Faculdade de Farmácia da Universidade de Coimbra

Laboratório de Microbiologia

Disciplina: Microbiologia Geral Trabalho Nº 4: Crescimento de microrganismos:

meios de cultura e técnicas de sementeira

Objectivos:
- Saber como se classificam os meios de cultura e aprender como se usam relativamente ao
objectivo do trabalho a realizar
- Conhecer as várias formas de apresentação dos meios de cultura
- Aprender as técnicas de sementeira mais adequadas ao tipo de meio e objectivo do trabalho
- Observar colónias/crescimento bacteriano em diferentes meios de cultura

Constituição dos Meios de cultura:

Para cultivar os microrganismos no laboratório é necessário fornecer-lhes nutrientes, incluídos nos
meios de cultura, bem como, temperatura e atmosfera adequada ao seu crescimento.
Os meios base, apresentam normalmente na sua constituição hidratos de carbono e hidrolisados de
proteínas, denominados peptonas ou triptonas (dependendo se são hidrolisados pela pepsina ou
tripsina, respectivamente), e são usados na generalidade para manter as bactérias no laboratório.
Alguns meios, classificados como meios enriquecidos, apresentam maior variedade no teor de
proteínas, e podem ser complementados, por exemplo, com vitaminas, e destinam-se ao
crescimento de bactérias mais exigentes no conteúdo nutricional. Como exemplo de meios
enriquecidos podemos referenciar a gelose tripticase-soja, caldo cérebro-coração e a gelose de
sangue.
Os meios selectivos são meios usados no isolamento bacteriano e, tal como o nome indica,
seleccionam o crescimento de um tipo de microrganismo em detrimento de outro. Isto acontece
porque na sua composição existem compostos que inibem o crescimento de um determinado grupo
de bactérias, mas permitem o crescimento de outros. Esses constituintes são muitas vezes corantes
incorporados no meio numa concentração muito baixa (1:10000). Podem também ser, por exemplo,
sais biliares e cloreto de sódio em elevada concentração, ou valores diferentes de pH do meio (os
meios de cultura para bactérias têm normalmente um pH de 6,8 a 7,2).
Existem ainda os meios de diagnóstico ou diferenciais que permitem a identificação bacteriana por
testes fenotípicos, em que se detecta a produção de determinadas enzimas ou a presença de dadas
vias metabólicas. Estes meios contêm obviamente o substrato da(s) enzimas(s).
Microbiologia geral - FFUC Crescimento de microrganismos
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Disciplina: Microbiologia Geral Trabalho Nº 4: Crescimento de microrganismos:

meios de cultura e técnicas de sementeira

Apresentação dos Meios de cultura:

Os meios de cultura podem ser líquidos ou sólidos.
Os meios sólidos contêm gelose (agar-agar) na concentração de 1,5 %, e podem apresentar-se sob
várias formas:
 Em tubo: direito, semi-inclinado e inclinado
 Em placa de Petri
Os meios líquidos, podem ser apresentados em tubo, matrazes ou frascos.

Sementeira dos Meios de cultura / Técnicas de sementeira

Os meios líquidos semeiam-se (ou inoculam-se) por agitação. Com a ansa carregada com o inóculo,
esfrega-se contra a parede do tubo e, depois de tapado com o tampão de algodão, agita-se fazendo
o tubo rolar entre as mãos.
A sementeira dos meios sólidos depende da forma como eles se apresentam, assim:
 Os tubos com meio direito semeiam-se em picada com o fio.
 Os tubos com meio semi-inclinado inoculam-se em picada e em estria longitudinal com o fio.
 Os tubos com meio inclinado semeiam-se com ansa em estria longitudinal ou em zig-zag. Pode
também usar-se a água de condensação quando existe pouco inóculo.
 As placas, dependendo do objectivo, podem inocular-se: em estria, para manutenção das
bactérias no laboratório; pela técnica de esgotamento do inóculo à superfície de um meio solido,
para isolamento; em toalha (antibiograma); por inundação (contagem de colónias).

Incubação dos Meios de cultura:

Salvo situações especiais, como por exemplo bactérias fastidiosas, os meios de cultura assim
inoculados são incubados em estufas próprias, a 35ºC durante 18 a 24 horas.
As placas de Petri são sempre incubadas na posição invertida.

Avaliação do crescimento bacteriano:

Salvo situações especiais, como por exemplo bactérias fastidiosas, os meios de cultura assim
inoculados são incubados em estufas próprias, a 35ºC durante 18 a 24 horas.
As placas de Petri são sempre incubadas na posição invertida.

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Disciplina: Microbiologia Geral Trabalho Nº 4: Crescimento de microrganismos:

meios de cultura e técnicas de sementeira

Avaliação do crescimento bacteriano:

A avaliação do crescimento bacteriano dependerá do tipo de meio utilizado. Assim:
 Meios de cultura líquidos: o crescimento bacteriano traduz-se pela turvação do meio

 Meios de cultura sólidos: o crescimento bacteriano traduz-se pelo desenvolvimento de colónias que
podem estar separadas ou não, dependendo do tipo de sementeira utilizado.
Neste tipo de meios de cultura, em especial quando em placas de Petri, deve ter-se em conta a côr,
o aspecto (mucosas ou não), a forma, o tamanho.
Cada colónia resulta, em princípio, da multiplicação de uma só bactéria, pelo que diferentes
espécies/géneros apresentarão colónias diferentes. Na generalidade, estas diferenças são mais
visíveis em meios selectivos.

Protocolo da Aula Laboratorial:

A avaliação do crescimento bacteriano dependerá do tipo de meio utilizado. Assim, cada aluno
efectuará o seguinte:
1. Inoculação de diferentes meios de cultura, utilizando diferentes técnicas de sementeira
A. A partir de um meio sólido em tubo inoculado com cultura pura (uma espécie):
(a) Inoculação de um meio líquido (caldo tripticase de soja em tubo)
(b) Inoculação de um meio sólido em tubo, inclinado: sementeira em estria (gelose tripticase
de soja)
B. A partir de mistura bacteriana em suspensão:
(c) Inoculação de meio sólido em placa de Petri: técnica de esgotamento do inóculo à
superfície de um meio sólido (gelose MacConkey, gelose tripticase de soja)
2. Incubação a 35ºC durante 18-24 horas
3. Observação, interpretação e registo dos resultados

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meios de cultura e técnicas de sementeira

Aluno: ___________________________________________________________________

Nº de aluno: ______________ Turma: __________ Data: ___ / ___ / ___

Resultados:

Bactéria em estudo: _________________________

Mistura em estudo:__________________________

1. Meios de cultura inoculados

a) ___________________________________________

b) ___________________________________________

c) ___________________________________________

2. Relativamente aos meios inoculados, observou ou não crescimento bacteriano? Como

constatou esse crescimento?

a) __________________________________________________________________________
b ) _________________________________________________________________________
c ) _________________________________________________________________________

3. O que observa na placa de Petri? Julga ter a(s) mesma(s) espécie(s) bacteriana(s) que o seu
colega do lado? Porquê?

____________________________________________________________________________

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biologia geral ____________________________________________________________________________

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