EXPRESSO GNICA

O termo expresso gnica refere-se ao

processo em que a informao codificada
por um determinado gene decodificada
em uma protena. Teoricamente, a
regulao em qualquer uma das etapas
desse processo pode levar a uma
expresso gnica diferencial.

Expresso gnica 1
 Objetivos da regulao da expresso gnica em
bactrias e em organismos multicelulares

Nas bactrias o controle da expresso gnica

serve principalmente para permitir que as
clulas se ajustem s mudanas nutricionais no
ambiente, de forma que o seu crescimento e
diviso sejam otimizados.
Em organismos multicelulares a expresso
gnica controlada regula um programa gentico
fundamental para o desenvolvimento
embrionrio e a diferenciao.
Expresso gnica 2
 Como uma clula pode controlar as
protenas que ela faz?
Controlando quando e como um determinado
gene transcrito;
Controlando como um transcrito primrio de
RNA sofre o splicing ou processado;
Selecionando quais mRNAs so traduzidos;
Ativando ou inativando seletivamente as
protenas depois da sua sntese.

Expresso gnica 3
 Estrutura Gnica e Definio de Termos

Gene: toda a seqncia de cido nuclico que

necessria para a sntese de um polipeptdeo
funcional ou molcula de RNA.
Unidade de Transcrio : segmento de DNA que
codifica a seqncia no transcrito primrio.
Promotor: a seqncia mnima necessria para
que a transcrio se inicie corretamente.
Elementos Regulatrios em Cis: elementos que
regulam a iniciao da transcrio.
Expresso gnica 4
Expresso gnica 5
 Diferenas na Iniciao da Transcrio
em Eucariotos e Bactrias
Enquanto as bactrias contm um nico tipo de
RNA-polimerase, as clulas eucariticas
apresentam trs: RNA-polimerase I, RNA-
polimerase II e RNA-polimerase III.
A RNA-polimerase bacteriana capaz de iniciar a
transcrio sem o auxlio de protenas adicionais.
As RNA-polimerases eucariticas requerem a ajuda
de um grande conjunto de protenas chamadas
fatores gerais de transcrio.

Expresso gnica 6
 Diferenas na Iniciao da Transcrio
em Eucariotos e Bactrias
Em eucariotos as protenas reguladoras da expresso
gnica (repressores e ativadores) podem influenciar a
iniciao da transcrio, mesmo quando esto ligadas ao
DNA a milhares de pares de nucleotdeos distante do
promotor. Em bactrias os genes so freqentemente
controlados por uma nica seqncia regulatria,
tipicamente localizada prxima ao promotor.
A iniciao da transcrio em eucariotos deve levar em
considerao a compactao do DNA nos nucleossomos
e as formas mais compactas da estrutura da cromatina.

Expresso gnica 7
 As Trs RNA-Polimerases das Clulas
Eucariticas
RNA-polimerase I - transcreve os genes para rRNA.
RNA-polimerase II - transcreve todos os genes que
codificam protenas, mais alguns genes que
codificam pequenos RNAs (p.ex., aqueles presentes
nos spliceosomes).
RNA-polimerase III transcreve os genes de tRNAs,
rRNA 5S e genes para pequenos RNAs estruturais.

Expresso gnica 8
 Fatores Gerais de Transcrio

Os fatores gerais de transcrio so

responsveis pelo posicionamento correto
da RNA-polimerase no promotor, ajudam na
separao das fitas de DNA para permitir o
incio da transcrio, e liberam a RNA-
polimerase do promotor quando a
transcrio se inicia.

Expresso gnica 9
 Formao do Complexo de Iniciao
da Transcrio
TFIID liga-se a regio TATA, possibilitando a
ligao de TFIIB.
Isso seguido pela ligao de TFIIF e RNA-
polimerase II.
TFIIE, TFIIH e TFIIJ ento se juntam ao
complexo.
TFIIH usa ATP para fosforilar a RNA-
polimerase II, mudando a sua conformao de
forma que a RNA-polimerase liberada do
complexo e capaz de iniciar a transcrio.
Expresso gnica 10
Etapas na formao do complexo de
iniciao da transcrio em eucariotos
 Estrutura tridimensional da Protena que se liga
a TATA (TATA-Binding Protein TBP)

Expresso gnica 12
 Complexo TBP-DNA

Expresso gnica 13
 Complexo TBP-TFIIA-DNA

Expresso gnica 14
 Complexo TBP-TFIIA-TFIIB-DNA

Expresso gnica 15
 Os Fatores Transcricionais Seletivos
Aumentam a Atividade do Promotor
Os promotores isoladamente so geralmente ineficientes.
Fatores de transcrio seletivos que se ligam regio
upstream e a enhancers aumentam a iniciao.
Em alguns casos, protenas adicionais (mediadores,
coativadores) so requeridos para estimular a transcrio.
Protenas que se ligam a seqncias de enhancer devem
atuar de forma semehante quelas que se ligam prximas
ao promotor. O DNA entre o enhancer e o promotor forma
uma ala para permitir que as protenas ativadoras ligadas
ao enhancer faam contato com as protenas ligadas ao
promotor.
Expresso gnica 16
 Domnios Funcionais dos Fatores
Transcricionais Seletivos
Domnio de ligao ao DNA - liga a protena no stio de
ligao do DNA.
Seqncias de localizao nuclear requeridas para
transporte para dentro do ncleo.
Domnio de ativao transcricional - realiza o contato
com os fatores gerais de transcrio.
Regio de dimerizao requerido para formar homo- ou
heterodmeros com outras protenas.
Domnio de ligao de ligante necessrio para ligao
de composto que pode funcionar como ativador do fator.
Expresso gnica 17
 Motivos de Ligao a DNA nos Fatores de Transcrio

Homeodomnio consiste de trs -hlices adjacentes. A maior parte

do contato com as bases do DNA feita pela hlice 3. Exemplos:
protenas Hox e outras protenas reguladoras do desenvolvimento.
Dedo de zinco (Zinc finger) - Esse motivo constituido de uma -
hlice e uma folha pregueada unidas por um on zinco. Exemplos:
receptores de hormnioo esterides, Sp1.
Regio bsica e zper de leucina (ou bZip) A regio bsica serve
para o contato com o DNA e o zper de leucina serve para a formao
do dmero. Exemplos: Fos, Jun (complexos Fos-Jun teriam funo
central na mediao de resposta nuclear a sinais na superfcie celular)
Hlice-ala-hlice Contm um motivo estrutural muito semelhante a
b-zip, exceto que uma ala no helicoidal separa as duas -hlices em
cada monmero. Exemplo: MyoD (fator regulatrio importante na
determinao e diferenciao de msculo).
Expresso gnica 18
 Genes Eucariticos So Regulados por
Combinao de Protenas
A maioria das protenas reguladoras de genes
atuam como parte de um comit de protenas
reguladoras, todas essenciais para a expresso de
um determinado gene na clula correta, em
reposta a uma dada condio, no tempo certo e no
nvel requerido.
O termo controle combinatorial refere-se a forma
como grupos de protenas trabalham juntas para
determinar a expresso de um nico gene.
Expresso gnica 19
 Uma nica Protena Pode Coordenar a
Expresso de Diferentes Genes
Embora o controle da expresso gnica em eucariotos seja
combinatorial, o efeito de uma nica protena reguladora
pode ser decisiva para ligar e desligar, simplesmente
completando a combinao necessria para ativar ou
reprimir um gene.

Um exemplo disso em humanos o caso do receptor de

glicocorticide. Para se ligar aos stos no DNA o receptor
precisa formar um complexo com uma molcula de um
hormnio esteride (p.ex. cortisol). Em resposta aos
hormnios glicocorticides, as clulas do fgado aumentam a
expresso de vrios genes.
Expresso gnica 20
 Efeito de uma nica Protena Reguladora
na Diferenciao
Estudos com clulas musculares em diferenciao,
em cultura, possibilitaram a identificao de protenas
reguladoras importantes, expressadas somente em
cleulas musculares, que coordenam a expresso
gnica.
Quando o gene que codifica uma dessas protenas
reguladoras, MyoD, introduzido em fibroblastos,
eles passam a se comportar como mioblastos e
fundem-se para formar clulas semelhantes s
musculares.
Expresso gnica 21
Um nico Gene que Codifica uma Protena Reguladora
Pode Estimular a Formao de um rgo Inteiro

Estudos sobre o desenvolvimento de olho em Drosophila,

camundongo e humanos mostraram que um nico gene que
codifica uma protena reguladora (Ey em moscas flies e
Pax6 em vertebrados) crucial para o desenvolvimento do
olho. Quando expressado num tipo celular apropriado, Ey
pode desencadear a formao de um rgo inteiro (olho),
composto de diferentes tipos de clulas, todas corretamente
organizadas no espao tridimensional.

Expresso gnica 22
 Os processos de iniciao, alongamento,
processamento e terminao da transcrio so
acoplados em eucariotos

Maniatis & Reed

NATURE |VOL 416 | 4 APRIL 2002

Expresso gnica 23
 Acoplamento das
maquinarias envolvidas
na transcrio, capping,
splicing e poliadenilao

Maniatis & Reed

NATURE |VOL 416 | 4 APRIL 2002

Expresso gnica 24
Modelo de
acoplamento de
splicing a
exportaao do
mRNA e
decaimento
mediado por
nonsense (NMD)

Maniatis & Reed

NATURE |VOL 416 | 4 APRIL 2002

Expresso gnica 25
 Influncia da Estrutura da Cromatina na
Transcrio em Eucariotos
A maior parte do DNA em uma clula eucaritica est
complexada nos nucleossomos e a estrutura espiralada
dificulta o acesso de fatores de transcrio e RNA-
polimerase.
A iniciao da transcrio depende da remoo dos
nucleossomos da regio promotora do gene.
Durante a sntese de DNA, quando os nucleossomos so
substitudos, poderia haver competio entre as histonas e os
fatores de transcrio (p.ex. TFIID) pelos stos promotores.
A ligao e dirupo dos nucleossomos por ativadores.

Expresso gnica 26
 Disrupo e Reorganizao do Nucleossomo

Complexos poderiam estar envolvidos na disrupo dos

nucleossomos:
Participao de fator GAGA e fator de remodelamento de
nucleossomo (nucleosome-remodeling factor, NURF)
Participao de complexo SW1/SNF
Existe uma boa correlao entre acetilao de histona e a
atividade transcricional da cromatina.
Competio entre histonas e fatores de transcrio
poderia estar envolvida no controle da expresso genica.

Expresso gnica 27
 Regies Controladoras de Lcus (Locus
Control Regions, LCRs)

Regies controladoras de lcus (LCRs) so seqncias de

DNA essenciais para o estabelecimento de uma
configurao aberta da cromatina.
Elas so capazes de inibir a represso normal da transcrio
sobre reas relativamente grandes contendo vrios genes.
Um dos mais bem estudados o LCR que controla a
expresso tecido- especfica da famlia de -globin.

Expresso gnica 28
Expresso gnica 29
Expresso gnica 30
 Correlaes entre a Metilao do Promotor
e Inatividade Gnica
Em clulas sangneas vermelhas de humanos e galinhas, o
DNA envolvido na sntese de globina est completamente
(ou quase completamente) no-metilado.
O gene de ovalbumina de galinha o est metilado nas
clulas do oviduto, mas metilado nos outros tecidos.
Nos somitos de camundongo, a demetilao de um
enhancer de MyoD precede a transcrio de MyoD e
essencial para a especificao dessas clulas como
precursoras de msculo.

Expresso gnica 32