CENTRO UNIVERSITÁRIO DE PATOS DE MINAS

Disciplina: BIOQUÍMICA
Professora: MARIA PERPÉTUA OLIVEIRA RAMOS
Prática: Aminoácidos e proteínas (parte 01)
Curso: FARMACIA T URMA
Estudante:

1 OBJETIVOS

 Determinar a composição elementar das proteínas.

 Métodos de análise e identificação de aminoácidos e proteínas.

2 INTRODUÇÃO

As proteínas são as moléculas orgânicas mais abundantes e importantes nas células e perfazem 50% ou mais
de seu peso seco. São encontradas em todas as partes de todas as células, uma vez que são fundamentais sob todos os
aspectos da estrutura e função celulares. Existem muitas espécies diferentes de proteínas, cada uma especializada para
uma função biológica diversa. Além disso, a maior parte da informação genética é expressa pelas proteínas.

Pertencem à classe dos peptídeos, pois são formadas por aminoácidos ligados entre si por ligações peptídicas.
Uma ligação peptídica é a união do grupo amino (-NH 2) de um aminoácido com o grupo carboxila (-COOH) de outro
aminoácido, através da formação de uma amida.

3 DESENVOLVIMENTO

3.1 Material

EPIs

Óculos de proteção, luvas e máscara (opcional ), Jaleco

Uso geral para cada duas bancadas

Sol. Glicina em béqueres .Solução de caseína 1g/100mL Clara de ovo diluída em água (albumina). Sol. Aminoácidos
livres

Para cada bancada da direita e esquerda do laboratório

Caseína em pó colocados em tubos Papel filtro em tiras embebidos de solução de (CH3COO)2Pb

Ninidrina 1g/mL Água destilada
Fósforos Papel tornassol rosa
6 Tubos de ensaio Pinça de madeira

3.2 Procedimento

3.2.1 Teste da composição elementar das proteínas.

As proteínas são sempre compostas por Carbono, Hidrogênio, Oxigênio, Nitrogênio e geralmente Enxofre.
Através da pesquisa destes elementos pode-se determinar a composição elementar das proteínas.

ELEMENTO É IDENTIFICADO POR ...

 Carbono Carbonização do pó (Proteína) pelo aquecimento.

Nitrogênio Formação de vapores de amônia (NH3) que tornam o papel de tornassol azul.

Hidrogênio

Enxofre Liberação de H2S e formação se sulfeto de chumbo (papel com acetato de chumbo
torna-se preto).
Hidrogênio

Hidrogênio Deposição de vapores de água nas paredes do tubo.

Oxigênio

a) Adicione em um tubo de ensaio uma pitada de caseína em pó (o pó e o tubo devem estar bem secos).
b) Suspender na boca do tubo uma tira de papel tornassol vermelho umedecido em água destilada, e um pedaço
de papel filtro umedecido em solução de acetato de chumbo.
c) Aquecer o tubo diretamente na chama e observar.
d) Assinalar no quadro abaixo os resultados observados.
COR observada RESULTADO (elementos presentes)

Resíduo

Papel de tornassol

Papel em acetato de chumbo

Aparecimento de água após sim ( ) ou não ( )

aquecimento

Conclusão: ( O que se pode afirmar?)

3.2.2 Reações de coloração

 Reação da Ninidrina
As reações orgânicas características dos aminoácidos são aquelas de seus grupamentos funcionais, isto é, os
grupos carboxílicos, os grupos amino, e os grupos funcionais presentes nas diversas cadeias laterais. Essas reações
permitem, por exemplo, a identificação de aminoácidos nos hidrolisados proteicos, identificação da sequência de
aminoácidos de uma proteína, identificação de aminoácidos essenciais para a atividade de uma enzima.

Uma reação bastante utilizada para verificar a presença de aminoácidos em pequenas amostras é a Reação da
Ninidrina, devido à sua elevada sensibilidade.

Princípio da reação da ninidrina: pelo aquecimento, o grupo α-amino de um aminoácido reage com duas moléculas de
ninidrina, produzindo um complexo de cor azul, denominado “Púrpura de Ruhemann”. A cor azul é obtida na reação
da ninidrina para todos os aminoácidos que apresentam um grupo α-amino livre. Enquanto a prolina e a
hidroxiprolina, em que o grupo α-amino está substituído, produzem derivados com uma cor amarela característica.

Reação da ninidrina
 Fonte http://www.cromlab.es/REAC_DER_AA_NINHYDRIN.htm

a) Separe mais 5 tubos de ensaio,

b) Adicione primeiro tubo, 5 mL de H2O;
c) No tubo 2 adicione 5 mL de solução de glicina;
d) No tubo 3 adicione 5 mL de caseína;
e) No tubo 4 adicione 5 mL de aminoácidos livres.
f) No tubo 5 adicione 5 mL de ovoalbumina.
g) Acrescente nos 5 tubos, dez gotas de ninidrina 1 g/100 mL;
h) A seguir coloque os tubos em banho-maria fervente durante 10 minutos e observe os resultados obtidos e
complete o quadro a seguir.
A cor violeta indica presença de aminoácidos livres (de grupos amino terminais de peptídeos e
proteínas e -amino da lisina),
A cor amarela indica presença de prolina e hidroxiprolina

TUBOS 1 ( H2O) 2 (Glicina) 3 (Caseína) 4 (a.a livres) 5 (clara ovo)

Cor observada após adição de

ninidrina

Ausência ou presença de
aminoácidos livres

4. RELATÓRIO

4.1 a) Em que se fundamenta a reação da ninidrina.

b) Indique 2 classes de substâncias que reagem positivamente com ninidrina?