BQI 100 - UFV

Prof. Ciro Rossi

ENZIMAS
Prof. Rafael Junqueira Borges
Universidade Federal de Viçosa
Departamento de Bioquímica e Biologia Molecular
rafael.j.borges@ufv.br
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Enzimas | Introdução Prof. Ciro Rossi

• Enzimas são catalisadores biológicos

• Proteínas (maioria) ou RNAs (ribozimas) que aumentam a velocidade das reações em
ambientes fisiológicos
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Enzimas | Fosfolipases A2 Prof. Ciro Rossi

Bahnson 2005
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Enzimas | Fosfolipases A2 Prof. Ciro Rossi

Bahnson 2005
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Enzimas | Os componentes de uma enzima Prof. Ciro Rossi

Coenzimas: um grupo orgânico ou

Co-fatores: Íons inorgânicos, como Mg2+, metalorgânico, carreadores de grupos
Cu2+, Fe2+, Fe3+, K+, Mn2+, Mo, Ni2+, Zn2+ funcionais, prótons e elétrons

A maioria é derivada de vitaminas,

como NAD e FAD

Enzimas | Tipos de enzima
N° da Nome da
classe classe
1 Oxidorredutase
2 Transferase
3 Hidrolase
4 Liase
5 Isomerase
6 Ligase
Classe enzimática (transferase)
Subclasse (fosfotransferase)
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Tipo de reação catalisada
Transferência de elétrons
Transferência de grupos
Hidrólise
Clivagem de C-C, C-O, C-N ou outras ligações
Transferência de grupos dentro de uma molécula
Formação de C-C, C-S, C-O e C-N
(2.7.1.1.) N° de comissão enzimática (E.C.), um
sistema de identificação universal
Glicose é o aceptor do grupo fosforil
Grupo hidroxila como aceptor
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Enzimas | Tipos de catálise Prof. Ciro Rossi

• Em algumas enzimas, a catálise envolve a formação de

outras interações transitórias com o substrato ou
transferência de grupos

• Catálise geral ácido-básica: envolve a transferência

de prótons e é a forma mais comum

• Catálise covalente: formação de ligação covalente

transitória entre a enzima e o substrato

• Catálise por íons metálicos: Íons metálicos ligados à

enzima participam da catálise, de modo a orientar ou
estabilizar o estado de transição, ou mediar reações
de oxidorredução
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Enzimas | O que uma enzima faz, efetivamente? Prof. Ciro Rossi

Estado de transição sem enzima

• Ao diminuir a energia de
ativação de uma reação, a
enzima aumenta a taxa (e
velocidade) com que uma
reação ocorre, até alcançar
o equilíbrio

Estado de transição alternativo

com energia de ativação menor
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Enzimas | O que uma enzima faz, efetivamente? Prof. Ciro Rossi
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Enzimas | O que uma enzima faz, efetivamente? Prof. Ciro Rossi

• Uma vez que um estado de transição é

necessário, o modelo chave-fechadura
não existe!

• Para catalisar uma reação, uma enzima

deve ser complementar ao estado de
transição (máximo de interações), não ao
substrato

• A otimização de interações fracas entre

a enzima e o substrato libera energia
•
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Enzimas | Cinética enzimática Prof. Ciro Rossi

Velocidade inicial: taxa com que o substrato é consumido em um curto espaço de tempo

Velocidade máxima: maior V0 alcançada em

uma reação, ocorre em altas [S], em que a
enzima se encontra saturada

Equação de Michaelis-Menten

Constante de Michaelis: corresponde à [S]

em que ponto em que V0 = ½ Vmax
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Enzimas | Cinética enzimática Prof. Ciro Rossi

Quanto menor o valor de

Km, maior a afinidade da
enzima pelo substrato.
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Enzimas | Cinética enzimática Prof. Ciro Rossi

Equação de
Lineweaver-Burk
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Enzimas | Cinética enzimática: os efeitos de inibidores Prof. Ciro Rossi

Inibição competitiva: o inibidor

compete pelo substrato pelo
sítio ativo da enzima

Pode ser revertida com a

adição de mais S, mas o Km
aparente será maior

Inibidor se liga ao
mesmo sítio do substrato
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Enzimas | Cinética enzimática: os efeitos de inibidores Prof. Ciro Rossi

Incompetitivas: o inibidor se
liga a um sítio diferente do
substrato no complexo ES

Vmax diminui, mesmo com

aumento da [S]

KM(aparente) diminui, porque a

reação é deslocada no
sentido ESI
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Enzimas | Cinética enzimática: os efeitos de inibidores Prof. Ciro Rossi

• Mistas: o inibidor se liga tanto

à enzima livre quanto ao
complexo ES

Vmax diminui, mesmo com

aumento da [S]

KM(aparente) diminui, porque a

reação é deslocada no sentido
ESI

• A incompetitiva e a mista
promovem alterações
conformacionais que afetam
a formação de produto, o
que não pode ser
contornado com a adição
de mais S
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Enzimas | Cinética enzimática: os efeitos de inibidores Prof. Ciro Rossi
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Enzimas | Cinética enzimática: os efeitos de inibidores Prof. Ciro Rossi

• Irreversíveis: formam ligações covalentes

com aminoácidos essenciais para a catálise

• O DIFP (diisopropil fluorofosfafo) é um tipo

• Útil no estudo dos mecanismos de reação

de uma enzima
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Enzimas | Cinética enzimática: os efeitos do pH e temperatura Prof. Ciro Rossi

• Alteração da energia cinética

da molécula afeta a
velocidade da reação e
extremos podem impedir
ação enzimática

• Alteração do grau de
ionização dos resíduos de
aminoácidos afeta a
velocidade da reação

• Alterações extremas podem

impedir ação enzimática
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Enzimas | Vias metabólicas e enzimas regulatórias Prof. Ciro Rossi

• No metabolismo celular, grupos de enzimas atuam juntas em

vias de reações sequenciais para realizarem um determinado
processo metabólico

• A maioria das enzimas segue os parâmetros cinéticos já

descritos, mas têm um efeito na taxa de reação de toda a
sequência de reação

• Estas enzimas são chamadas de enzimas regulatórias, que

podem ser reguladas por:

Modificação alostérica
Modificação covalente
Clivagem proteolítica
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Enzimas | Vias metabólicas e enzimas regulatórias: modificações alostéricas Prof. Ciro Rossi

• Enzimas alostéricas alteram sua conformação

de acordo com a ligação de moduladores

• Geralmente têm sítios de ligação a

modificadores alostéricos (não são inibidores)

• Tendem a ser maiores que enzimas não

regulatórias, com duas ou mais subunidades,
domínios de ligação ao substrato e
modificadores
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Enzimas | Vias metabólicas e enzimas regulatórias: modificações alostéricas Prof. Ciro Rossi

• As relações entre V0 e [S] se diferem da

cinética de Michaelis-Menten

• A curva tende a ser sigmóide, em vez de

hiperbólica

• Ativadores alostéricos tendem a diminuir

o valor de Km, e moduladores negativos
tendem a fazer o contrário
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Enzimas | Enzimas reguladas por modificações covalentes Prof. Ciro Rossi

• Efeitos:
• Introdução de cargas,
polaridade e • Mais comum
disponibilidade estérica • Cinases x Fosforilases
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Enzimas | Enzimas reguladas por clivagem proteolítica Prof. Ciro Rossi
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Enzimas | Enzimas reguladas por diversas formas Prof. Ciro Rossi

• Fosforilação
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Referências Prof. Ciro Rossi

Mecanismo de ação de fosfolipases A2

https://doi.org/10.1016/j.abb.2004.08.013

Slides cedidos por Prof. Ciro César Rossi do DBB - UFV.