tecidos);
estimular clulas B a alterarem para o istipo IgE e alguns IgG; recrutar
leuccitos; estimular os movimentos peristlticos do tracto
gastrointestinal.

Aces exclusivas Induzir a produo de muco nas clulas epiteliais


das vias areas.

Interleucina-5 (IL-5) uma citocina activadora de eosinfilos, e serve como


elo de ligao principal entre activao de clulas T e a inflamao rica neste
tipo de leuccitos. produzida por clulas TH2 e mastcitos, e a principal via
de sinalizao induzida por IL-5 envolve JAK2 e STAT3.
As aces de IL-5 so:

Estimular o crescimento e diferenciao de eosinfilos, e activlos Os eosinfilos expressam receptores Fc especficos para IgE e
alguns IgG e por isso so capazes de se ligar a microrganismos, como
os parasitas, que so opsonizados por estes anticorpos, e elimin-los.

Estimular a produo de anticorpos IgA

PAPIS DESEMPENHADOS PELAS CLULAS TH2 NA DEFESA DO HOSPEDEIRO


Esta linhagem desempenha a sua funo atravs de vrios mecanismos:
Reaces mediadas por IgE e eosinfilos A IL-4 estimula a produo de
anticorpos IgE especficos para parasitas, que os opsonizam e promovem a
ligao dos eosinfilos. A IL-5 activa os eosinfilos e estas clulas libertam os
seus contedos granulares, que so capazes de destruir at os tegumentos
mais resistentes dos parasitas.
Activao de mastcitos Estes podem ser activados por parasitas
opsonizados por IgE e outros antignios que se ligam a IgE, resultando na sua
digesto
pelo
contedo
granular dos mastcitos. Estes
leuccitos produzem TNF,
quimiocinas e mediadores
lipdicos
que
induzem
inflamao local e que ajudam
a destruir parasitas.
Imunidade de barreira As
citocinas produzidas pelas
clulas TH2 esto envolvidas
no bloqueio da entrada e
tambm na promoo da
expulso de microrganismos
nas
mucosas,
por
isso
desempenham
um
papel
importante na defesa do Ilustrao 2 Activao clssica e alternativa de macrfagos
hospedeiro, intitulado de imunidade de barreira (barrier immunity), por ser
evidente nas barreiras com o ambiente externo.
Activao alternativa de macrfagos - A resposta dos macrfagos s
citocinas produzidas por clulas TH2 tem sido chamada de via alternativa de
101

activao de macrfagos, distinguindo-se da activao induzida por IFN-.


Os macrfagos activados por citocinas TH2 induzem a formao de tecido
fibroso atravs da secreo de factores de crescimento que estimulam a
proliferao de fibroblastos, sntese de colagnio, e formao de novos vasos
sanguneos (ou angiognese), contribuindo para a renovao dos tecidos e
para a fibrose em cenrios de infeces parasitrias crnicas e doenas
alrgicas.
Estes macrfagos iniciam a reparao dos tecidos depois de diversos tipos de
danos que podem no envolver agentes infecciosos ou respostas imunes;
Nestas situaes, as citocinas activadoras como a IL-4, podem ser produzidas
por eosinfilos e outros tipos celulares nos tecidos. IL-4 e IL-13 suprimem a
activao clssica de macrfagos, e interferem com as respostas imunes
mediadas por TH1 contra microrganismos intracelulares, em parte porque IL-4
estimula a produo de citocinas como a IL-10 e TGF-, que inibem o
desenvolvimento e a funo das clulas TH1.

FUNES DAS CLULAS T H 17


As clulas TH17 produzem citocinas que recrutam principalmente neutrfilos, para
locais de infeco. Pelo facto dos neutrfilos serem um mecanismo de defesa principal
contra bactrias e fungos extracelulares, as clulas TH17 desempenham um papel
importante na defesa contra estes microrganismos.
CITOCINAS PRODUZIDAS POR CLULAS TH17
As clulas TH17 produzem vrias citocinas, sendo a principal a IL-17, mediadora da
maioria das aces inflamatrias destas clulas.
Interleucina-17 (IL-17) A IL-17 uma citocina fora do vulgar porque nem ela
nem o seu receptor so homlogos a nenhum outro par citocina-receptor
conhecido. A famlia IL-17 inclui seis outras protenas estruturalmente
relacionadas, das quais IL-17A e IL-17F so as mais semelhantes e
principalmente produzidas por clulas TH17, enquanto que outros membros da
famlia so produzidos por diversas linhagens celulares. As actividades
imunolgicas parecem ser mediadas primariamente pela IL-17A. A IL-17 um
elo importante entre a imunidade celular e o sistema imune inato,
especialmente a sua componente inflamatria. As principais funes da IL-17
so:

102

Induzir respostas inflamatrias ricas em neutrfilos IL-17 estimula


a produo de quimiocinas e outras citocinas (como TNF) que recrutam
neutrfilos e, a uma menor escala, moncitos para o local de activao
de clulas T. Esta interleucina tambm melhora a gerao de
neutrfilos aumentando a produo de G-CSF e a expresso dos seus
receptores.

Estimular a produo de substncias antimicrobianas Como por


exemplo defensinas, em diversos tipos celulares.

Interleucina-22 (IL-22) Pertence famlia de citocinas IL-10 e produzida


por clulas T activadas (particularmente clulas TH17), e clulas NK. As aces
desta interleucina parecem contraditrias: alguns estudos indicam que contribui
para a inflamao e para as leses dos tecidos, mas a maioria dos dados
sugere que produzida em tecidos epiteliais, especialmente na pele e no TGI,
e tem como funo manter a integridade epitelial, promovendo a funo de
barreira do epitlio e estimulando as aces reparadoras.
Interleucina-21 (IL-21) - produzida por clulas T CD4+ activadas, e
apresenta vrios efeitos em clulas B, T e NK. O receptor de IL-21 activa a via
de sinalizao JAK-STAT, onde STAT3 tem um papel importante. Esta
interleucina promove a proliferao e funo efectora de clulas T CD8+ e de
clulas NK, e tambm a diferenciao de clulas TH17, providenciando uma via
autcrina para amplificar as respostas por esta linhagem.
PAPIS DESEMPENHADOS PELAS CLULAS TH17 NA DEFESA DO HOSPEDEIRO
A principal funo efectora destas clulas induzir a inflamao com neutrfilos, que
serve para destruir bactrias e fungos extracelulares. Apesar de estas clulas
intervirem na patognese de muitas doenas inflamatrias como a psorase, a artrite
reumatide e a esclerose mltipla, as suas aces so teis na manuteno da funo
dos epitlios, principalmente devido s aces da IL-22.

FUNES DAS CLULAS T H 9


Este tipo de clulas efectoras ainda muito pouco conhecido. Combate parasitas
helmintas (de grandes dimenses), atravs da secreo de IL-9 e da activao de
mastcitos.

FUNES EFECTORAS DE LINFCITOS T CITOTXICOS CD8+


O desenvolvimento das respostas por CTL CD8+ a uma
infeco processa-se por passos semelhantes aos
descritos para as respostas por clulas T CD4+, incluindo
a estimulao mediada por antignios de clulas T CD8+
nave nos orgos linfides, a expanso clonal, a
diferenciao e a migrao de CTLs diferenciadas para os
tecidos. Os linfcitos T citotxicos CD8+ eliminam
microrganismos intracelulares principalmente matando
clulas infectadas, e produzem IFN- contribuindo para
activao de macrfagos e para reaces de
hipersensibilidade.
Ilustrao 3 Passos da lise de uma clula-alvo mediada
por CTLs

MECANISMOS DA CITOTOXICIDADE MEDIADA POR CTL


As CTLs eliminam alvos que expressam o mesmo antignio que desencadeou a
proliferao e diferenciao de clulas T CD8+ nave das quais derivaram, e no
matam clulas adjacentes no infectadas que no expressam o antignio. Esta
103

especificidade funcional das CTL efectoras deve-se criao de uma sinapse


imunolgica que formada no local de contacto entre a CTL e a clula-alvo que
expressa o antignio, sendo que as molculas envolvidas na eliminao do alvo so
libertadas nessa sinapse e no podem difundir-se para clulas vizinhas.
Este processo consiste em trs passos: reconhecimento de antignio, administrao
do golpe letal nas clulas-alvo, e libertao das CTLs, e cada um destes passos
controlado por interaces moleculares especficas.
RECONHECIMENTO DE ANTIGNIOS E ACTIVAO DE CTLS
Para serem convenientemente reconhecidas pelas CTLs, as clulas-alvo tm de
expressar molculas MHC classe I ligadas por um complexo a um pptido
(servindo esse complexo como ligando para o receptor das clulas T e para o coreceptor CD8) e molcula de adeso intercelular 1 (ICAM-1). As CTLs e os seus alvos
formam conjugados intimamente relacionados, onde se d uma sinapse imunolgica
caracterizada por um anel de aposio entre as duas membranas celulares, e um
espao fechado dentro desse anel. Esta interaco resulta no incio de sinais
bioqumicos que activam a CTL, e que so basicamente os mesmos envolvidos na
activao de clulas T helper. As citocinas e os co-estimuladores providenciados por
clulas dendrticas, necessrios para a diferenciao de clulas T CD8+ nave em
CTLs, no so necessrios para desencadear a funo efectora das CTLs. Por isso,
logo que as clulas T CD8+ especficas para um antignio se tenham diferenciado em
CTLs completamente funcionais, estas podem matar qualquer clula nucleada que
apresente esse mesmo antignio.
Para alm do receptor de clulas T, as CTLs CD8+ expressam receptores que so
tambm expressos por clulas NK, e que contribuem tanto para a regulao como
para a activao das CTLs. Alguns destes receptores pertencem famlia dos KIR
(killer immunoglobulin receptor) e reconhecem molculas MHC classe I em clulasalvo, mas no so especficos para nenhum pptido do complexo MHC especfico.
Estes KIRs fazem a transduo de sinais inibitrios que podem ter como funo
impedir as CTLs de matarem clulas normais. As CTLs tambm exprimem o receptor
NKG2D, que reconhece as molculas MIC-A, MIC-B e ULBP, semelhantes s MHC
classe I. Este receptor pode ter como funo entregar sinais que actuam em conjunto
com o reconhecimento TCR (receptor de clulas T) de antignio, para melhorar a
induo de morte celular em clulas-alvo.
MORTE DE CLULAS-ALVO POR ACO DE CTLs
Alguns minutos aps o reconhecimento de antignio pelo receptor de uma CTL numa
clula-alvo, esta sofre mudanas que induzem a sua morte por apoptose. A morte da
clulas-alvo ocorre dentro de 2 a 6 horas e procede mesmo que a CTL se separe
desta. O principal mecanismo utilizado para a eliminao destas clulas a libertao
de protenas citotxicas, armazenadas em grnulos citoplasmticos (lisossomas
secretrios) dentro das CTLs.
A activao de uma CTL leva a uma reorganizao do seu citoesqueleto,
nomeadamente dos centros de organizao dos microtbulos que se dirigem para a
rea do citoplasma perto do contacto com a clula-alvo. Os grnulos citoplasmticos
104

das CTLs so transportados atravs de microtbulos e concentram-se na regio da


sinapse, onde se d a fuso entre a membrana dos grnulos e a membrana
plasmtica da CTL no domnio secretrio. Disto resulta a exocitose dos contedos
granulares da CTL para o anel sinptico, entre as membranas plasmticas desta
clula e da clula-alvo.
Os grnulos das CTLs (e tambm das clulas NK) contm protenas citotxicas,
incluindo granzimas (A, B e C) e perforina, e tambm serglicina que estabelece um
complexo contendo os outros dois tipos de protenas. A perforina uma molcula
alteradora de membrana plasmtica que pensa-se facilitar a entrada das granzimas no
citosol da clula-alvo, e uma vez no citosol, as granzimas clivam vrios substratos (por
exemplo caspases) e iniciam a morte por apoptose da clula-alvo. Os grnulos das
CTLs (e das clulas NK) tambm podem conter uma protena chamada granulisina,
que altera a permeabilidade das membranas de clulas-alvo e de microrganismos, e
cuja importncia para a morte celular induzida por CTLs ainda no foi estabelecida.
As CTLs tambm apresentam um mecanismo independente de grnulos, que
mediado por interaces entre molculas membranares das CTLs e das clulas-alvo.
Durante a activao das CTLs estas expressam ligando Fas (FasL), protena
membranar que se liga ao death receptor Fas presente em muitos tipos celulares, e
que, semelhana da reaco aos grnulos, resulta na activao de caspases e na
apoptose das clulas-alvo. Algumas clulas T CD4+ tambm so capazes de matar
clulas infectadas, mas sendo que estas clulas T apresentam pouca concentrao de
perforina e de granzimas, pensa-se que o FasL seja mais importante nesta actividade.
Aps o golpe letal administrado pela CTL, esta liberta-se da clula-alvo, normalmente
antes da morte celular. As prprias CTLs no so danificadas durante o processo,
talvez porque a exocitose direccionada dos grnulos leva a que estes actuem
preferencialmente nas clulas-alvo, longe das CTLs. Para alm disso os grnulos das
CTLs contm uma enzima proteoltica chamada catepsina B, que administrada
superfcie da CTL onde degrada molculas errantes de perforina que podem atacar a
membrana da prpria.

PAPIS DESEMPENHADOS PELAS CTLs NA DEFESA DO HOSPEDEIRO


Situaes nas quais as clulas no conseguem destruir os microrganismos que as
infectam: em infeces por vrus que sobrevivem e se replicam em clulas que so
incapazes de destruir microrganismos (exemplo do vrus da hepatite em clulas
hepticas); ou no caso de os microrganismos escaparem das vesculas fagocticas
e sobreviverem no citoplasma da clula infectada (este caso vlido at em
fagcitos, pois a sua aco microbicida limitada s vesculas fagocticas para no
danificar a prpria clula). Estas infeces apenas podem ser eliminadas pela
destruio das clulas, e por isso a activao de caspases pelas granzimas e pelo
FasL, importante, apesar de no distinguir entre substrato microbiano ou do
hospedeiro.
A expanso massiva de clulas T CD8+ que se segue a uma infeco faculta uma
grande quantidade de CTLs para combater estas infeces. Defeitos no
desenvolvimento e actividade de CTLs resultam numa susceptibilidade aumentada a
105

infeces virais e algumas infeces bacterianas, e tambm reactivao de


infeces virais latentes (por exemplo o vrus Epstein-Barr) que so mantidas
normalmente controladas por CTLs especficas para o vrus. A destruio por CTLs de
clulas infectadas uma das causas de danos em tecidos nalgumas doenas, por
exemplo: durante infeces por vrus da hepatite B e C, as clulas hepticas
infectadas so destrudas por CTLs do hospedeiro (e tambm por clulas NK), e no
pelos vrus.

FUNES DE OUTRAS CATEGORIAS DE CLULAS T


A maioria das clulas T no organismo so clulas helper CD4+ e CTLs CD8+, mas,
para alm destas, existem populaes mais pequenas de clulas T que apresentam
propriedades distintas e, provavelmente, desempenham funes especializadas na
defesa do hospedeiro. As populaes mais bem estudadas so as de clulas T e T
NK, e estas apresentam caractersticas em comum que as distinguem das clulas
CD4+ e CD8+:
Reconhecem uma vasta variedade de antignios, muitos dos quais no so
pptidos, e no so dispostos por molculas MHC classe I e classe II em
APCs;
Muitos dos seus receptores de antignios tm diversidade limitada, sugerindo
que ambos os tipos celulares evoluram para reconhecer um grupo restrito de
microrganismos (e devido a esta propriedade diz-se que estas clulas T
encontram-se no limite entre a imunidade inata e adaptativa);
Ambos os tipos celulares so abundantes em tecidos epiteliais, como por
exemplo no TGI.

CLULAS T ( T CELLS)
Estas clulas apresentam como receptores de antignio de clulas T (TCR)
heterodmeros, formados pelas cadeias e , homlogas s cadeias e dos TCR
presentes nas clulas CD8+ e CD4+. Estes TCRs especficos so o que distingue esta
linhagem celular. O heterodmero associa-se s protenas CD3 e da mesma forma
que o heterodmero , e a sinalizao induzida pelo TCR a semelhante
induzida por TCR .
Diferentes populaes de clulas T podem desenvolver-se em alturas distintas da
ontogenia, contendo diferentes regies variveis (V) e residindo em diferentes tecidos.
As clulas T encontradas em orgos linfides expressam TCRs mais diversificados
do que as clulas T epiteliais, e apesar do potencial de diversidade terico dos TCR
ser ainda maior que a diversidade dos TCR , observa-se a expresso de um
nmero restrito de regies V e , e existe pouca ou nenhuma diversidade juncional.
A variedade limitada de TCRs em muitos tecidos sugere que os ligandos para estes
receptores podem ser invariveis e conservados.
As clulas T no reconhecem antignios peptdicos associados ao MHC e no so
restritas ao reconhecimento por esse complexo. Algumas linhagens clonais de clulas
106

T reconhecem pequenas molculas fosforiladas, e at lpidos que so


encontrados frequentemente em micobactrias e outros microrganismos, e que podem
ser apresentados de forma no clssica por molculas semelhantes s MHC classe
I. Outras clulas T reconhecem antignios protecos ou no-protecos que no
necessitam processamento por nenhum tipo de APC para a sua apresentao, e
muitas reaces por clulas T so desencadeadas por protenas de choque trmico
(heat-shock proteins) microbianas.
Uma das possveis justificaes para a especificidade das clulas T , que talvez a
sua funo no organismo seja reconhecer antignios frequentemente encontrados nas
fronteiras epiteliais entre o hospedeiro e o ambiente externo. Um grande nmero de
actividades biolgicas foi atribudo s clulas T , incluindo a secreo de citocinas e
a morte de clulas infectadas, mas a funo destas clulas permanece
incompreendida.

CLULAS T NATURAL KILLERS (NKT CELLS)


Uma pequena populao de clulas T expressa marcadores que so encontrados em
clulas NK, como CD56, e por isso estas clulas so chamadas NKT. As cadeias do
TCR expressas pelas clulas NKT tm uma diversidade limitada, e estas clulas so
caracterizadas por uma regio V codificada por um segmento de gene V24-J18
rearranjado, com pouca ou nenhuma diversidade juncional. Devido a esta diversidade
limitada, estas clulas so tambm chamadas de clulas NKT invariveis (iNKT).
Todos os TCRs de clulas NKT reconhecem lpidos ligados a molculas semelhantes
s MHC classe I, chamadas CD1.
As clulas NKT e outras clulas T especficas para antignios lipdicos so capazes de
produzir rapidamente citocinas como IL-4 e IFN- aps activao, e podem ajudar as
clulas B da zona marginal a produzir anticorpos contra estes antignios. As clulas
NKT podem mediar respostas imunes inatas contra alguns patognios (como
micobactrias), e as clulas iNKT podem at regular primariamente as respostas
imunes adaptativas atravs da secreo de citocinas. No entanto, o papel
desempenhado por estas clulas no sistema imunitrio e na patgenese de certas
doenas ainda permanece pouco claro.

107

T8: Apresentao de Antignios pelo MHC


Data terica de 17 de Outubro de 2011
Captulos do Abbas: 6

Elaborado por: Marta Bento

MHC E APRESENTAO DE
ANTIGNIOS AOS LINFCITOS T

Linfcito T

Funo: erradicar infeces de micrbios intracelulares


e activao de outras clulas imunitrias.

FUNES E INTERACES COM O SISTEMA IMUNITRIO:


Indentificao especfica de um antignio. Facilitado pelas APC (Clulas
Apresentadoras de Antignio), nomeadamente as clulas dendrticas que
migram para os rgos linfides secundrios onde esto alojados os
linfcitos T imaturos.
Interaco com clulas do prprio infectadas (CD8+) ou com outras
clulas do sistema imunitrio (CD4+) por intermdio de molculas do
Complexo Major de Histocompatibilidade expressas na superfcie das
clulas.
As clulas T CD4+ participam na formao de anticorpos efectivos.
As clulas T CD8+ eliminam clulas infectadas.
A segregao de antignios para ser apresentados a populaes de clulas
T diferentes efectuada pelas molculas MHC.

108

PROPRIEDADES
LINFCITOS T

DOS

ANTIGNIOS

RECONHECIDOS

PELOS

Propriedades dos antignios


reconhecidos pelos linfcitos T

Pptidos de
sequncia curta.
Razo: s os
pptidos se ligam
ao MHC

Antignios de
sequncia linear
Razo: perde-se a
conformao na
gerao de MHC antignio

Antignios
associados ao
MHC

CD4+ liga-se a
antignio-MHC classe
II. Origem extracelular.
CD8+ liga-se a
antignio-MHC classe
I. Origem citoslica.

CAPTURA DE ANTIGNIOS E FUNES DAS CLULAS


APRESENTADORAS DE ANTIGNIO
A apresentao de antignios aos linfcitos T CD4+ por outras clulas
(APCs) um passo crtico na induo d e resposta

PROPRIEDADES DAS APC

Tipos de APCs : Clulas Dendrticas ( activam clulas T imaturas);


Macrfagos e Linfcitos B (APCs principalmente nas T CD4+ previamente
activadas).
Expressam MHC de classe II e co-estimuladores (segundos sinais). Libertam
citocinas.
Os macrfagos e clulas dendrticas expressam receptores Toll-like
aumentando a expresso de MHC II, co-estimuladores, citocinas e quimioreceptores (para migrao) na presena de micrbios.
As APCs tambm recebem sinais dos linfcitos Tque melhoram a sua funo.
Ex: CD40 e IFN- expressos por linfcitos T.

109

PAPEL DAS CLULAS DENDRTICAS NA CAPTURA E APRESENTAO DE


ANTIGNIOS

Porta de Entrada

Transporte por vasos linfticos na


forma livre e associada s clulas
dendrticas ou transporte nos vasos
sanguneos na forma livre.
Acumulao de antignios nos
gnglios linfticos e no bao onde
so apresentados ou capturados
para apresentao.

MORFOLOGIA E POPULAES DE CLULAS DENDRTICAS


Identificadas pelas suas projeces

membranares.
Diferenciam-se a partir de precursores da linhagem fagoctica mononuclear
Duas populaes predominantes:

Clulas Dendrticas
Convencionais

110

Tambm chamadas de clulas


dendrticas mielides
Mais numerosas
Activao Clssica
Uma das suas populao
corresponde clulas de
Langerhans (epiteliais)

Clulas Dendrticas
Plasmocitides

Morfologicamente semelhantes aos


plasmcitos
Adquirem a forma e funo das DC
quando activadas
Encontram-se no sangue e orgos
linfides
So apresentadoras e segregam
interferes do tipo I em infeco viral

Acredita-se que as clulas dendrticas imaturas possam estar a apresentar antignios


do self s clulas T reactivas ao self de forma a estimular a sua inactivao ou morte.

CAPTURA E TRANSPORTE DE ANTIGNIOS PELAS CLULAS DENDRTICAS

DC imaturas expressam lectinas do tipo


C que se ligam aos microrganismos; os
receptores Toll-like activam as DC.
Ingesto dos microrganismos por
endocitose mediada por receptores,
micro e macropinocitose.
As DC expressam quimioreceptor
CCR7 que se liga a CCL19 e CCL21
dos gnglios linfticos migrao.

No entanto, alguns dos antignios alcanam os gnglios e o bao na sua forma


livre sendo a capturados pelas clulas dendrticas residentes ou linfcitos B.

APRESENTAO DE ANTIGNIOS PELAS CLULAS DENDRTICAS


As APCs so capazes, como todas as clulas nucleadas, de induzir activao
dos linfcitos T CD8+. So, no entanto, mais eficientes que as restantes. E como
j sabemos, so igualmente apresentadoras das clulas CD4+.

FUNES DE OUTRAS CLULAS APRESENTADORAS DE ANTIGNIOS

Macrfagos: os moncitos tm a capacidade de migrar para qualquer local e


diferenciar-se em macrfagos, E apresentar aos linfcitos T CD4+ , que por
sua vez activam os macrfagos para actividade microbicida.
Linfcitos B: apresentam s T CD4+, que por sua vez estimulam a produo
de anticorpos pelas clulas B.
Todas as clulas nucleadas: apresentam a T CD8+ CTLs (populao de
linfcitos T).
111

Clulas do endotlio vascular: expressam MHC II, muitas vezes em resposta


a INF- , mas com pouca eficincia.

NOTA: Sabe-se que as clulas T activadas expressam tambm MHC II, no entanto,
no se conhece a sua funo.

COMPLEXO MAJOR DE HISTOCOMPATIBILIDADE (MHC)


DESCOBERTA DO MHC
Enxertos em animais no-idnticos Rejeio

Causa Gentica

Enxertos em animais idnticos Aceitao

Criaram ratinhos geneticamente idnticos excepto na sua capacidade de


rejeio de enxertos. Resultado: mostraram que uma nica regio gentica
responsvel por esta rejeio locus major de histocompatibilidade.

No entanto, este locus no continha um nico gene passando a denominarse Complexo Major de Histocompatibilidade. Nos ratinhos referido
como H-2.

O MHC HUMANO (HLA)


denominado HLA porque cientistas descobriram que pacientes
transplantados contm anticorpos contra protenas dos dadores as Human
Leukocyte Antigens (HLA). Hoje sabe-se que todos os mamferos
partilham estruturas homlogas aos HLA.

GENES RESPONSVEIS PELA RESPOSTA IMUNITRIA


No entanto, no fazia sentido conservar evolutivamente genes que tinham
como nica funo rejeitar tecidos. Descobriram ento que eles eram
tambm responsveis pela resposta imunitria (Ir) e, assim, j fazia sentido
conserv-los.

GENES MHC
O locus MHC contm
genes polimrficos MHC
classe I e II e outros no
polimrficos.
112

Estes genes so expressos em co-dominncia.


So os genes mais polimrficos do genoma humano.
Determinam a especificidade na ligao do pptido, ou seja, numa
populao h sempre indivduos que conseguem resistir a uma determinada
infeco impossibilitando a aniquilao de uma espcie inteira.

LOCI DO MHC NOS HUMANOS [E RATINHOS]


Localiza-se no cromossoma 6.
CLASSES DE HLA:

HLA classe I

Genes HLA-A, HLA-B e HLA-C

HLA classe II

Genes HLA-DP, HLA-DQ e HLA-DR

Nos HLA de classe II cada molcula de MHC


composta por um polipptido e um . Cada loci de
HLA-DP, HLA-DQ e HLA-DR tem genes A e B que
codificam as cadeias e .
Nomenclatura leva em considerao os
polimorfismos. Ex: HLA-A*0201 do
Serogrupo 01 do subtipo HLA-A2.

RATINHOS

H-2K, H-2D e H-2L

MHC classe I

I-A, I-E

MHC classe II

Cada alelo chamado de haplotipo (ex: HLA-A2). Indivduos heterozigticos tm


dois haplotipos.

EXPRESSO DE MOLCULAS DE MHC


Padro de restrio das MHC. MHC I CD8+; MHC II CD4+
Aumenta a expresso de MHC na presena de citocinas:
MHC I

MHC II

INF-, INF- e INF- (resposta do S. I. Inato a


infeco vrica)
INF- (produzido por NK na resposta do S. I.
Inato)
113

A expresso de MHC aumenta devido ao aumento da taxa de transcrio


provocado pelas citocinas ligao de factores de transcrio activados
pelas citocinas. Ex: INF- estimula a sntese da protena CIITA que activa o
complexo de transcrio para MHC II

MOLCULAS DE MHC
PROPRIEDADES GERAIS:
As molculas de MHC consistem numa fenda ou sulco que aloja o pptido,
domnios Ig-like transmembranares e cistoplasmticos
As MHC tm resduos polimrficos (regies variveis) que se localizam no
sulco que aloja o pptido. Resulta numa ligao preferencial a antignios com
maior afinidade.
Os domnios Ig-like tm locais de ligao para CD4 e CD8.

MOLCULAS MHC CLASSE I

Consiste em duas cadeias ligadas no-covalentemente: uma cadeia e uma


subunidade 2-microglobulina.
A cadeia constituda por trs segmentos, os domnios 1, 2 e 3
Os segmentos 1 e 2 so polimrficos e formam o sulco esto prximos e
por isso s conseguem acomodar pequenos pptidos
O segmento 3 o local de ligao de CD8
A estabilidade estrutural entre a cadeia e a 2-microglobulina mantida
pela presena do pptido e vice-versa.
Indivduos heterozigticos expressam 6 tipos de MHC I em cada clula ( todos
temos genes HLA-A, B e C, logo ser heterozigtico para todos estes genes implica
a expresso de duas cadeias por cada gene 6)
114

MOLCULAS MHC CLASSE II

Consiste em duas cadeias ligadas no-covalentemente: uma cadeia e


uma cadeia .

Os segmentos 1 e 1 so polimrficos e formam o sulco que aloja o


pptido.
Os segmentos 2 e 2 so no-polimrficos. 2 o local de ligao para
CD4
Para as molculas de MHC II tambm necessria a presena do pptido
para a estrutura ser estvel.
Cada indivduo herda genes HLA-DPA1, HLA-DPB1, HLA-DRA1, HLADRB1, HLA-DQA1, HLA-DQB2 de cada progenitor e podem ainda ter
duplicados de HLA-DR3, 4 ou 5. Ou seja, herda-se de 6 a 8 genes de MHC
II.

LIGAO DE PPTIDOS S MOLCULAS DE MHC

CARACTERSTICAS DA INTERACO PPTIDO-MHC


Os MHC tm uma fraca especificidade para os pptidos comparando com os
receptores dos linfcitos, ou seja, podem ligar-se a um largo espectro de pptidos.
Cada molcula de MHC liga-se a um pptido de cada vez.
Pptidos de cadeia curta favorecem esta interaco (permite acomodarem-se no
sulco).
As molculas de MHC adquirem o pptido durante a sua biossntese. As molculas
de MHC I adquirem os pptidos a partir de protenas citoslicas e as MHC II a partir
115
de protenas em vesculas intracelulares.

A taxa de dissociao do pptido ao MHC muito baixa maximizando a hiptese


de ligao a um receptor de linfcitos T.
Os MHC no discriminam entre protenas do self e antignios. As clulas T tm
essa capacidade.

BASE ESTRUTURAL DA LIGAO PPTIDO-MHC

A ligao nocovalente.
No MHC I a associao do
pptido implica a presena
de um N-terminal positivo e
um C-terminal negativo.

Os sulcos muitas
vezes apresentam
pockets que se
ligam
preferencialmente a
determinados
aminocidos, os
resduos ncora.

A clulas T
tambm
reconhecem e
interagem com
os resduos
polimrficos do
MHC.

PROCESSAMENTO DE PROTENAS ANTIGNICAS


VIA DO MHC I PARA PROCESSAMENTO E APRESENTAO DE PROTENAS
CITOSLICAS

1. As protenas apresentadas pelo MHC I so sintetizadas no interior da clula


(podem ter origem em vrus e microrganismos intracelulares). Tambm pode
ocorrer ruptura dos fagossomas e essas protenas podem ser apresentadas pelo
MHC I.
2. O maior mecanismo de gerao de pptidos a protelise executada pelo
proteassoma. Em clulas expostas a INF- so produzidas subunidades do
proteassoma que favorecem a apresentao dos pptidos. Algumas protenas no
requerem esta protelise, so degradadas por protenas citoslicas.

116

3. As protenas geradas no citosol so translocadas pela TAP (transportador


associado ao processamento de antignios) para o RE e as sintetizadas esto
disponveis no retculo endoplasmtico para ligao ao MHC I. As TAP
localizam-se na membrana do RE e esto associadas a protenas tapasina que
preparam o MHC I para receber o pptido.
4. Construo dos complexos MHC I-pptido no RE. A sntese do MHC I depende
de chaperones calnexina e calreticulina. Estas protenas juntamente com a TAP,
tapasina, oxireductase ERP57 e MHC I formam um complexo que recebe o
pptido.
5. Os complexos estabilizados passam pelo complexo de Golgi e so transportados
por vesculas para a superfcie celular e apresentados s T CD8+.

VIA DO MHC II PARA


PROTENAS VESICULARES

PROCESSAMENTO

APRESENTAO

DE

1. A maior parte destas protenas tem uma origem extracelular e so internalizadas


em endossomas nos APCs. As clulas dendrticas e macrfagos expressam
receptores que reconhecem estruturas comuns a muitos microrganismos. Os
macrfagos expressam receptores Fc que ligam pores Fc dos anticorpos e
receptores para a protena C3b do complemento. Os receptores de linfcitos B
reconhecem com grande especificidade e internalizam antignios.
2. Os endossomas fundem-se com lisossomas. Alguns destes lisossomas contm
produtos j da prpria clula (ou de virus que a infectam) que sero mais tarde
apresentados pelos MHC II, este mecanismo permite a activao de TCD4+ em
infeces virais.
3. Existe digesto proteoltica nas vesculas para formar os pptidos.

117

4. Os pptidos formados ligam-se aos MHC II que se encontram nos endossomas


tardios (tambm chamados de MIIC nos linfcitos B e macrfagos)
5. Biossntese e transporte dos MHC II para os endossomas. So sintetizadas no
RE e transportadas pela protena Ii que ocupa o sulco da MHC II. A sua sntese
est dependente de chaperones como a calnexina e estabilizado pela Ii. Os MHC
II so transportados em vesculas at aos endossomas.
6. Nos endossomas as MHC II dissociam-se de Ii por aco da enzimas; permanece
uma protena CLIP no sulco que removida pela molcula HLA-DM. Os pptidos
ligam-se ento ao MHC II.
7. Os complexos estabilizados so apresentados na superfcie da clula aos T
CD4+.

Apresentao Cruzada
Extracelulares CD8+

Clulas Dendrticas que capturam


clulas tumorais ou infectadas com
vrus que so apresentadas a T
CD8+.
Envolve a fuso do fagossoma
com o RE.

SIGNIFICADO FISIOLGICO DA APRESENTAO ASSOCIADA A MHC


NATUREZA DA RESPOSTA CELULAR DAS CLULA T

MHC I CD8+.

MHC II( macrfago) CD4+.

MHC II (linfcito B) CD4+.

118

Antignios
Imunodominantes

Antignios que produzem respostas


dos linfcitos T mais eficientes so
aqueles cujos eptopos possuem
grande afinidade para o MHC e
para os quais o indivduo j est
imunizado (clulas T especficas).

APRESENTAO DE ANTIGNIOS NO-PROTEICOS A POPULAES


DE CLULAS T
NKT

Reconhecem lpidos e glicolpidos em receptores


CD1 (do tipo MHC I).

Reconhecem lpidos, protenas, molculas


fosforiladas e aminas alquil. No se sabe se existe
um sistema de apresentao associado a estas
clulas.

119

T9: Imunodeficincias Primrias


Data terica de 21 de Outubro de 2011
Captulos do Abbas: 20
Slides aulas: sim
Elaborado por: Tatiana
Elaborado
Oksentyuk
por: Tatiana
& Mnica
Oksentyuk
Santos

A integridade do sistema imunolgico essencial no mecanismo de defesa do


organismo contra agente infeccioso e seus produtos txicos. Deficincia num ou mais
que um componente do sistema imunolgico pode induzir doenas graves, que podem
ser fatais as imunodeficincias, e que podem ser classificadas em dois grandes
tipos:

Doenas primrias ou congnitas, que so causadas pelos defeitos


genticos, que resultam em aumento de susceptibilidade infeco.
Manifestam-se frequentemente na infncia e/ou adolescncia, embora possam
ser detectadas clinicamente mais tarde, j na idade adulta.

Doenas adquiridas ou secundrias no so herdadas, so consequncia


de desnutrio, cancro, tratamento imunossupressor ou infeco das clulas
do sistema imunolgico, principalmente com o vrus da imunodeficincia
humana (HIV), o agente etiolgico da sndrome da imunodeficincia adquirida
(SIDA). Este captulo descreve os principais tipos de imunodeficincias
congnitas e adquiridas, com nfase na sua patogenia e nos componentes do
sistema imunolgico que esto envolvidos nestes processos. O HIV/SIDA
abordado noutro captulo.

CARACTERSTICAS GERAIS DA IMUNODEFICINCIA


1- A principal consequncia da imunodeficincia um aumento da
susceptibilidade infeco. A natureza da infeco num paciente em
particular depende em grande parte de componente do sistema imunolgico
que est com defeito (Tabela 1). Imunidade humoral deficiente normalmente
resulta em aumento da susceptibilidade infeco por bactrias encapsuladas
e purulentas e alguns vrus, enquanto os defeitos na imunidade mediada por
clulas levam infeco por vrus e outros micrbios intracelulares. As
deficincias combinadas (humoral + mediada por clulas) tornam os
pacientes susceptveis infeco por todas as classes de microrganismos
(maioritariamente oportunistas).

120

2- Pacientes com imunodeficincias tambm so susceptveis a certos tipos de


cancro. Muitas destas patologias parecem ser causadas por vrus oncolgicos,
como vrus Epstein-Barr. O aumento da incidncia de cancro mais
frequentemente visto em imunodeficincias de clulas T, porque as clulas T
desempenham um papel importante na vigilncia contra vrus oncolgicos e os
tumores que causam.
3- Paradoxalmente, certas imunodeficincias esto associadas com um aumento
da incidncia de auto-imunidade. O mecanismo subjacente a esta
associao no conhecido.

4- Imunodeficincia
pode
resultar
de
defeitos
nos
linfcitos
em
desenvolvimento/activao ou de defeitos nos mecanismos efectores da
imunidade inata e adaptativa. Imunodeficincias so clinicamente e
patologicamente heterogneas, em parte porque diferentes doenas
envolvem diferentes componentes do sistema imunolgico do sistema.

5- As imunodeficincias congnitas podem englobar ainda defeitos nos


componentes do sistema imunolgico inato.

IMUNODEFICINCIAS CONGNITAS (PRIMRIAS)


Em diferentes imunodeficincias congnitas, o causador da anormalidade pode estar
em componentes do sistema inato, em diferentes estgios de desenvolvimento de
linfcitos ou nas respostas de linfcitos maduros para estimulao antignica.
Anormalidades hereditrias relacionadas com imunidade inata (mais comuns)
afectam o complemento ou fagcitos. Anormalidade no desenvolvimento linfocitrio
pode ser causada por mutaes em genes que codificam uma variedade de
molculas, incluindo enzimas, protenas de transporte, e factores de transcrio.
As Imunodeficincias primrias so ento causadas por mutaes hereditrias nos
genes de codificao de componentes do sistema imune inato ou em genes
necessrios para o desenvolvimento de linfcitos e activao.
121

DEFEITOS NA IMUNIDADE INATA


Imunidade inata constitui a primeira linha de defesa contra organismos infecciosos.
Dois mediadores importantes da imunidade inata so os fagcitos e complemento,
ambos participantes nas fases efectoras de imunidade adaptativa. Portanto, distrbios
congnitos de fagcitos e do sistema complemento resultam em infeces recorrentes.

DEFEITOS NO SISTEMA DE COMPLEMENTO

Defeitos na via clssica: Muitas vezes tambm contribuem para a


susceptibilidade a doenas auto-imunes, por deposies de complexos
imunes, particularmente o lpus eritematoso sistmico
Defeitos na via da lectina e na via alternativa geralmente apresentam-se
atravs de infeces bacterianas recorrentes, principalmente por bactrias
encapsuladas e tambm espcies de Neisseria..

DEFEITOS NA FAGOCITOSE
DOENA GRANULOMATOSA CRNICA

A Doena Granulomatosa Crnica (CGD) causada por mutaes em componentes


da oxidase do complexo enzimtico de fagcitos (phox). uma doena rara, e
cerca de dois teros dos casos mostram um padro recessivo ligado ao X, sendo o
122

restante autossmico recessivo. Isto leva a um problema no mecanismo que


desencadeia o respiratory burst, levando a uma destruio dos micrbios
fagocitados pouco eficiente.
A doena caracterizada por infeces recorrentes com bactrias e fungos catalase
positivos, geralmente desde a infncia. Os casos mais problemticos de CGD so
precisamente por infeces com organismos que produzem catalase, que destri
perxido de hidrognio microbicida, envolvido no respiratory burst, agravando o
problema.
As infeces no so controladas por fagcitos, por isso elas estimulam respostas
imunes mediadas por clulas - activao de macrfagos mediada por clulas T e
formao de granulomas compostos por macrfagos activos. Estes tentam limitar ou
eliminar os micrbios, apesar do defeito na produo de espcies reactivas de
oxignio. Esta aparncia histolgica a base para o nome da doena, que
frequentemente fatal, mesmo com antibioticoterapia agressiva.
Como terapia, usado o IFN-, que estimula a produo de superxido de hidrognio
por clulas normais, tentando compensar as falhas existentes.

SNDROME DE CHDIAK-HIGASHI

Este Sndrome uma doena rara e autossmica recessiva caracterizada por


infeces recorrentes por bactrias piognicas, albinismo e infiltrao de vrios rgos
por linfcitos no-neoplsicos. Os neutrfilos, moncitos e linfcitos desses pacientes
contm lisossomas gigantes.
Esta doena causada por mutaes no gene que codifica a proteina Lyst reguladora
do trfico lisossomal, resultando numa fuso defeituosa do fagossoma com o
lisossoma. Alm de causar problemas na imunidade, leva formao defeituosa de
melanossomas (causando o albinismo), e anormalidades nervosas e plaquetrias.
Ainda, a funo das clulas NK nesses pacientes prejudicada, provavelmente por
causa de uma anormalidade nos grnulos citoplasmticos que sustentam a sua
citotoxicidade. A gravidade do defeito em funcionalidade dos linfcitos T citotxicos
(CTL) varivel entre os pacientes.

DEFICINCIAS NA ADESO DE LEUCCITOS (LAD)


Estas deficincias so causadas por mutaes em molculas necessrias ao
recrutamento de leuccitos para os locais de infeco, atravs do endotlio. So
autossmicas recessivas e resultam em periodontites severas, outras infeces
recorrentes e incapacidade para fazer pus.

123

As molculas em causa so integrinas (como a LFA-1 j falada) e ligandos de


selectinas (a E-selectinas e P-selectinas tambm j faladas). Uma mutao na LFA-1
vai ainda interferir na estabilidade da ligao das APCs aos linfcitos T.
Consoante o local da mutao, assim se distinguem trs tipos de LAD: LAD-1, LAD-2
e LAD-3.

DEFEITOS EM SINALIZAES
Defeitos na sinalizao TLR (o defeito mais conhecido de MyD88) e na
sinalizao interfero tipo I podem contribuir para infeces recorrentes piognicas,
bem como infeces virais graves.
Defeitos de IL-12 e IFN- so ligados susceptibilidade aos patognicos
intracelulares, em particular infeces por micobactrias.

DEFEITOS NA IMUNIDADE ADQUIRIDA


Os defeitos na Imunidade Adquirida podem dividir-se em dois grupos:

SCID

Dfice de Anticorpos

SCID: IMUNODEFICINCIAS COMBINADAS SEVERAS


As SCID so um conjunto de Imunodeficincias que abrangem toda a Imunidade
Adquirida: tanto a Imunidade Celular como a Humoral. Podem ser causadas por
defeitos no desenvolvimento/activao de:

linfcitos B e T (como a mutao nas enzimas RAG)


linfcitos T apenas (como o Sndrome de DiGeorge); porque j sabemos que
a Imunidade Humoral tem uma componente T-dependente bastante
importante, e portanto ficaria tambm ela comprometida.

Por haver falhas to abrangentes na imunidade, quem sofre desta deficincia est
susceptvel a todo o tipo de agentes
infecciosos intracelulares e extracelulares
logo assim que nasce, pois nem as IgGs
maternas so eficazes para compensar tais
falhas. Assim, comum os bebs com
SCIDs apresentarem infeces respiratrias,
oportunistas, por fungos mucutneos, e
problemas intestinais recorrentes logo aps
o nascimento.
As SCID so normalmente letais, excepto se
124

o paciente se encontrar sempre num ambiente estril (bubble boy), se receber um


transplante de medula (que contm clulas estaminais hematopoiticas) ou se for alvo
de terapia gnica.

DEFEITOS NA TRANSDUO DE SINAL

A SCID ligada ao X a mais frequente das SCIDs.


causada por uma mutao na cadeia dos receptores
comuns a vrias interleucinas (IL-2, IL-4, IL-7, IL-9, IL15, IL-21), levando a uma ausncia de transduo de
sinal. A ausncia destes estmulos vai levar a:
linfcitos T e clulas NK
linfcitos B
anticorpos (devido falta de estimulao por
parte dos linfcitos CD4+ Th)
Alguns pacientes mostram uma deficincia parecida, mas autossmica recessiva, que
se caracteriza por uma mutao no receptor da IL-7 ou na JAK3 cinase.
Outra causa de um defeito a este nvel uma mutao nos co-receptores CD3 e na
enzima ZAP, que so responsveis pela transduo de sinal do TLR, aquando da
ligao ao complexo MHC-pptido.

DEFEITOS NO METABOLISMO DOS NUCLETIDOS

Dentro das SCIDs autossmicas recessivas, a deficincia da enzima ADA (adenosina


deaminase) a mais frequente. Ela est envolvida na sntese das purinas, e a sua
deficincia leva acumulao de metabolitos txicos que levam inibio da sntese
de DNA, conduzindo a:

linfcitos B, T e clulas NK
Alguns pacientes podem ter nmero normal de linfcitos B e T, mas que no
proliferam correctamente na presena de um antignio.

Outro defeito, mais raro, est relacionado com um defeito na enzima PNP (fosforilase
nucleosdica de purinas), que conduz s mesmas consequncias imunitrias.

DEFEITOS NA RECOMBINAO SOMTICA

125

As enzimas RAG1 e RAG2, como j foi falado, so fundamentais nos Rearranjos


VDJ, por clivarem as cadeias que iro ser rearranjadas, tanto nos linfcitos B, como
nos linfcitos T. Uma deficincia nestas enzimas vai conduzir ao Sndrome de Omenn
(doena autossmica recessiva tambm) em que h um bloqueio na diferenciao dos
linfcitos pr-B e pr-T, levando a:

linfcitos B e T
diversidade de receptores
auto-reactividade
clulas NK

Um problema parecido vai ocorrer devido mutao na DNA-PK (DNA fosforilase).


Esta enzima vai unir as extremidades do DNA clivado anteriormente e finalizar o
Rearranjo VDJ. Sem ela, nada disso seria possvel, mais uma vez.

DEFEITOS NO DESENVOLVIMENTO EMBRIONRIO

O mais comum o Sndrome de DiGeorge. Deve-se a uma malformao congnita


do timo, das glndulas paratiroideias e outras estruturas que derivem da 3 e 4 bolsas
farngeas; leva ainda a cardiopatia congnita. Pensa-se que estes defeitos estejam
relacionados com uma deleo no gene TBX1.
Os defeitos no desenvolvimento tmico, particularmente, causam problemas graves na
maturao dos linfcitos T. Pode causar problemas de produo de anticorpos, devido
s respostas T-dependentes, mas no acontece em todos os casos. A maioria das
crianas por volta dos 5 anos v esta imunodeficncia quase revertida e no precisa
de um transplante de timo fetal ou de medula, uma vez que o tecido tmico existente
consegue desenvolver-se ainda, ou outros rgos assumem a funo do timo.
Outro defeito embrionrio deve-se a mutaes no gene
WHN (winged-helix nude), necessrio ao desenvolvimento
do epitlio tmico e da pele. Isto ir levar tambm a
problemas de maturao dos linfcitos T, associada a uma
ausncia generalizada de plos no corpo.

DFICE DE ANTICORPOS

Por outro lado, as Imunodeficincias na Imunidade Adquirida podem ser mais restritas
e afectar apenas linfcitos B. E aqui no haveria qualquer interferncia com os T.
Este tipo de defeitos, que resultam numa ineficaz produo de anticorpos, manifestase normalmente apenas a partir dos 6 meses de vida, quando as IgGs maternas j
desapareceram do organismo do beb. Nessa altura, aumenta a susceptibilidade a

126

bactrias extracelulares e com cpsulas polissacardicas (alvos de uma Imunidade


Humoral).
Em termos laboratoriais, para identificar estas deficincias, necessrio analisar um
hemograma com contagem diferencial, quantificar as imunoglobulinas sricas e os
linfcitos B em circulao, verificar a resposta do beb vacinao e fazer,
eventualmente, estudos funcionais de proliferao de clulas e secreo de
anticorpos.
A teraputica fcil, administrando-se antibiticos e imunoglobulinas IV. uma
deficincia com bom prognstico.

AGAMAGLOBULINMIA LIGADA AO X (OU DOENA DE BRUTON)

Esta doena uma das mais comuns, e causada por uma mutao na enzima Btk
(Bruton tirosina cinase), importante na maturao dos linfcitos pr-B, levando
ausncia de -globulina no sangue. Este defeito conduz a:

linfcitos B
Ig sricas

Em 20% dos casos, desenvolve-se reaces auto-imunes.

SNDROME DE HIPER IgM

Neste Sndrome, o defeito muito mais tardio. H normal desenvolvimento dos


linfcitos B, e s na presena de um antignio que ele se manifesta.
Como sabemos, atravs da co-estimulao, os linfcitos T CD4 que estiveram em
contacto com o complexo pptito-MHC vo estimular os linfcitos B a produzir
anticorpos especficos. At a, todos os linfcitos B produziam IgM. Induzidos pela
ligao CD40-CD40L, vo dar incio troca de isotipo e hipermutao somtica
que os vai permitir transformar os IgM nos restantes anticorpos.
Erros nesta co-estimulao levaro a uma deficiente troca de isotipo, e portanto a:

IgM
restantes anticorpos

A forma ligada ao X a mais frequente desta doena, e est associada a mutaes no


CD40L. Mais raramente, mutaes no CD40 constituem a forma autossmica
recessiva.

127

T10: Tolerncia
Data terica de 28 de Outubro de 2011
Captulos do Abbas: 14

Elaborado por: Filipa Pereira

TOLERNCIA IMUNOLGICA
Tolerncia imunolgica ou auto-tolerncia: ausncia de resposta imunitria
agressiva a um conjunto de antignios, num sistema imunitrio imunocompetente,
induzida pela exposio prvia a esse antignio.
Tolerognicos

tm capacidade de induzir tolerncia

Antignios
Imunognicos

geram imunidade

CARACTERSTICAS GERAIS DA TOLERNCIA IMUNOLGICA

128

Indivduos normais so tolerantes aos seus antignios porque os linfcitos que


reconhecem os antignios do prprio so destrudos ou inactivados ou mudam
a sua especificidade.
*Uma falha na auto-tolerncia reaco auto-imune doena auto-imune
A tolerncia resultante do reconhecimento do antignio por linfcitos
especficos e pode ser induzida pelo reconhecimento do antignio durante a
vida fetal ou neonatal.
A auto-tolerncia pode ser induzida em linfcitos auto-reactivos imaturos nos
rgos linfides primrios (tolerncia central) ou em linfcitos maduros em
locais perifricos (tolerncia perifrica).
A tolerncia central ocorre porque, durante a maturao nos rgos linfides
primrios, todos os linfcitos passam por um estgio em que o encontro com o
antignio leva morte celular ou expresso de novos receptores a
antignios ou a uma mudana nas capacidades funcionais.
A tolerncia perifrica ocorre quando os linfcitos maduros que reconhecem
os self antigens se tornam incapazes de responder a esses antignios, ou so
induzidos a morrer por apoptose ou as clulas T maduras esto activamente
suprimidas por clulas T reguladoras.
A escolha entre a activao linfocitria e a tolerncia determinada pelas
propriedades dos antignios, pelo estado de maturao dos linfcitos
antignio-especficos, e pelos tipos de estmulos recebidos quando estes
linfcitos encontram antignios prprios.

Alguns antignios do prprio podem


ser
ignorados
pelo
sistema
imunolgico, na medida em que os
linfcitos que encontram o antignio
podem falhar na resposta, mas
continuam viveis e funcionais.
Antignios estranhos na ausncia
de sinais de co-estimulao podem
inibir respostas imunes pela induo
de
tolerncia
em
linfcitos
especficos.
A induo de tolerncia imunolgica
pode ser explorada em abordagens
teraputicas para prevenir uma
resposta imunolgica indesejvel
(ex. prevenir a rejeio de rgos,
tratamento de doenas alrgicas e
auto-imunes, prevenir reaces
imunolgicas contra novos produtos
gnicos utilizados nos protocolos de
terapia genica e prevenir reaces
dos pacientes com deficincia de
certas protenas).

TOLERNCIA DOS LINFCITOS T


TOLERNCIA CENTRAL DAS CLULAS T
Seleco negativa: deleco
Durante a maturao no timo, muitas clulas T imaturas que reconhecem o
antignio do prprio so eliminadas devido a 2 factores principais: presena
desse antignio no timo, ou expresso local ou chegada pelo sangue, e a
afinidade dos TCR dos timcitos que reconhecem o antignio.
Timcitos imaturos com receptores que tenham alta afinidade para os
antignios do prprio TCR de sinalizao em clulas T imaturas leva
activao de uma protena designada Bim desencadeia a via mitocondrial da
apoptose.
Protenas
do prprio

processadas e apresentadas em associao s molculas de


MHC no timo pelas APCs

Algumas protenas que foram consideradas restritas aos tecidos perifricos so


tambm expressas em clulas epiteliais tmicas sob o controle do gene
regulador auto-imune (AIRE).
Factor de transcrio que tem a capacidade de promover a
expresso ectpica de antignios.
129

Deficincia de AIRE:
o APECED (autoimmune polyendocrinopathy-candidiasis-ectodermal
dystrophy)
o APS-1 (autoimmune polyendocrine syndrome-type 1): causada por
uma mutao no gene AIRE; caracterizada por uma leso
mediada por anticorpos e linfcitos em mltiplos rgos endcrinos,
incluindo as paratirides, supra-renais e ilhotas pancreticas.
Desenvolvimento de clulas T reguladoras
Algumas clulas T CD4+ auto-reactivas que detectam o antignio do prprio no
timo no so eliminadas, em vez disso podem diferenciar-se em clulas T
reguladoras.
*Deficincia da protena AIRE no parece evitar o desenvolvimento de
clulas T reguladoras.
No se sabe o que determina a escolha entre morte celular e desenvolvimento de
clulas T reguladoras.

TOLERNCIA PERIFRICA DAS CLULAS T


Tolerncia perifrica: mecanismo pelo qual
as clulas T maduras que reconhecem
antignios do prprio nos tecidos perifricos
se tornam capazes de responder
subsequentemente a esses antignios

Anergia
Deleco
Supresso das clulas T

ANERGIA (Resposta no Funcional)


Exposio das clulas T
CD4+ a um antignio na
ausncia de co-estimulao
ou imunidade natural pode
tornar as clulas incapazes
de
responder
a
esse
antignio.
O sinal 1 (reconhecimento do
antignio)
prolongado
isoladamente pode levar
anergia.
A anergia resulta de alteraes
bioqumicas ou genticas que
reduzem a capacidade dos linfcitos
em responder a antignios do
prprio.

130

As clulas anrgicas mostram um bloqueio na transduo do sinal induzido


pelo TCR. Devido expresso diminuda de TCR (talvez em virtude de
degradao aumentada) e ao recrutamento diminudo para o complexo TCR de
molculas inibidoras como tirosinas fosfatases.
Reconhecimento do antignio do prprio pode activar ubiquitinas ligases
celulares, as quais podem ubiquitinar protenas TCR-associadas e dirigi-las
para degradao proteoltica em proteassomas ou lisossomas. O resultado
final a perda destas molculas de sinalizao e activao defeituosa das
clulas T.
Quando as clulas T reconhecem antignios do prprio podem englobar
receptores inibidores da famlia CD28, cuja funo terminar as respostas das
clulas T. Os 2 receptores inibidores cujo papel fisiolgico na auto-tolerncia
est mais bem estabelecido so os CTLA-4 e PD-1.
o CTLA-4 compete com o CD28 pelos co-estimuladores B7, e, assim
exclui o CD28 do local de reconhecimento da clula T (CTLA-4 liga-se
s molculas com maior afinidade do que a CD28) e fornece sinais
inibidores que anulam os sinais desencadeados pelo TCR. As APCs
que apresentam antignios do prprio normalmente expressam baixos
nveis de B7, sendo suficiente para envolver o receptor de alta afinidade
CDLA-4. Em contraste, os micrbios que activam as APCs levam a um
aumento da expresso de co-estimuladores B7 e CD28. A ACTL-4
controla principalmente a activao inicial de clulas T nos rgos
linfides.
o Outro receptor inibidor da famlia CD28 PD-1 que reconhece dois
ligantes, designados de PD-L1 e PD-L2 (PD-L1 expresso nas APCs e
em muitas outras clulas; PD-L2 principalmente nas APCs). Este
reconhecimento leva inactivao das clulas T. A PD-1 mais
importante para a limitao das respostas diferenciadas de clulas
efectoras nos tecidos perifricos.
Clulas dendrticas que so residentes nos rgos linfides e tecidos
podem apresentar antignios do prprio aos linfcitos T e manter a
tolerncia. As clulas dendrticas que so activadas por micrbios so as
principais APCs para a iniciao de respostas das clulas T, enquanto as
clulas dendrticas em repouso podem ser tolerognicas.

SUPRESSO DOS LINFCITOS AUTO-REACTIVOS PELAS CLULAS T REGULADORAS


Os linfcitos T reguladores so um subconjunto de clulas T CD4+ cuja
funo suprimir respostas imunes e manter a auto-tolerncia. A maioria
destes linfcitos T reguladores CD4+ expressa altos nveis do receptor IL-2,
mas no outros marcadores de activao de clulas T.
Um factor de transcrio chamado FoxP3, um membro da famlia forkhead de
factores de transcrio, essencial para o desenvolvimento e funo da
maioria das clulas T reguladoras.
Ratos com mutao no gene foxp3 e ratos com o gene knockout
desenvolveram uma doena auto-imune multissistmica associada a uma
ausncia de clulas T reguladoras CD25+.
131

IPEX (desregulao imune, poliendocrinopatia, enteropatia, sndrome ligada ao


cromossoma X) so doenas auto-imunes raras que atingem humanos e esto
associadas com a deficincia de clulas T reguladoras e causado por mutaes no
gene FoxP3.

Marcadores fenotpicos e heterogeneidade das clulas T reguladoras

Apesar de terem sido descritas numerosas populaes de clulas T com actividade


supressora, o tipo de clula cujo papel regulador melhor estabelecido CD4+ FoxP3+
CD25high.
Gerao e manuteno de clulas T reguladoras

132

As clulas T reguladoras so geradas principalmente pelo


reconhecimento de antignios do prprio no timo e pelo reconhecimento
de antignios do prprio e estranhos em rgos linfides perifricos.

A gerao e sobrevivncia das clulas T reguladoras est dependente das


citocinas TGF- (estimula a expresso de FoxP3, o factor de transcrio que
impulsiona a diferenciao da linhagem das clulas T reguladoras) e IL-2
(promove a diferenciao das clulas T no subconjunto de reguladoras e
necessria para a sobrevivncia e manuteno desta populao de clulas;
activa o factor de transcrio STAT5 pode aumentar a expresso de FoxP3).

Mecanismos de aco das clulas T reguladoras

Produzem IL-10 e TGF- (ambos inibem as respostas imunes)


Inibem a capacidade das APCs estimularem as clulas T, dependente de
CTLA-4.
Consumo de IL-2 menos citocina para linfcitos clulas T no se
desenvolvem

TGF- (Transforming Growth Factor-B)


TGF-1 uma protena sintetizada e secretada pelas clulas T reguladoras CD4+,
macrfagos activados e muitos outros tipos celulares.
sintetizada como um precursor inactivo que proteoliticamente clivada no complexo
de Golgi e forma um homodmero que secretado de forma latente em associao
com outros polipptidos, que devem ser removidos extracelularmente por digesto
enzimtica antes da citocina poder ligar-se aos receptores e exercer os seus efeitos
biolgicos.
O receptor TGF-1 tem duas protenas diferentes, o TGF-RI e TGF-RII, ambos com
factores de transcrio fosforilados chamados SMADs.
Funes do TGF-:
Inibe a proliferao e as funes efectoras das clulas T e a activao dos
macrfagos.
Regula a diferenciao da funcionalidade de distintos subconjuntos de clulas
T
Estimula a produo de anticorpos IgA pela induo de clulas B para alterar
este isotipo
Promove a reparao de tecidos aps a diminuio de reaces imunes e
inflamatrias locais
IL-10
A IL-10 um inibidor de macrfagos activados e clulas dendrticas.
O receptor da IL-10 consiste em 2 cadeias, que associam a famlia de cinases Janus
JAK1 e TYK2 e activa o STAT3.
Funes da IL-10:
IL-10 inibe a produo de IL-12 (estmulo fundamental para a secreo de IFNY) pela activao de clulas dendrticas e macrfagos
IL-10 inibe a estimulao de co-estimuladores e molculas da classe MHC-II
em clulas dendrticas e macrfagos

133

DELECO DE CLULAS T POR MORTE CELULAR APOPTTICA


Os linfcitos T que reconhecem antignios do prprio sem inflamao ou
que so repetidamente estimulados por antignios morrem por apoptose.
A morte apopttica pode ser induzida por duas vias bioqumicas:
Via mitocondrial (intrnseco)
regulada pela famlia de protenas Bcl-2 (anti-apoptticas) e podem ser
divididas em 3 grupos:
-Protenas anti-apoptticas de mltiplos domnios (como Bcl-2 e Bcl-X)
-Protenas pr-apoptticas de multidomnios (como Bax e Bak)
-Protenas BH-3-only de domnio nico (sensores de stress).
Sinalizao celular, crescimento dos factores de privao, estmulos nocivos ou
leso do DNA Protenas BH3-only so induzidas ruptura da integridade
mitocondrial:
o Sinalizao de BCR/TCR Bim activada liga-se s protenas prapoptticas Bax e Bak no citoplasma, mudam de conformao,
oligomerizam-se, translocam-se para a membrana mitocondrial externa
e geram um aumento na permeabilidade mitocondrial.
o Tambm podem ligar-se e inibir protenas anti-apoptticas na
membrana mitocondrial externa
Perda de integridade da membrana mitocondrial libertao de alguns
indutores de apoptose mitocondrial como o citocromo c activao de
caspases citoplasmticas, como a caspase-9 morte por apoptose

Via do receptor de morte (extrnseco)

Diversos receptores de superfcie celular da famlia dos TNF podem ligar-se


aos seus receptores fisiolgicos (FasL com Fas) e induzir a activao da
caspase-8 que leva induo da apoptose e pode amplificar o sinal atravs de
uma protena BH3-only pr-apopttica chamada Bid.
134

As clulas T que reconhecem antignios do prprio na ausncia de coestimulao podem activar Bim, resultando em apoptose pela via
mitocondrial.
Estimulao repetida das clulas T resulta na co-expresso de receptores
de morte e os seus ligantes, e o empenho dos receptores de morte
desencadeia morte apopttica. Nas clulas T CD4+, o receptor de morte
relevante chamado Fas (CD95) e o seu ligante o ligando de Fas (FasL).
Fas um membro da famlia de receptores ao factor de necrose tumoral (TNF),
e FasL homlogo citocina TNF. Quando as clulas T so repetidamente
activadas, FasL expresso na superfcie celular e liga-se ao Fas de superfcie
na mesma clula ou em clulas T adjacentes. Isto activa as caspases que
causam apoptose das clulas.
TOLERNCIA PERIFRICA EM LINFCITOS CD8+
Muito pouco se sabe sobre os mecanismos de tolerncia de clulas T CD8+ maduras,
mas possvel que se reconhecerem os pptidos associados ao MHC-II sem coestimulao, imunidade natural ou clulas T auxiliares, estas clulas podero tornar-se
anrgicas. Clulas T CD25+ reguladoras podem inibir directamente a activao das
clulas T CD8+.
Clulas T CD8+ que so expostas a altas concentraes de antignios do prprio
tambm podem sofrer morte celular apopttica.
FACTORES QUE DETERMINAM O GRAU DE TOLERNCIA DOS ANTIGNIOS DO PRPRIO

TOLERNCIA DOS LINFCITOS B


Necessria para manter a ausncia de resposta aos antignios do prprio timoindependentes, como os polissacardeos e os lpidos.

TOLERNCIA CENTRAL DAS CLULAS B


Os linfcitos B imaturos que reconhecem os antignios do prprio com alta
afinidade na medula ssea so eliminados ou mudam a sua especificidade.
Edio do receptor

135

Se as clulas B imaturas reconhecem os antignios do prprio presentes em


altas concentraes na medula ssea e especialmente se o antignio exibido
de forma multivalente (p. ex., na superfcie das clulas), as clulas B
respondem com a reactivao dos seus genes RAG1 e RAG2 e iniciam uma
nova etapa de recombinao VJ no locus do gene da cadeia leve da
imunoglobulina (Ig), adquirindo uma nova especificidade.
Deleco
Se a edio falhar em eliminar a auto-reactividade, as clulas B podem ser
delectadas.
Anergia
Reconhecimento mais fraco dos antignios do prprio pode levar inactivao
funcional em vez de morte celular.

TOLERNCIA PERIFRICA DAS CLULAS B


Os linfcitos B maduros, que reconhecem antignios do prprio nos tecidos
perifricos na ausncia de clulas T auxiliares especficas, podem-se tornar
funcionalmente sem resposta ou morrer por apoptose.
Anergia e deleco
As clulas B auto-reactivas necessitam de altos nveis do factor de crescimento
BAFF/BLys para sobreviver e no podem competir eficientemente com as
clulas B nave normais menos BAFF-dependente para a sobrevivncia nos
folculos linfides. Assim, as clulas B auto-reactivas tm um tempo de vida
reduzido e so rapidamente eliminadas.
As Clulas B que se ligam com alta avidez a antignios do prprio na periferia
tambm podem sofrer morte apopttica pela via mitocondrial independente do
factor de crescimento.
Se as clulas B anrgicas encontrarem quaisquer clulas T auxiliares
antignio-especficas, as clulas B podem ser destrudas por FasL nas clulas
T que atraem Fas nas clulas B.
Sinalizao por receptores inibitrios
Receptores inibitrios: receptor inibitrio Fcy, FcyRII, a protena contendo ITIM
fosfatase-associada CD22 e algumas tirosina cinases.

TOLERNCIA INDUZIDA POR ANTIGNIOS PROTEICOS


ESTRANHOS
Os antignios estranhos podem ser administrados de modo que induzem
preferencialmente tolerncia em vez de respostas imunolgicas:
Altas doses do antignio administradas de forma sistmica, sem adjuvante, tendem a
induzir tolerncia. Os adjuvantes estimulam as respostas imunolgicas naturais e a
expresso dos co-estimuladores nas APCs, e na ausncia desses sinais secundrios,
as clulas T que reconhecem os antignios podem tornar-se anrgicas ou morrer.

136

Tolerncia oral: a administrao oral de um antignio proteico frequentemente induz


acentuada supresso das respostas imunolgicas sistmicas celulares e humorais
imunizao pelo mesmo antignio.
Algumas infeces sistmicas (p. ex. com vrus) podem iniciar uma resposta imune,
mas a resposta comprometida antes de o vrus ser eliminado, resultando num estado
de infeco persistente.
Exausto clonal: os clones de clulas T com o vrus especfico esto presentes mas
no respondem normalmente e so incapazes de erradicar a infeco.
H alguma evidncia de que a exausto clonal devida sub-regulao de receptores
inibitrios tais como as PD-1 sobre as clulas T CD8+ com o vrus especfico.

Quadro resumo com os mecanismos que mantm o estado de tolerncia


* de acordo com os slides das tericas

Ignorncia
perigo/danger

Pauline Matzinger: no somos tolerantes nem deixamos de o


ser, apenas respondemos a danger, inflamao.
Zonas do organismo protegidas da aco do sistema imunitrio.
Ex. locais imuno-previlegiados: placenta, globo ocular
Enzima indoleamina-2,3-desoxigenase (IDO), degrada o triptofano

Privilgio

(presente em grandes quantidades na placenta). Os linfcitos


precisam de capturar triptofano do meio para conseguir proliferar e
activar-se. Esta enzima consegue sugar todo o triptofano que existe
naquele ambiente e na ausncia de triptofano os linfcitos no vo
conseguir activar-se naquele local.
Heme oxigenase 1 (HO-1) degrada o heme e produz alguns
subprodutos que tm propriedades imunosupressoras.
TGF- e o ligando FAS vo actuar em diferentes componentes do
Sistema Imunitrio, induzindo uma ausncia de resposta imunitria,
protegendo o tecido dessa infeco.
Tumores: produo elevada de TGF- no seu ambiente
proliferao sem ser destrudo pelo Sistema Imunitrio

Estado que os linfcitos adquirem passando a ser refractrios a


mais estimulao.
As clulas CD4+ influenciadas por diferentes citocinas vo
acabar por diferenciar-se em funes efectoras distintas que
Immune deviation
conduzem a diferentes caractersticas funcionais e diferentes
propriedades.
Produzidas no timo quando reconhecem antignios do prprio.
Clulas T reguladoras Mais tarde, na periferia, so capazes de suprimir respostas
imunitrias quando so activadas por esse antignio.
Eliminao clonal
Seleco negativa no timo.
Anergia

137

*Hipersensibilidade
Captulos do Abbas: 18, 19
Captulos do Arosa: 17

Elaborado por: Helena Couto

HIPERSENSIBILIDADE
Hipersensibilidade uma designao abrangente para os distrbios causados pelas
respostas imunitrias. Podem dever-se, por exemplo, a um controlo inadequado, a
adopo de tecidos-alvo errados ou a antignios ambientais que habitualmente seriam
inofensivos.
Na generalidade, so causadas por:
auto-imunidade;
reaces contra micrbios (se a reaco imunitria for excessiva ou o
micrbio persistir, por exemplo), englobando processos de inflamao severa,
deposio de complexos imunes, ligao cruzada de anticorpos destinados a
um antignio non-self, reaco contra microorganismos comensais;
reaces contra antignios ambientais, com produo exagerada de IgE.
Em todas as reaces hipersensveis, os mecanismos responsveis pela leso
tecidual sero aqueles que normalmente funcionariam na eliminao de patognios
infecciosos: imunidade inata, linfcitos T, vrias outras clulas efectoras, mediadores
da inflamao O problema surge quando estes mecanismos so activados ou
mantidos de forma inapropriada.
Este tipo de distrbios torna-se ainda mais complicado se pensarmos que o estmulo
destas respostas imunitrias anormais bastante difcil de ser eliminado (antignios
self, micrbios comensais, antignios ambientais). Ento, como o sistema imunitrio
inclui diversos mecanismos de amplificao (feedback positivo), quando uma resposta
imunitria iniciada, difcil control-la ou faz-la terminar. Por essa razo, este tipo
de doenas tende a ser crnica e progressiva, representando grandes desafios na
prtica clnica.

138

Com base no tipo de resposta imunitria e mecanismos efectores responsveis pelas


leses celulares e teciduais, surgiu uma classificao das reaces hipersensveis em
4 grupos principais.

HIPERSENSIBILIDADE TIPO I
Hipersensibilidade imediata. Diz respeito produo de IgE especficos para
antignios ambientais e mastcitos. Tipo de hipersensibilidade mais prevalente. As
alergias so as doenas prottipo deste grupo.

HIPERSENSIBILIDADE TIPO II
Causada por IgM e IgG: ao activarem o sistema complemento, recrutarem clulas
inflamatrias e interferirem com funes celulares normais promovem a leso tecidual.
Estes anticorpos podem ser especficos para antignios em determinado tipo de
clulas ou na matriz extracelular e podem ser encontrados ligados a esses antignios
ou em circulao.

HIPERSENSIBILIDADE TIPO III


Envolve os mesmos mecanismos que a anterior mas diz respeito formao e
deposio de complexos imunes. Esta deposio ocorre maioritariamente nos vasos
sanguneos.

HIPERSENSIBILIDADE TIPO IV
Causada por linfcitos T, que induzem a inflamao atravs da secreo de citocinas
(que, por sua vez, recrutam outros leuccitos, sobretudo neutrfilos e macrfagos) ou
que matam directamente clulas-alvo. Clulas T helper tambm estimulam a produo
de anticorpos que lesionam os tecidos e induzem inflamao. Em algumas doenas,
h envolvimento de CTLs.
Este tipo de classificao, embora seja til para distinguir o tipo de resposta imunitria,
no , na realidade, muito til na prtica clnica. As doenas so complexas e
frequentemente envolvem uma combinao de respostas imunitrias humorais e
celulares, assim como diversos mecanismos efectores ( fcil pensarmos que assim ,
se um nico antignio consegue estimular normalmente respostas humorais e
celulares, produzindo-se vrios tipos de anticorpos e clulas T efectoras). Alm dos
diversos mecanismos envolvidos, a inflamao est muitas vezes associada, pelo
que, frequentemente, estas doenas so apenas agrupadas sobre a designao de
doenas imunitrias inflamatrias (immune-mediated inflammatory diseases).
Considerar este conjunto de doenas num s grupo tem algum valor clnico, j que
muitas delas so tratadas com os mesmos ou semelhantes agentes biolgicos.
As explicaes seguintes so baseadas numa diviso mais abrangente:
Doenas causadas por anticorpos (tipo II, III)
Doenas causadas por anticorpos contra antignios celulares ou teciduais fixos
Doenas causadas por complexos imunes

139

Doenas causadas pr linfcitos T (tipo IV)


Doenas causadas por inflamao mediada por citocinas
Doenas causadas por CTLs
Doenas alrgicas (tipo I)

DOENAS CAUSADAS POR ANTICORPOS


As doenas causadas por anticorpos podem dever-se ligao a antignios fixos em
clulas ou tecidos extracelulares ou formao e deposio de complexos imunes.

DOENAS CAUSADAS POR ANTICORPOS CONTRA ANTIGNIOS


CELULARES/EXTRACELULARES
Afectam especificamente as clulas ou tecidos com um determinado tipo de antignio,
ou seja, geralmente no so sistmicas.
Existem 3 mecanismos de aco principais:

1. OPSONIZAO CELULAR

DOENAS CARACTERSTICAS:

Anemia hemoltica auto-imune

Prpura trombocitopnica
auto-imune

Antigniosalvo

Mecanismos efectores

Protenas da
membrana
eritrocitria

Opsonizao e
fagocitose dos
eritrcitos; lise mediada
pelo complemento

Protenas na
membrana
planetria

Opsonizao e
fagocitose de plaquetas

Manifestaes
clnicopatolgicas
Hemlise
Anemia
Hemorragia

O mesmo mecanismo responsvel pela hemlise em reaces de transfuso.

2. RECRUTAMENTO DE NEUTRFILOS E MACRFAGOS

140

DOENA CARACTERSTICA
Glomerulonefrite mediada por anticorpos (activao leucocitria +
inflamao)

3. INTERFERNCIA COM RECEPTORES OU OUTRAS PROTENAS

Anticorpos que se liguem a receptores celulares ou outras protenas podem interferir


com as suas funes normais, causando doena sem inflamao ou leso tecidual.
DOENAS CARACTERSTICAS
Antigniosalvo
Doena de Graves

Receptor de
TSH

Miastenia gravis

Receptores
colinrgicos

Mecanismos efectores
Estimulao dos
receptores pelos
anticorpos
Anticorpos impedem
ligao de acetilcolina;
down-regulation dos
receptores

Manifestaes
clnicopatolgicas
Hipertiroidismo
Fraqueza muscular
Paralisia

Geralmente, os anticorpos causadores destas doenas so produzidos como parte de


uma reaco auto-imune contra antignios nessas clulas ou tecidos. Mas, menos
frequentemente, estes anticorpos podem ser produzidos contra um antignio non-self,
microbial, por exemplo, e d-se uma reaco cruzada imunolgica com algum
antignio self. A febre reumtica um exemplo deste mecanismo, sendo uma sequela
rara de infeco por Streptococcus pyogenes os anticorpos produzidos contra a
bactria ligam-se tambm a antignios presentes no corao, depositam-se e causam
inflamao e leso do tecido.

DOENAS MEDIADAS POR COMPLEXOS IMUNES


Os complexos imunes que causam doena podem ser formados por anticorpos que se
ligam a antignios self ou a antignios non-self. importante entender que a formao
de complexos imunes no constitui um fenmeno patolgico! Os complexos antignioanticorpo formam-se durante uma resposta imunitria normal e so eliminados da
circulao por macrfagos no fgado e do bao. A doena surge apenas quando estes
so produzidos em quantidade excessiva, ou quando no so eliminados de forma
eficiente, e se depositam nos tecidos.

141

medida que maior quantidade de anticorpos se forma, alguns deles depositam-se


nos leitos vasculares. Nestes tecidos, os anticorpos presentes nestes complexos
podem ento activar o complemento: a activao do complemento conduz ao
recrutamento e activao de clulas inflamatrias (sobretudo neutrfilos) nos
locais de deposio estes neutrfilos vo causar leso tecidual, depois de se
ligarem aos complexos imunes pelos seus receptores de Fc.

Estas doenas afectam geralmente vrios tecidos e rgos, embora alguns possam
ser particularmente vulnerveis, como os rins e as articulaes.
As caractersticas patolgicas das doenas vo reflectir o local de deposio dos
complexos e so independentes do facto de o antignio ser self ou non-self. Ento,
como os complexos tm tendncia para se depositar em artrias pequenas, nos
glomrulos renais ou na sinovial das articulaes, as manifestaes clnico-patolgicas
so frequentemente vasculite, nefrite e artrite.
O prottipo de doena sistmica causada pela deposio de complexos imunes a
doena do soro.
A maioria dos conhecimentos acerca deste tipo de doenas provm de modelos
experimentais de doena do soro, em que animais so imunizados com uma grande
quantidade de antignio estranho. Mas, nestes casos, o quadro clnico vai ser
caracterstico de uma doena do soro aguda os sintomas tm curta durao e as
leses so reparadas a no ser que o antignio seja injectado novamente.
A quantidade de complexos que se deposita nos tecidos depende da natureza dos
complexos e das caractersticas dos vasos sanguneos.

FACTORES QUE INFLUENCIAM A DEPOSIO:


Dimenso dos complexos
Os complexos de pequenas dimenses tendem a depositar-se mais nos vasos do que
os complexos maiores, j que estes so frequentemente eliminados por fagcitos, ao
contrrios dos anteriores, que sofrem menos fagocitose.
Carga elctrica dos antignios
Os complexos com antignios catinicos ligam-se avidamente s membranas basais
dos vasos sanguneos e dos glomrulos renais (carregadas negativamente). Estes
complexos geralmente provocam leso tecidual prolongada e severa.

142

Filtrao capilar
Os capilares dos glomrulos renais e das membranas sinoviais so capilares onde o
plasma ultrafiltrado (para a formao de urina e lquido sinovial, respectivamente),
passando pela parede capilar com uma presso hidrosttica muito elevada. Estes so
locais onde a deposio se verifica frequentemente, embora esta possa ocorrer em
virtualmente todo o lado.
Os complexos imunes tambm se podem ligar aos receptores de Fc nos mastcitos e
nos leuccitos e activar a secreo de citocinas e mediadores vasoactivos. Por sua
vez, estes mediadores podem provocar ainda maior deposio ao aumentar a
permeabilidade vascular e o fluxo sanguneo.
complexos
imunes ligam-se
a receptores de
Fc os mastcitos
e leucitos

deposio de
complexos
imnunes

activao da
secreo de
citocinas e
mediadores
vasoactivos

aumento da
permeabilidade
vascular e fluxo
sanguneo

Inflamao

Muitas doenas sistmicas imunitrias so causadas pela deposio de complexos


imunes nos vasos sanguneos.
Exemplos mais comuns:
Lpus Sistmico Eritrematoso
Vrias formas de nefrite e vasculite
Glomerulonefrite ps-estreptoccica

DOENAS CAUSADAS POR CLULAS T


Os linfcitos T podem causar doena provocando inflamao ou matando
directamente clulas-alvo.

DOENAS CAUSADAS
CITOCINAS

POR

INFLAMAO

MEDIADAS

POR

Na inflamao mediada pelo sistema imunitrio, clulas TH1 e TH17 secretam citocinas
que recrutam e activam leuccitos.
A IL-17, produzida por clulas TH17, promove o recrutamento de neutrfilos.
O interfero- (IFN- ), produzido por clulas TH1 activa os macrfagos.

143

O factor de necrose tumoral (TNF) e quimiocinas, produzidas por linfcitos T e por


outras clulas, tambm esto envolvidos no recrutamento e activao de muitos tipos
de linfcitos.
As leses teciduais vo ser o resultado dos produtos dos neutrfilos e macrfagos
activados (enzimas lisossomais, espcies reactivas de oxignio, xido ntrico, citocinas
pr-inflamatrias).

As clulas do endotlio vascular nas zonas lesadas podem depois expressar nveis
aumentados de protenas de superfcie cuja regulao depende de citocinas, por
exemplo, molculas de adeso e molculas MHC II, que agrava o processo de
recrutamento.
A inflamao associada a doenas mediadas por clulas T geralmente crnica, mas
podem verificar-se episdios de inflamao aguda j num contexto de uma inflamao
crnica de fundo. Reaces inflamatrias crnicas geralmente produzem fibrose como
resultado da secreo de citocinas e factores de crescimento pelos macrfagos.

ANTIGNIOS SELF OU NON-SELF?

Muitas doenas auto-imunes especficas para determinados rgos so causadas


pela interaco de clulas T auto-reactivas com antignios self, causando a
libertao de citocinas e inflamao.

Pensa-se que este seja o principal mecanismo por detrs da artrite reumatide,
esclerose mltipla, diabetes tipo I e psorase.

As reaces das clulas T contra os micrbios e outros antignios non-self


tambm podem causar inflamao e leso tecidual nos locais de infeco ou de
exposio ao antignio.

Bactrias intra-celulares, por exemplo Mycobacterium tuberculosis, produzem fortes


respostas por clulas T e macrfagos que resultam em inflamao granulomatosa e
fibrose. A inflamao e a fibrose podem causar destruio extensiva do tecido e
prejuzo da funcionalidade (neste caso nos pulmes). A tuberculose um bom
exemplo de uma doena infecciosa em que a leso tecidual devida sobretudo
resposta imunitria do hospedeiro.

144

SENSIBILIDADE POR CONTACTO


Existe um conjunto de doenas da pele que resultam da exposio tpica a qumicos e
antignios ambientais - sensibilidade por contacto. Estas devem-se a reaces
inflamatrias, presumivelmente despoletadas por neoantignios formados pela
ligao dos qumicos a protenas self. Na origem destas citocinas podero estar
clulas CD4+ e CD8+. Como exemplo, temos reaces de sensibilidade a certas
plantas.
Quando este tipo de reaco se torna crnica utilizada a designao clnica de
eczema.

DELAYED-TYPE HYPERSENSITIVITY
A reaco prottipo das reaces inflamatrias mediadas por clulas T a delayedtype hypersensitivity (DTH). As citocinas responsveis pela inflamao resultam da
activao de clula T sobretudo CD4+.
O modelo clssico de uma reaco deste tipo, num modelo animal, envolve vrias
etapas:
Sensitizao o animal imunizado com antignio proteico.
Em humanos esta etapa pode ocorrer atravs de infeco microbial,
sensitizao por contacto com qumicos ou antignios ambientais,
ou injeces intra-drmicas ou subcutneas com antignios
proteicos.
Elicitao Cerca de duas semanas depois, o animal exposto ao mesmo antignio,
subcutaneamente.
Desafio exposio posterior ao antignio; despoleta a reaco.
Por exemplo, a PPD (purified protein derivative), um antignio
proteico da Mycobacterium tuberculosis, despoleta uma reaco
DTH, conhecida reaco da tuberculina, quando injectada em
indivduos que estiveram expostos bactria. Um resultado positivo
um indicador clnico muito utilizado para provar uma infeco de
tuberculose anterior ou presente.
A resposta tpica evolui durante 24 a 48 horas.
o Cerca de 4 horas depois da injeco de antignio, os neutrfilos acumulam-se em
redor das vnulas ps-capilares no local de injeco.
o Cerca de 12 horas depois, o local de injeco infiltrado por clulas T e moncitos
provenientes do sangue, tambm em redor das vnulas adjacentes. As clulas
endoteliais destas vnulas tornam-se inchadas, apresentam organelos
aumentados e tornam-se mais permeveis a macromolculas do sangue. O
fibrinognio sai dos vasos sanguneos para os tecidos, onde convertido a fibrina.
A deposio da fibrina, e a acumulao de clulas T e moncitos no espao
extravascular em redor do local de injeco provocam inchao do tecido. Este
torna-se firme indurao.
o A indurao um factor de diagnstico de uma reaco DTH detectvel cerca
de 18 horas depois da injeco do antignio e mxima cerca de 24 a 48 horas
depois.

145

Na prtica clnica, este tipo de reaces so importantes, pois uma perda de respostas
DTH a antignios universais (por exemplo, antignios de Candida spp.) indicativa de
uma funo deficiente de clulas T condio conhecida como anergia ( diferente
da anergia linfocitria).

REACES DTH CRNICAS


Podem surgir quando uma infeco despoleta uma activao de macrfagos a partir
de clulas TH1, mas no existe uma eliminao eficiente dos micrbios fagocitados.
Nestas reaces, as clulas T activadas e os macrfagos continuam a produzir
citocinas e factores de crescimento, o que amplifica as respostas dos dois tipos de
clulas e modifica o tecido em redor.
Forma-se um ciclo de leso tecidual e inflamao, seguidas de substituio do tecido
lesado (fibrose).
Se os micrbios esto localizados numa pequena rea, a reaco que se forma
produz granulomas, que so ndulos de tecido inflamado. A inflamao
granulomatosa uma tentativa de conter a infeco mas tambm a causa de leso
tecidual significativa. Este tipo de inflamao caracterstica de alguns micrbios
persistentes, como M. tuberculosis ou alguns fungos. Grande parte da dificuldade
respiratria associada tuberculose ou infeces fngicas deve-se substituio do
pulmo por tecido fibroso.

DOENAS CAUSADAS POR CTLS


A principal funo dos CTL (clulas T CD8+) eliminar os micrbios intracelulares,
sobretudo vrus, matando as clulas infectadas. Ento, mesmo que um vrus no seja
citopatognico (prejudicial para a clula), as respostas a infeces virais podem
causar leso tecidual ao matar clulas infectadas. Isto acontece porque os CTL so
incapazes de distinguir se o vrus ou no patognico, matando todas as clulas
infectadas sem seleco. Algumas formas de hepatite viral so exemplos de
infeces em que as leses so provocadas pelos CTL do hospedeiro.

Alm disso, os CTL podem contribuir para a leso tecidual em algumas doenas autoimunes causadas sobretudo por clulas T CD4+, como a diabetes tipo I. Tambm
esto envolvidos em algumas formas de miocardite como resultado de infeco viral.

146

TERAPUTICA
As terapias utilizadas no tratamento das doenas de hipersensibilidade podem ser
divididas em alguns grupos principais.

AGENTES ANTI-INFLAMATRIOS
Foram principal recurso durante muitos anos, sobretudo corticosterides. Estes
frmacos reduzem a leso tecidual, particularmente o componente inflamatrio da
resposta imunitria.

ELIMINAO DE CLULAS E ANTICORPOS


Utilizam-se anticorpos monoclonais para eliminar todas as clulas linfides, s as
clulas T ou s as clulas B. O anticorpo anti-CD20 (rituximab) tem vindo a mostrar
bons resultados em pacientes com artrite reumatide e esclerose mltipla, eliminado
apenas clulas B.
A plasmaferese tambm utilizada na remoo de anticorpos e complexos imunes em
circulao.

TERAPIAS ANTI-CITOCINAS
Em casos de doenas inflamatrias crnicas mediadas por clulas T, um grande
nmero de citocinas envolvidas na inflamao tem sido alvo do desenvolvimento de
antagonistas.
O receptor TNF e anticorpos anti-TNF so exemplos particularmente importantes;
estes ligam-se ao TNF, neutralizando-o. So muito bem sucedidos em pacientes com
artrite reumatide, doena de Crohn e psorase.
Existem inmeros ensaios na rea do desenvolvimento de antagonistas de outras
citocinas pr-inflamatrias (IL-1, IL-12, IL-23, IL-6).

INIBIO DAS INTERACES CLULA-CLULA


Existem vrios agentes aprovados ou em desenvolvimento que procuram inibir a
activao de clulas B e de macrfagos pelas clulas T (por exemplo, bloqueamento
de co-estimuladores ou outros ligandos importantes nesta etapa).
Na esclerose mltipla, so por vezes utilizados anticorpos contra integrinas, inibindo a
migrao de leuccitos para os tecidos, particularmente para o SNC.

IgG INTRAVENOSA
A administrao de grandes quantidades de IgG intravenosa (IVIG) benfica em
algumas doenas de hipersensibilidade. No se entende completamente como que
este agente suprime a inflamao. Uma possibilidade a de que a IgG se ligue a
receptores de Fc inibidores nos macrfagos e linfcitos B, atenuando a resposta
inflamatria.

147

Particularmente importante entre o grande nmero de estudos nesta rea foi a


definio de antignios-alvo no caso da esclerose mltipla e da diabetes mellitus
tipo I. Esto em desenvolvimento ensaios clnicos que envolvem a administrao de
antignio (pptidos de mielina ou de insulina) numa forma que permita desligar
certas respostas imunitrias especficas. O principal risco ser a possibilidade
interferncia com a funo normal do sistema imunitrio, tornando os indivduos
susceptveis a infeces.

148

149

150

DOENAS ALRGICAS
Existe um conjunto de doenas que so causadas por antignios ambientais nomicrobianas e que envolvem clulas TH2, IgE, mastcitos e eosinfilos.
Como? Os antignios activam as clulas TH2 CD4+, que por sua vez ajudam as clulas
B a produzir IgEs especficas para os antignios. As IgEs assim produzidas vo ligarse a mastcitos e basfilos. Quando depois se ligam ao antignio, as clulas so
rapidamente activadas e libertam vrios mediadores qumicos. De um modo geral,
estes mediadores vo ser responsveis por:
aumento da permeabilidade vascular;
vasodilatao;
contraco da musculatura lisa visceral e brnquica.
A esta reaco chamamos hipersensibilidade
imediata
(hipersensibilidade
tipo
I).
A
hipersensibilidade imediata o prottipo de
distrbio mediado por clulas TH2 (tal como a DTH
o prottipo de distrbio mediado por clulas TH1).
Aps a resposta imediata, existe uma fase
inflamatria que se desenvolve mais lentamente late-phase reaction. Esta caracteriza-se pela
acumulao de neutrfilos, eosinfilos, macrfagos
e clulas TH2 CD4+ cerca de 2 a 4 horas depois.
Esta reaco despoletada por citocinas
produzidas pelas clulas TH2 e por mastcitos,
juntamente com mediadores lipdicos secretados
por
mastcitos.
Normalmente,
o
termo
hipersensibilidade imediata usado englobando
ambas as fases. A inflamao mxima cerca de
24 horas depois.
Na clnica, estas reaces so designadas como
alergias, atopias ou doenas de hipersensibilidade.

Episdios repetidos destas reaces podem


conduzir a doenas alrgicas crnicas, com leso
tecidual e remodelao. A alergia o distrbio
imunitrio mais comum entre a populao.

Os pontos-chave das doenas alrgicas so a activao de clulas TH2 e a


produo de IgE.

151

Os indivduos saudveis podem no exibir respostas imunitrias por clulas T a


antignio ambientais comuns ou desenvolver uma resposta que no prejudicial. Os
indivduos atpicos desenvolvem respostas TH2 muito fortes e produzem IgE quando
expostos a substncias alergnias.
A sequncia de eventos tpica de uma reaco alrgica a seguinte:
Exposio ao antignio
Activao de clulas TH2 e clulas B especficas para o antignio
Produo de IgE
Sensitizao: Ligao dos anticorpos aos receptores de Fc nos
mastcitos. Os mastcitos revestidos por IgE passam a estar prontos
para activao (= esto sensveis ao encontro com o antignio).
Reexposio ao antignio
Activao dos mastcitos
Libertao de mediadores qumicos
Reaco patolgica
Apesar de a resposta imediata verificada nos vasos sanguneos e na musculatura lisa
e a late-phase reaction serem iniciadas pela activao de mastcitos pelas IgE,
existem outros mediadores envolvidos em ambas as fases. Como os mastcitos esto
presentes no tecido conjuntivo e inferiormente aos epitlios, estes tecidos sofrem mais
frequentemente as reaces de hipersensibilidade imediata.

Alguns casos de hipersensibilidade imediata podem ser despoletados


por estmulos no-imunognicos, como o exerccio ou a exposio ao
frio. Estes estmulos induzem a desgranulao dos mastcitos e a
libertao de mediadores sem que existam fases de exposio a
antignio ou produo de IgE. So reaces no atpicas.

Existe uma predisposio gentica forte na base do desenvolvimento de alergias,


existindo genes mais susceptveis associados a este tipo de doenas. Estes genes
so responsveis pela interferncia numa ou mais etapas acima mencionadas.
As reaces de hipersensibilidade imediata manifestam-se de vrias formas,
dependendo dos tecidos afectados. Podem observar-se rashes, congesto sinusal,
constrio brnquica, dor abdominal, diarreia e choque sistmico.
No choque anafiltico, a forma mais extrema destas reaces, os mediadores podem
contrair as vias areas at ao ponto de asfixia e produzir colapso cardiovascular que
resulta em morte.

PRODUO DE IgE
Os indivduos atpicos produzem elevados nveis de IgE em resposta a alergnios
ambientais, enquanto os indivduos saudveis geralmente produzem outros isotipos,
como IgM e IgG, e apenas pequenas quantidades de IgE.
A regulao da sntese de IgE vai depender da tendncia que um indivduo tem para
formar uma resposta TH2 aos alergnios, porque as citocinas derivadas destas clulas
estimulam a alterao do isotipo da cadeia pesada para IgE nas clulas B. Esta
tendncia influenciada, em cada indivduo, por vrios factores:

genes herdados;
natureza dos antignios;
histria de exposio aos antignios.

Em relao natureza dos antignios envolvidos (alergnios), estes so geralmente


protenas ambientais comuns e qumicos capazes de modificar protenas. No se
conhece a razo pela qual alguns antignios induzem fortes respostas T H2 e reaces
alrgicas enquanto outros no o fazem. Dois dados comuns importantes:
- os indivduos esto expostos repetidamente a estes antignios;
- os alergnios, ao contrrio dos micrbios, no estimulam respostas imunitrias inatas
habituais. A activao crnica ou repetida de clula T na ausncia se imunidade inata
forte pode conduzir as clulas T CD4+ para a via TH2 (as prprias clulas T produzem
IL-4, a principal citocina indutora de TH2).
Como as reaces de hipersensibilidade imediata dependem de clulas T CD4+,
antignios independentes de clulas T (como os polissacardeos) no despoletam
estas reaces, a no ser que se liguem a protenas. Alguns frmacos, como a
penicilina, reagem quimicamente com resduos de aminocidos nas protenas self.
Formam-se ento conjugados hapteno-transportador que estimulam as respostas TH2
e a produo de IgE.
Para o desenvolvimento de uma reaco alrgica, necessria exposio repetida ao
antignio, porque a mudana para o istipo IgE e a sensitizao de mastcitos por IgE
tm de ocorrer antes que ocorra uma reaco hipersensvel.

PARTICIPAO DE MASTCITOS, BASFILOS E EOSINFILOS


Para alm das clulas TH2, estas tambm so clulas efectoras da hipersensibilidade
imediata e das doenas alrgicas. Os trs tipos de clulas contm grnulos
citoplasmticos cujo contedo o principal mediador da reaco alrgica e os trs
produzem mediadores lipdicos e citocinas pr-inflamatrias.
Os mastcitos so o principal tipo de clula envolvido, distinguindo-se dois
grupos principais: um da mucosa do tracto gastro-intestinal e outro do tecido
conjuntivo (encontrados na pele e submucosa gastro-intestinal).
As funes efectoras dos mastcitos so mediadas por molculas solveis libertadas
com a activao. A variedade de substncias que libertam pode incluir substncias
que so libertadas no momento de activao (aminas biognicas, macromolculas
dos grnulos) ou que so sintetizadas aps a activao (mediadores derivados de
lpidos, citocinas).

AMINAS BIOGNICAS
A principal amina interveniente nos humanos a histamina. Estas tambm chamadas
aminas vasoactivas, so armazenadas nos grnulos citoplasmticos e so
compostos de baixo peso molecular com uma amina.

153

A histamina tem um perodo de aco curto e, ao ligar-se aos receptores em vrios


tipos de clulas, inicia cascatas de conduo de sinal, com diferentes efeitos
consoante as clulas.
A ligao ao endotlio provoca a contraco das clulas, aumentando o espao intercelular, com aumento da permeabilidade e da passagem de plasma para os tecidos
(inchao). Tambm estimula a produo, pelo endotlio, de relaxantes da musculatura
lisa vascular, como prostaciclina (PGI2) e xido ntrico, causando vasodilatao
(rubor).
A histamina tambm causa constrio do msculo liso intestinal e brnquico,
contribuindo para o aumento do peristaltismo e broncospasmo associado ingesto
ou inalao de alergnios.
Os anti-histamnicos so antagonistas dos receptores de histamina H1, mas em
alguns distrbios alrgicos no so eficientes. A broncoconstrio associada asma
mais prolongada do que os efeitos da histamina, sugerindo a interferncia de outras
substncias.

ENZIMAS DOS GRNULOS E PROTEOGLICANOS


As serina proteases, como a triptase (degrada fibrinognio; activa colagenase) e a
quimase (converte angiotensina I em angiotensina II; degrada membranas basais
epidrmicas), so as protenas mais abundantes nos grnulos dos mastcitos e so
responsveis pela leso tecidual.
Os proteoglicanos, como a heparina e o sulfato de condroitina, tambm so
constituintes abundantes dos grnulos. Nos grnulos, servem como matrizes de
armazenamento para as aminas biognias carregadas positivamente, as proteases e
outras substncias e previnem que estas tenham acesso ao resto da clula. Depois da
exocitose dos grnulos, os mediadores so libertados dos proteoglicanos a diferentes
velocidades (aminas biognicas dissociam-se muito mais rapidamente, por exemplo).
Ento, em certa medida, os proteoglicanos podem controlar a cintica das reaces de
hipersensibilidade imediata.

MEDIADORES LIPDICOS PROSTAGLANDINAS, LEUCOTRIENOS, PAF


A activao dos mastcitos conduz a rpida sntese de novo de substncias lipdicas
com diversos efeitos nos vasos sanguneos, msculo liso brnquico e nos leuccitos.
As principais substncias derivam do cido araquidnico pela via COX e LOX. A
prostaciclina (PGD2), o principal derivado lipdico pela via COX, actua como um
vasodilatador e broncoconstritor. Tambm participa na quimiotaxia de neutrfilos e na
sua acumulao em locais de inflamao. Os leucotrienos, sobretudo LTC4 e os seus
produtos de degradao TLD4 e LTE4.
O factor activador de plaquetas (PAF platelet-activating factor) tem aces
broncoconstritoras e tambm relaxa o msculo liso vascular.

CITOCINAS
As citocinas libertadas por mastcitos activados, basfilos e clulas TH2 esto
sobretudo associadas inflamao da late-phase reaction. A activao dos mastcitos
vai induzir a sua transcrio e sntese, embora pequenas quantidades possam j
existir na clula. TNF, IL-1, IL-4, IL-5, IL-6 so algumas das citocinas envolvidas.

Efeitos biolgicos dos mediadores da hipersensibilidade imediata.

ANAFILAXIA SISTMICA
Trata-se de uma reaco de hipersensibilidade imediata sistmica, caracterizada por
edema em mltiplos tecidos e uma queda da presso arterial, como resultado da
vasodilatao.
Estes efeitos normalmente resultam da presena sistmica de um antignio
introduzido por injeco, uma picada de insecto ou absoro atravs de uma
superfcie epitelial (pele ou mucosa gastro-intestinal). O alergnio activa mastcitos
em vrios tecidos, ocorrendo libertao de mediadores qumicos que atingem os vasos
sanguneos. A diminuio do tnus vascular e a sada de plasma dos vasos
sanguneos pode causar choque pela descida de presso arterial choque anafiltico,
frequentemente fatal.
Os efeitos cardiovasculares surgem juntamente com:
constrio das vias areas superiores e inferiores;
edema da laringe;
hipermotilidade intestinal;
secreo excessiva de muco no tracto respiratrio e leses urticrias na
pele;
O tratamento habitual epinefrina, revertendo os efeitos vasodilatadores e
broncoconstritores. Anti-histamnicos tambm podem ajudar.

155

ASMA
Doena inflamatria causada por repetidas reaces de hipersensibilidade imediata e
late-phase no pulmo. Surge uma trade clnico-patolgica:
obstruo area intermitente e reversvel (devido constrio
brnquica e produo aumentada de muco espesso);
inflamao brnquica crnica com eosinfilos;
hipertrofia e hiperreactividade das clulas musculares lisas
brnquicas a broncoconstritores.
Cerca de 70% dos casos de asma esto associados a hipersensibilidade imediata
mediada por IgE. Nos restantes 30%, a asma poder no estar associada a uma
atopia e pode ser despoletada por estmulos no imunitrios como frmacos, frio e
exerccio.
Na asma atpica, o alergnio activa clulas TH22 e, ligando-se a IgEs, activa
mastcitos. Os mediadores lipdicos e as citocinas produzidas pelos mastcitos e
pelas clulas T recrutam eosinfilos, basfilos e mais clulas T H2. A inflamao crnica
nesta doena pode continuar sem activao de mastcitos.
Mastcitos, basfilos e eosinfilos produzem mediadores que contraem o msculo liso
nas vias areas. Os mediadores broncoconstritores mais importante so LTC4, LTE4,
LTD4 e PAF.
A secreo de muco aumentada resulta da aco de citocinas sobretudo IL-13, nas
clulas epiteliais brnquicas.

TERAPIA
A terapia actual tem dois alvos principais:
- preveno;
- reverso da inflamao e relaxamento do msculo liso das vias areas.
Recentemente, existe uma tendncia para uma maior utilizao de agentes antiinflamatrios como primeiro recurso de tratamento, mas existem diversas classes de
frmacos para o tratamento de asma:
Corticoesterides bloqueiam a produo de citocinas pr-inflamatrias.
Activadores da adenilato ciclase (epinefrina e agentes B2-adrenrgicos
semelhantes). A teofilina enibe enzimas fosfodiesterase (que degradam cAMP) e,
assim, produz semelhante efeito. Apresenta alguns efeitos anti-inflamatrios
independentes do relaxamento muscular.
Inibidores de leucotrienos
Anticorpos anti-IgE monoclonais
Os anti-histamnicos no so particularmente teis, uma vez que a histamina tem
uma fraca participao no processo. Na verdade, como muitos anti-histamnicos so
tambm anticolinrgicos, estes podem agravar a obstruo area ao aumentar a
secreo de muco.

A HIPTESE HIGINICA
De uma maneira geral, a prevalncia de doenas alrgicas tem vindo a aumentar.
Uma das teorias que pretende explicar este facto avana que esta reduo est
relacionada com a reduo de infeces. Respostas de imunidade inata associadas
maioria das infeces promovem respostas TH1 e suprimem respostas TH2. Existem
diversos dados epidemiolgicos que parecem comprovar esta hiptese.
Contudo, no caso da asma, infeces bacterianas e virais so um factor de
predisposio ao desenvolvimento da doena ou exacerbao da doena j existente.
Estima-se que 80% dos ataques de asma nas crianas seja precedido por uma
infeco viral. Esta associao da asma com infeces parece contradizer a hiptese
anterior esperar-se-ia que as infeces estimulassem a imunidade inata e, assim,
suprimissem as respostas TH2. A compreenso actual sobre como os linfcitos T
participam na asma ainda incompleta.

Reaces da pele

Alergias a
alimentos

Renite alrgica

REACES DAS VIAS AREAS SUPERIORES, TRACTO GASTROINTESTINAL E PELE


Caractersticas
gerais
- tambm chamada
febre do feno
- provavelmente a
doena alrgica mais
comum
- consequncia de
reaces
de
hipersensibilidade
imediata a alergnios
comuns,
como
o
ples,
ps
por
inalao

Manifestaes clnico-patolgicas

Teraputica

edema da mucosa
infiltrao leucocitria com abundncia de
eosinfilos
secreo de muco
tosse
espirros
dificuldade em respirar
conjuntivite alrgica com comicho nos
olhos
doentes com episdios repetidos frequentes:
protruses focais na mucosa nasal (plipos
nasais), com edema e eosinfilos
peristaltismo aumentado
secreo de fluido aumentada das clulas
de revestimento do tracto
vmito
diarreia
urticria
choque anafiltico caso extremo

Antihistamnicos

Urticria
- reaco aguda da pele em resposta a contacto directo com o alergnio
ou aps a entrada do alergnio em circulao
mediada por produtos dos mastcitos (sobretudo histamina)
- pode persistir durante umas horas, provavelmente porque o antignio
continua no plasma
Eczema crnico
- tambm dermatite atpica; poder ser causado pela late-phase
reaction a um alergnio na pele
- late-phase reaction cutnea envolve TNF, IL-4 e outras citocinas
provavelmente das clulas Th2 e mastcitos actuam nas clulas
endoteliais das vnulas para promover a inflamao
(tambm utilizada a designao de eczema para sensibilidade por
contacto crnica, que uma reaco DTH mediada por clulas TH1)

Urticria
antihistamnicos

hipersensibilidade
imediata a alimentos
ingeridos libertao
de mediadores dos
mastcitos da mucosa
e submucosa intestinal

Eczema
Corticosterides
(inibem sntese
de citocinas)

157

IMUNOTERAPIA
O objectivo reduzir a quantidade de IgE produzida pelo doente quando exposto ao
antignio.
Uma das abordagens a dessensitizao, em que pequenas quantidades de
antignio so administradas subcutnea e repetidamente. Os nveis de IgE especficos
diminuem e os nveis de IgG normalmente aumentam, provavelmente tambm
contribuindo para uma inibio na produo de IgE, ao neutralizar o antignio.
Como que a dessesintizao funciona? possvel que induza tolerncia especfica
nas clulas T ou altere o fentipo predominante das clulas T especficas para
antignio de TH2 para TH1. No existem provas suficientemente satisfatrias para
corroborar qualquer das teorias.
Os efeitos benficos da dessensitizao podem ocorrer numa questo de horas, ainda
antes das alteraes nos nveis de IgE. Desconhece-se a razo. Esta abordagem
bem sucedida na preveno de respostas anafilticas agudas a antignios proteicos,
por exemplo veneno de um insecto, ou a frmacos essenciais, como a penicilina.
Anticorpos anti-IgE monoclonais so outra abordagem para a diminuio dos nveis de
IgE.

T11: Memria imunolgica, adjuvantes e vacinas


Data terica de 31 de Outubro de 2011
Captulos do Abbas: 15 e 4
Captulos do Arosa: 13
Slides aulas: Sim
Elaborado por: Joo Pedro Apolinrio

DESENVOLVIMENTO DE VACINAS
A importncia da imunizao profiltica adquire nos nossos dias uma grande
importncia, facto que pode ser mais facilmente compreendido se observamos os
resultados de programas de vacinao a nvel mundial que conduziram completa ou
quase completa erradicao de muitas doenas infecciosas em pases desenvolvidos
estando o sucesso destas aces dependente de vrias propriedades do
microrganismo.
O princpio fundamental da vacinao bastante simples e consiste na administrao
do agente infeccioso da doena morto, atenuado (pouco agressivo) ou ento parte de
um microrganismo que no causa a doena mas que induz uma resposta imunitria
que fornece proteco contra a aco do agente na sua forma mais agressiva
(microrganismo patognico).
O que torna as vacinas eficazes?

A ausncia de estabelecimento de latncia por parte dos agentes


infecciosos.
A ausncia de variao antignica dos agentes
A ausncia de interferncia com a resposta imunitria do hospedeiro

Um exemplo amplamente conhecido de um agente que contorna estas trs condies


o HIV.
Importa ainda ter em conta que as vacinas so mais eficazes quando os agentes
infecciosos colonizam apenas hospedeiros humanos e no reservatrios animais.
A maioria das vacinas que se encontram em utilizao actualmente possuem
mecanismos de funcionamento que induzem/estimulam a imunidade humoral. Destes,
os anticorpos so o nico mecanismo que previne infeces por neutralizao e
eliminao dos microrganismos antes de estes se estabelecerem no hospedeiro.
De entre as vrias vacinas que se encontram disponveis, as mais eficazes so as que
estimulam o desenvolvimento de clulas de vida longa (produtores de anticorpos de
alta afinidade) e de clulas B de memria.

159

Esta resposta mais eficazmente induzida nos centros germinativos atravs da ajuda
de clulas T CD4+ produtoras de protenas especficas de antignios.
Vejamos ento algumas caractersticas mais especficas da vacinao passando pelos
tipos de vacinas mais importantes bem como o que estes trazem de bom e algumas
das suas desvantagens.

VACINAS DE BACTRIAS E VRUS


ATENUADOS OU INACTIVADOS
Vacinas compostas por microrganismos no patognicos intactos so obtidas de uma
de duas formas: atravs do tratamentos desses mesmos microrganismo de forma a
que j no possam voltar a causar doena (ex. a sua virulncia atenuada) ou ento
matando os microrganismos mantendo contudo a sua capacidade imunognica.
VANTAGENS:
Os microrganismos provocam as respostas imunes inatas e adaptativas
(humoral e mediada por clulas) que a forma patognica teria, constituindo
a forma ideal de conferir uma imunizao protectora.
DESVANTAGENS:
Induzem, geralmente, uma proteco limitada
So efectivas apenas durante um curto perodo de tempo
Ao contrrio do que se passa com as bactrias, as vacinas virais com o agente num
estado atenuado (ainda que vivo) demonstram ser mais efectivas sendo os casos da
poliomielite, sarampo e febre amarela bons exemplos deste sucesso.
O mtodo mais utilizado para produzir estes vrus atenuados a passagem repetida
em cultura celular sendo que mais recentemente, mutantes sensveis deleo e
temperatura foram criados para alcanar o mesmo objectivo.
VANTAGENS:
Induzem imunidade especfica de longa durao (imunizao enquanto
criana confere proteco para toda a vida)
DESVANTAGENS:
Algumas vacinas de vrus atenuados (ex. polio) podem causar doena em
hospedeiros imunocomprometidos (a alternativa so as vacinas de
poliovirus inactivado)
Uma outra desvantagem transversal quer s bactrias quer aos vrus atenuados reside
na segurana do processo. Apesar destes inconvenientes existem casos de vacinas
de vrus atenuados que adquirem nos nossos dias uma importncia considervel para

a sade pblica como o caso da vacina do vrus influenza. Este vrus, que cresce em
ovos de galinha, pode ser utilizado para a criao de dois tipos de vacinas:

VACINA TRIVALENTE INACTIVADA (VRUS MORTO): flu shot


administrado intramuscularmente
VACINA TRIVALENTE ATENUADA (VRUS VIVO): administrao
atravs de spray nasal

A enorme variabilidade deste vrus requer uma intensa actualizao da vacina em


causa pelo que so seleccionadas anualmente as trs estirpes mais frequentemente
encontradas na populao sendo estas incorporadas na vacina j existente.

VACINAS DE ANTIGNIOS
PURIFICADOS (SUBUNIDADES)
As vacinas de subunidades so compostas por antignios purificados a partir de
microrganismos ou toxinas inactivadas sendo normalmente administrados com um
adjuvante.
Importa por isso saber o que so os adjuvantes e para que servem.
Os adjuvantes so substncias que precisam de ser administradas em conjunto com
antignios proteicos purificados para induzir uma resposta imunitria mxima de
clulas T dependentes, actuando por estimulao da resposta imune inata no local de
exposio ao antignio. Muitos dos adjuvantes que se encontram em fase de
experimentao so produtos microbianos como Mycobacteria morta e os LPS (que se
ligam aos TLRs). O nico que frequentemente utilizado em vacinas humanas o
alum, composto por hidrxido e fosfato de alumnio.
EFEITOS PRINCIPAIS:
Activao de clulas dendrticas para expressarem molculas de
histocompatibilidade mais importantes (parte dos antignios que as
cluas T reconhecem)
Aumentam a expresso de coestimuladores e citocinas necessrias
para a activao de clulas T
Estimulam a migrao de clulas dendrticas para os ndulos linfticos
(local onde se encontram as clulas T)
Uma das importantes utilizaes deste tipo de vacinas prende-se com a preveno de
doenas causadas por toxinas bacterianas uma vez que os toxides injectados
produzem uma forte resposta imunitria, atravs da produo de anticorpos, ainda que
estes no sejam patognicos. Duas das doenas cujas complicaes conseguiram ser
controladas com estas vacinas foram a difteria e o ttano.

161

Vacinas compostas por antignios polissacridos de bactrias so utilizadas contra


pneumococcus e H. influenzae. Contudo, devido ao facto de os polissacridos serem
antignios T independentes, estes tendem a provocar respostas de anticorpos de
baixa afinidade e podero ser fracamente imunognicos em crianas (incapazes de
montar fortes respostas de anticorpos Tcell-independentes). Como podemos ento
obter respostas de anticorpos de alta afinidade? Estas respostas podem ser geradas
contra antignios polissacridos at mesmo em crianas atravs do acoplamento
destas molculas a protenas a fim de formar vacinas conjugadas. Estas vacinas
funcionam como hapten-carrier conjugados e constituem uma aplicao prtica do
princpio da cooperao entre clulas T e B. As vacinas H. influenzae, pneumococica e
meningoccica utilizadas hoje em dia so vacinas conjugadas.
VANTAGENS DAS VACINAS DE PROTENAS PURIFICADAS:
Estimulam as clulas T helper
Estimulam a resposta de anticorpos
DESVANTAGENS:
No geram CTLs (linfcitos T citotxicos) potentes
No so eficazmente reconhecidas pelas class 1-restricted CD8+ T cells

Este fraco desenvolvimento de CTL deve-se ao facto de as protenas e pptidos


exgenos no conseguirem entrar eficazmente na via de apresentao de antignios
da classe 1 do MHC no conseguindo assim deslocar pptidos das molculas de
superfcie de classe 1.

VACINAS DE ANTIGNIOS
SINTTICOS
A meta da investigao na rea da vacinao tem sido identificar os antignios
microbianos ou estirpes mais imunognicos, a fim de os sintetizar em laboratrio para
posteriormente utilizar os antignios sintticos como vacinas.
possvel deduzir a sequncia de protenas de antignios microbianos a partir de
dados de sequncias nucleotdicas e preparar grandes quantidades de protenas
atravs da tecnologia de DNA recombinante. Algumas vacinas feitas a partir de
antignios derivados da recombinao de DNA esto neste momento em utilizao
para o vrus da hepatite, vrus herpes simplex, vrus da febre aftosa, HPV e rotavrus.
No caso da vacina mais amplamente utilizada contra o HPV, protenas virais
recombinantes provenientes de quatro estirpes (HPV 6, 11, 16 e 18) so produzidas
em leveduras e combinadas com um adjuvante. Os HVP 6 e 11 so causas comuns
de verrugas sendo os HPV 16 e 18 as estirpes mais frequentemente ligadas ao cancro
do colo do tero. Esta vacina anti-viral tambm, portanto, uma vacina que funciona
como preveno para o cancro.

VACINAS DE VRUS VIVOS


ENVOLVENDO VRUS
RECOMBINANTES
Outra abordagem para o desenvolvimento de uma vacina a introduo de genes que
codificam antignios microbianos em vrus no citopticos e infectar indivduos com
estes vrus. Assim, o vrus serve como fonte de antignio num indivduo inoculado.
VANTAGENS:
Induzem a totalidade do complemento das respostas imunes, incluindo uma
forte resposta CTL
DESVANTAGENS:
Os vrus podem infectar clulas do hospedeiro e, apesar de no serem
patognicos, produzir antignios que estimulam respostas CTL que matam
as clulas infectadas do hospedeiro
Segurana
A inoculao destes vrus recombinantes em vrias espcies animais induziu tanto a
imunidade humoral como a mediada por clulas contra o antignio produzido pelo
gene estranho (e, claro, contra antignios virais da vacina tambm).

VACINAS DE DNA
Um outro mtodo de vacinao foi desenvolvido com base numa observao feita
inesperadamente. Aps a inoculao de um plasmdeo contendo DNA complementar
(cDNA) que codifica um antignio proteico verificou-se que este leva a uma forte e
duradoura resposta, quer humoral quer mediada por clulas, ao antignio em questo.
provvel que APCs (clulas apresentadoras de antignios), como as clulas
dendrticas, sejam transfectadas pelo plasmdeo e o cDNA seja transcrito e traduzido
numa protena imunognica que provoca respostas especficas.
A caracterstica nica das vacinas de DNA que estas fornecem a nica abordagem,
para alm dos vrus vivos, para provocar fortes respostas de CTL devido s
protenas codificadas pelo DNA serem sintetizadas no citosol de clulas transfectadas.
Para alm disso, os plasmdeos bacterianos so ricos em nucletidos CpG no
metilados sendo reconhecidos por um TLR (TLR9) nomeadamente ao nvel das
clulas dendrticas, induzindo assim uma resposta imune inata que melhora a
imunidade adaptativa. Portanto, vacinas contendo plasmdeos de DNA podem ser
eficazes mesmo quando administradas sem um adjuvante.

163

VANTAGENS:
Facilidade de manipulao do cDNA de forma a que este expresse
muitos antignios
Capacidade de armazenar DNA sem necessitar de refrigerao para
uso no terreno
Capacidade de coexpressar outras protenas que podem melhorar a
resposta imune (citocinas e coestimuladores)
Contudo, as vacinas de DNA no foram to eficazes como se esperava em ensaios
clnicos, e os factores que determinam a eficcia destas vacinas, especialmente em
humanos, no esto ainda completamente definidos.

ADJUVANTES E
IMUNOMODULADORES
O incio de uma resposta imune dependente de clulas T contra antignios proteicos
requer que os antignios sejam administrados com adjuvantes. A maioria dos
adjuvantes induz uma resposta imune inata, com aumento de expresso de
coestimuladores e produo de citocinas como a IL-12 que estimula o crescimento e
diferenciao de clulas T.
Bactrias mortas atravs de calor so potentes adjuvantes, sendo frequentemente
utilizados em experincias em animais. Contudo, a forte inflamao local que estes
adjuvantes despoletam impede a sua utilizao em humanos.
Um enorme esforo est neste momento a ser dedicado ao desenvolvimento de
adjuvantes seguros e efectivos para utilizar em humanos. Vrios so utilizados na
prtica clnica, incluindo o gel de hidrxido de alumnio (que promove a resposta de
clulas B) e formulaes lipdicas que so ingeridas por fagcitos.
Uma alternativa aos adjuvantes a administrao de substncias naturais que
estimulam a resposta imune de clulas T. Por exemplo, IL-12 incorporada em vacinas
promove uma forte imunidade mediada por clulas. Como j foi mencionado, os
plasmdeos de DNA tm actividade intrnseca como adjuvantes e possvel incorporar
coestimuladores (ex. molculas B7) ou citocinas em vacinas com plasmdeos de DNA.
Esta ideia apesar de interessante permanece numa fase experimental.

IMUNIZAO PASSIVA
A imunidade protectora pode tambm ser conferida atravs de uma imunizao
passiva, por exemplo, por transferncia de anticorpos especficos. Num contexto
clnico, a imunizao passiva frequentemente utilizada para o tratamento rpido de
doenas potencialmente fatais causadas por toxinas, como o ttano, e para proteco
contra a raiva e hepatite.

Outro caso bastante conhecido no qual se utiliza este tipo de imunizao nos
ataques levados a cabo por cobras. Os anticorpos contra o veneno de cobra podem
ser autnticos salva-vidas quando administrados aps a mordida de cobras
venenosas.
A imunidade passiva de curta durao devido ao facto de os hospedeiros no
responderem imunizao e tambm porque a proteco dura apenas enquanto os
anticorpos injectados persistem no organismo. Alm disso, a imunizao passiva no
induz memria imunitria pelo que um indivduo imunizado no se encontra protegido
contra uma exposio subsequente toxina ou microrganismo.

Tipo de Vacina
Bactrias vivas atenuadas ou
mortas
Vrus vivos em estado
atenuado
Vacinas de subunidades
(antignicas)

Exemplos
Bacillus Calmette-Gurin, clera
Poliomielite, raiva
Toxide do ttano e difteria

Vacinas conjugadas

Haemophilus influenzae, pneumococcus

Vacinas sintticas

Hepatite (proteinas recombinantes)

Vectores virais

Ensaios clnicos de antignios do HIV em vectores


canarypox

Vacinas de DNA

Ensaios clnicos para vrias doenas

165

T12: Imunodeficincias secundrias-HIV/SIDA


Data terica de 6 de Janeiro 2012
Captulos do Abbas: 20

Elaborado por: Manuel Matos

INTRODUO
SIDA a doena provocada pelo vrus HIV, vrus descoberto nos anos 80,
caracterizada por uma acentuada imunossupresso associada a doenas
oportunistas, degenerao do sistema nervoso central e tumores malignos .
A distribuio da infeco por HIV bastante assimtrica, tendo um grande impacto
em frica, sobretudo na frica sub-sariana, mas distribuindo-se por todo o planeta. Os
nmeros continuam a ser extremamente elevados e continua a existir uma grande
necessidade de preveno.
Este vrus infecta principalmente clulas CD4+ Th, macrfagos e clulas dendrticas.

CARACTERSTICAS MOLECULARES E
BIOLGICAS DO VRUS
O HIV pertence famlia dos lentivrus dentro dos retrovrus animais, e existem dois
tipos que diferem na estrutura genmica e antignica:
HIV-1: Causador mais comum de SIDA
HIV-2: Causa uma menor progresso da doena

ESTRUTURAS E GENES DO HIV


O HIV constitudo por:
2 cadeias de RNACamada proteicaCamada de fosfolpidos (origem na clula
hospedeira mas com protenas membranares virais).

Os genes so:

LTR- Repeties terminais longas: Presentes no princpio e fim de cada cadeia


regulam a expresso gnica, a integrao no genoma hospedeiro e a replicao viral.
gag- codifica protenas estruturais do ncleo
env- codifica as glicoprotenas membranares gp120 e gp41 que esto associadas uma
outra.
pol- codifica a transcriptase reversa, integrase e enzimas proteases que participam na
replicao viral
tat- Necessria para alongar o tamanho dos transcritos
rev- Promove a exportao nuclear de partculas do RNA viral que no foram
completamente emendadas
vif- Supera o efeito inibidor da enzima da clula do hospedeiro e promove a replicao
viral
nef- Inibe a expresso de CD4 e MHC classe I pela clula hospedeira e acentua a
liberao do vrus
vpr- Aumenta a replicao viral e promove a infeco dos macrfagos pelo HIV
vpu- Inibe a expresso de CD4 na clula hospedeira e acentua a liberao do vrus

CICLO DE VIDA VIRAL


1. Ligao do vrus ao hospedeiro:
Ligao das subunidades gp120 do envelope a molculas CD4 induz uma
mudana conformacional que induz uma ligao secundria da gp 120 a
um co-receptor de quimiocina (os co-receptores de quimiocinas mais
importantes so o CCR4 e o CCR5 e mais de 7 receptores de quimiocinas
actuam como co-receptores para o HIV e tambm algumas protenas da
famlia dos receptores ligados protena G que atravessam a membrana 7
vezes)
A ligao quimiocina expe uma regio hidrofbica da gp41 chamada
pptido de fuso que se insere na membrana celular o que leva fuso
das membranas

167

2. Quando o vrus entra na clula as enzimas dentro do complexo nucleoproteico


ficam activas e inicia-se o ciclo de reproduo viral. O RNA viral , pela aco
da transcriptase reversa, transcrito em cDNA e o DNA viral entra no ncleo.
3. A integrasse viral entra no ncleo e catalisa a integrao do DNA viral no DNA
hospedeiro.
4. O DNA integrado chama-se provrus e pode ficar inactivo durante meses ou
anos provocando uma infeco latente.
5. Devido a estmulos por parte de citocinas, antignios ou outros agentes que
atingem as clulas T, moncitos e macrfagos, inicia-se a transcrio do DNA
viral. Esta activao relaciona-se com os factores de transcrio NF-B e
SP1da clula hospedeira e a sequncia viral LTR.
6. Inicia-se ento o processo de produo das protenas virais comeando com
os genes Ver, Tat e Nef necessrios para a regulao da expresso gentica
do vrus.
7. A protena Ver, pela exportao dos segmentos genticos que codificam as
protenas estruturais do vrus do ncleo para o citoplasma, inicia a segunda
fase de produo proteica.
8. Aps a transcrio dos vrios genes virais ocorre a montagem dos
componentes virais que comea com o envolvimento de transcritos de RNA
viral num complexo nucleoproteico que inclui protenas nucleares gag e
enzimas pol.
9. O complexo nucleoproteico funde-se com a membrana plasmtica, capturando
Env e glicoprotenas do hospedeiro.(a teterina um factor do hospedeiro que
impede a libertao do vrus, no entanto a protena viral Vpu inibe este factor)

ESPECIFICIDADE DO HIV
Existem vrios subtipo do HIV que apresentam diferente tropismo para distintos tipos
de clulas (macrfagos ou clulas T CD4+). Este tropismo est relacionado com a
especificidade das variantes da gp120 para os diferentes receptores de quimiocinas.
Apesar de todos os tipos de HIV poderem infectar clulas T CD4+, os que infectam
primariamente
culturas
de
macrfagos
denominam-se
M-trficos
ou
Macrofagotrficos e apresentam uma gp120 que se ligam ao receptor CCR5 (ou R5)
expresso nos macrfagos. As que infectam linhagens de clulas T e no macrfagos
chamam-se (T-trficos) e as suas gp120 ligam-se ao receptor CXCR4 (ou X4)
expresso nas clulas T CD4+ . Alguns tipos de HIV infectam indiscriminadamente os
dois tipos de clulas e chamam-se duotrficos.
Apesar das variantes T-trficas serem mais virulentas foi relatado que indivduos que
no apresentam o receptor R5 (das M-trficas) so resistentes a infeco pelo HIV.

PATOGNESE DA INFECO PELO HIV


E SIDA
A doena causada pelo HIV comea com uma infeco aguda parcialmente
controlada pelo sistema imunitrio adquirido, avanando para uma infeco crnica
progressiva dos tecidos linfides perifricos. Aps a entrada do vrus podemos dividir a
infeco em vrias fases:

1. Infeco aguda (inicial): caracterizada pela infeco das clulas T CD4+ de


memria (que expressam CCR5) nos tecidos linfides da mucosa e a morte de
vrias clulas infectadas. Uma vez que as mucosas so o principal reservatrio
de clulas T aps 2 semanas de infeco a maioria destas podem ter sido
destrudas.
2. Transio da fase aguda para fase crnica: Esta transio caracterizada
pela disseminao do vrus, virmia e o desenvolvimento de respostas
imunolgicas pelo hospedeiro.
Clulas dendrticas capturam o vrus e migram para os gnglios
linfticos
No tecido linfide as clulas dendrticas podem passar o vrus para
as clulas CD4+
A replicao do vrus no tecido linfide leva a uma virmia (presena
de vrus no sangue)
A virmia permite que o vrus se espalhe pelo organismo e infecte
clulas T auxiliares, macrfagos e clulas dendrticas nos tecidos
linfides perifricos.

169

Conforme a infeco se dissemina o sistema imunolgico


desenvolve respostas imunitrias humorais e celulares que reduzem
a virmia e so detectveis 12 semanas aps a infeco inicial.
Atinge-se uma fase crnica em que o vrus se replica e localiza-se
principalmente no bao e gnglios linfticos. Nesta fase o organismo
ainda capaz de combater infeces oportunistas, compensando a
perda de clulas T CD4+ mas o nmero destas vai sendo
progressivamente mais reduzido. Esta fase tambm chamada de
fase de latncia.
Ao fim de vrios anos o nmero de clulas T diminui drasticamente e
os estmulos de citocinas produzidas em resposta a infeces por
outros microrganismos acentuam a reproduo do HIV e levam
instalao da SIDA.

MECANISMOS DE IMUNODEFICINCIA CAUSADA PELO HIV


O efeito que o HIV produz no sistema imunitrio, especialmente na imunidade celular,
pode ser atribudo a diversos mecanismos:

Efeito citolgico directo da infeco por HIV: Morte das clulas T CD4+
associada produo de vrus nas clulas infectadas por vrios motivos
processo de produo do vrus e brotamento das partculas virais leva ao
aumento da permeabilidade da membrana e influxo de quantidades letais de
clcio, interferncia da produo viral na sntese celular de protenas e
formao de sinccio (as membranas das clulas infectadas que apresentam
gp120 viral fundem-se com os receptores CD4 das clulas no infectadas
criando clulas gigantes multinucleadas, ou sinccio).
Destruio de clulas T infectadas pelo sistema imunitrio: Tanto as
defesas humorais como as defesas celulares vo provocar a destruio dos
linfcitos T que apresentem protenas membranares que indiquem estar
infectadas.
Defeitos funcionais no sistema imunitrio de portadores de HIV
exacerbam a deficincia imunitria causada pela depleo de clulas T
CD4+: Estes defeitos funcionais incluem uma reduo nas respostas das
clulas T aos antignios e uma resposta humoral fraca que podem ser
resultantes dos efeitos directos da infeco pelo HIV nas clulas T CD4+, como
por exemplo a libertao de gp120 solvel por parte das clulas infectadas que
interage com clulas no infectadas, reduzindo a resposta celular a antignios.
Macrfagos, clulas dendrticas e clulas dendrticas foliculares so infectadas
com o vrus e afectadas por este, e anormalidades nestas clulas tambm
contribuem para a progresso da imunodeficincia. Apesar dos macrfagos
poderem ser infectados pelo vrus (apresentam CD4 e co-receptores CCR5)
normalmente no so facilmente mortos por estes, tornando-se um reservatrio
do HIV. As clulas dendrticas, como os macrfagos tambm se tornam
reservatrios e o seu contacto ntimo com clulas T naive contribui para a
proliferao do vrus. As clulas foliculares dendrticas so reservatrios de
vrus superfcie (uma vez que o vrus tem dificuldade em infecta-las) e por um

mecanismo ainda no conhecido o HIV pode induzir a morte destas clulas, o


que afecta o sistema linfide perifrico.

MODO DE TRANSMISSO:

Contacto sexual
Transmisso me-filho
Transmisso por inoculao sangunea (sangue-sangue)

RESPOSTA IMUNITRIA
Apesar da resposta imunitria ao vrus ser ineficaz na cura total torna-se necessrio
estud-la por vrias razes:
As respostas imunitrias podem ser prejudiciais ao hospedeiro por estimular,
por exemplo, a captura de vrus opsonizados (processo que facilita a
fagocitose) por clulas no infectadas atravs de endocitose mediada pelo
receptor Fc ou pela erradicao das clulas T CD4+ que expressam antignios
virais pelos CTLs CD8+.
Os anticorpos contra o HIV so marcadores de diagnstico de infeco.
O desenvolvimento de vacinas eficazes na imunizao contra HIV exige o
conhecimento do tipo de respostas imunitrias que tm maior probabilidade de
ser protectoras.
A resposta imunitria inicial caracterizada pela expanso de clulas T CD 8+
especficas para pptidos virais. Estes linfcitos T citotxicos encontram a infeco na
fase aguda mas acabam por ser ineficazes devido ao surgimento de mutantes do
vrus. As clulas CD4+ auxiliam na formao de LTC de memria.
A presena de anticorpos anti-HIV pode ser detectada 6 a 9 semanas aps a infeco
inicial. Os anticorpos mais comuns encontrados so anti-gp120 e anti gp-41 mas
tambm podem ser encontrados anticorpos para produtos da p24, transcriptase
reversa gag e pol.

MECANISMOS DA INVASO POR HIV


Vrias caractersticas do HIV permitem que o vrus evada a resposta imunitria do
hospedeiro:
Elevada taxa de mutao: Devido elevada taxa de erros associada
transcrio reversa geram-se numerosas mutaes no vrus que
permitem evitar a deteco por anticorpos ou clulas T geradas em
resposta infeco. A componente antignica mais varivel do vrus
localiza-se na molcula gp120 e denomina-se V3 loop.

171

As clulas infectadas podem evadir os LTC atravs da inibio da


expresso das molculas do MHC classe I pela aco de uma protena
chamada Nef

TRATAMENTO
Consiste principalmente na administrao de vrias classes de antivirais
(antiretrovirais):
Nuclesidos: Inibem a aco da transcriptase reversa, uma vez
que param a transcrio (AZT, desoxiadenosina).
Inibidores da transcriptase reversa no-nucleosdicos: So
molculas que inibem a transcrio reversa pela ligao directa
molcula e sua inactivao.
Inibidores de protease viral: Bloqueiam o processamento de
precursores proteicos em protenas da cpsula viral e ncleo.
So utilizados juntamente com 2 diferentes inibidores da
transcriptase reversa e formam um medicamento conhecido
como HAART ou ART.
Inibidores de entrada: Impede a entrada do vrus, tendo como
alvo ou as protenas CD4 ou CCR5 da clula hospedeira ou
gp41/gp120 do vrus.
Inibidores da integrase.

VACINA
Ainda no existe uma vacina para o HIV devido a vrias questes que se apresentam,
como por exemplo a elevada taxa de mutao viral. No entanto esto a ser testadas
vrias vacinas que incluem recombinantes hbridos com partes de sequncias virais de
SIV (simian imunodeficiency virus) e HIV que foram atenuadas por delees. Uma vez
que pode haver riscos envolvidos na utilizao de vrus, ainda que atenuados, outra
alternativa ser a utilizao de recombinantes no HIV que sirvam de vectores para os
antignios HIV .
O que define, ao certo, a afinidade de cada TCR e de um linfcito a um tipo de MHC
ainda est por descobrir. A verdade que, no final da seleco positiva, resta apenas
um dos co-receptores que existiam inicialmente, CD4 e CD8.