Alterações genéticas e citogenéticas

envolvidas nas perdas gestacionais

Eralda Luíza Concentino Slomp

Biomédica, MSc PhD
GENÉTICA CLÍNICA
É a especialidade que trabalha a prevenção,
diagnóstico e tratamento das doenças
hereditárias, metabólicas congênitas, erros
inatos do metabolismo, retardamento mental,
diagnóstico de malformações e outras
anomalias congênitas, orientação de casais
consanguíneos e casais com abortamentos
habituais.
CITOGENÉTICA HUMANA
É o estudo dos cromossomos, de sua
estrutura e sua herança aplicado à prática
da genética médica. A análise
cromossômica, o cariótipo, com uma
resolução e precisão muitíssimo
melhoradas, é um procedimento
diagnóstico cada vez mais importante em
várias áreas da medicina.
 O GENETICISTA...

Estabelece o diagnóstico, o prognóstico e, se

possível, a prevenção e o tratamento de
doenças genéticas. Também informa o risco
de recorrência ou ocorrência de doenças
genéticas, tanto nos pacientes, quanto em
seus familiares.

Fonte: www.google.com.br
 Quando procurar um GENETICISTA
1) Casais em que um dos parceiros é portador de uma síndrome ou doença de natureza
genética.
2) Casais com laços de parentesco (consanguinidade):
3) Casais que possuem um ou mais filhos com malformações congênitas, Anormalidade
cromossômica, Deficiência mental, Regressão neurológica, Surdez na infância, Perda
visual grave na infância, Distrofia muscular, Nanismo...
4) Casais com duas ou mais perdas fetais (mesmo se intercaladas com recém-nascidos
normais)
5) Casais com história de infertilidade, especialmente esterilidade masculina.
6) Gravidez com idade materna elevada (idade materna de 35 anos ou mais,
independente da translucência nucal)
7) Gravidez com defeitos fetais vistos ao ultrassom (incluindo aumento da translucência
nucal)
8) Pessoas que tenham na família história de câncer de mama afetando vários parentes
de primeiro grau ou com início abaixo dos 40 anos.
9) Pessoas que tenham na família história de câncer colorretal afetando vários parentes
de primeiro grau ou com início abaixo dos 40 anos.
10) Pessoas que tenham na família história de demência ou doença neurodegenerativa
afetando vários parentes de primeiro grau ou com início abaixo dos 50 anos.
 Relembrando...
Molecular Monogênicas
Anemia falciforme; Doença de Huntington; Fibrose
cística; Hemofilia A; Surdez Congênita...

Citogenética
Clássica
Multigênicas
Alzheimer; Mal formação congênita; câncer;
Hipertensão Arterial; Obesidade; Trombofilias.

Citogenética
Molecular Cromossomopatias
Síndrome de Down; Síndrome de Turner; Síndrome do
X-Frágil; Trissomias: 18 -13 –X.
Falha reprodutiva humana

Incapacidade de conceber

Incapacidade de manter a
gravidez

Perda da gravidez após uma

concepção bem-sucedida.
Falha reprodutiva humana

Infertilidade
um em cada seis
casais em idade
reprodutiva

Aborto
espontâneo
15-20% de
todas as
gestações,
 Causas Citogenéticas
Anormalidades cromossômicas são as causas mais comuns de perdas de
gravidez no primeiro trimestre e estão associadas a uma redução na
fertilidade.

1ºtrimestre – 0 a 13 semanas
2º trimestre 14 a 26 semanas
65% dos abortos
espontâneos devido 1,5% dos abortos 3º trimestre 26 a 40 s.
a anormalidades causados por
cromossômicas anormalidades
cromossômicas
 COMO OBTER CROMOSSOMOS ?
Sangue periférico Medula óssea Tumor sólido
TIPOS DE AMOSTRA

Fragmento de pele Líquido amniótico

Vilo corial

Sangue de cordão umbilical Restos ovulares e de aborto

 Vilo Corial

✔ Coleta realizada somente pelo médico;

✔ Coleta invasiva, risco para o feto;
TIPOS DE AMOSTRA

✔ Idade gestacional recomendada é da 12 a 14ª semana de gestação;

✔ Após a coleta o material deverá ser colocado em frasco estéril
contendo meio apropriado para conservação dos fibroblastos;
✔ Temperatura refrigerado;
✔ Deverá estar no setor técnico até no máximo 1 dia após a coleta;
✔ Questionário obrigatório;
 Líquido amniótico
TIPOS DE AMOSTRA

✔ Coleta realizada somente pelo médico;

✔ Coleta invasiva, risco para o feto;
✔ Idade gestacional recomendada é da
15 a 20ª semana de gestação;
✔ Volume mínimo de 15 mL do líquido amniótico;
✔ Temperatura refrigerado;
✔ Deverá estar no setor técnico até no máximo 1 dia após a coleta;
✔ Questionário obrigatório;
 Sangue de cordão umbilical

✔ Coleta realizada somente pelo médico;

TIPOS DE AMOSTRA

✔ Heparina sódica;
✔ Idade gestacional recomendada é a partir da 20ª semana de gestação;
✔ Temperatura refrigerado;
✔ Deverá estar no setor técnico até no máximo 48 hs após a coleta;
✔ Questionário obrigatório;
 Restos ovulares de aborto

✔ Assim que o material for coletado

TIPOS DE AMOSTRA

deverá ser colocado em frasco estéril e

em soro fisiológico estéril;
✔ Para fetos com mais de 20 semanas de gestação, o médico deverá
coletar 2 cm da pele do feto e ou fragmento de placenta;
✔ Temperatura refrigerado;
✔ Deverá estar no setor técnico até no máximo 1 dia após a coleta;
✔ Questionário obrigatório;
Quando acontecem as anomalias
cromossômicas?
Conceituando as Perdas Gestacionais:

Menos de seis
Entre seis e 22 Após ou iguais a
semanas após a
semanas 23 semanas
concepção

“perda “aborto
“natimortas”.
precoce”. espontâneo”.
Conceituando as Perdas Gestacionais:
Tipos de Anormalidades cromossomicas
Numéricas
(envolve
Euploidas ( conjuntos Triploidia – 3n
cromossomo completos)
Inteiro)
Tetraploidia -4n
Aneuploidias (envolve Monossomia 2n-1
apenas um par)
Trissomia 2n+1
Estruturais Deleção
(envolve
parte do
cromossomo)
Duplicação
Inversao
Duplicação
Cariótipo normal – Uma célula

• 46 cromossomos ( 23 Pares) - Diploide 2n

Monossomia
Trissomia
Tripoloidia
Tetraploidia

Triploidia – 3n=69
 Monossomia
Trissomia
Tripoloidia
Tetraploidia

Tretraploidia – 4n=92
Monossomia
Trissomia
Tripoloidia
Tetraploidia

Monossomia - 2n -1 = 45
Anomalias cromossômicas

Mutation Research 61,1979

Mutation Research 61,1979
Mutation Research 61,1979
Anomalias na Gestação

Triagens de rotina no soro materno

para marcadores proteicos
específicos, que podem sugerir a
presença de trissomias.

Primeiro e o segundo
trimestres de gestação
 Marcadores Bioquímicos:
Primeiro semestre
(11a a 13a semana de gestação)

• (hCG) -Hormônio Diminuída nas

gonadotrofina coriônica outras trissomias.
humana, Acima do limite na
trissomia do 21,
• (PAPP-A) Proteína A
plasmática associada à
gestação Abaixo do limite
normal em todas as
trissomias,
Marcadores Bioquímicos - Durante o segundo
trimestre gestacional

• Triagem tripla.
• a alfa feto proteína (MSAFP),
• estriol não conjugado (uE3), Diminuídos nas trissomias,
• a b-hCG livre

Aumentada na trissomia do 21 e.

Triagem quádrupla.
+ inibina A, Aumentada na trissomia do 21 e inalterada
nas demais trissomias
Ultrassonografias

• Translucência nucal
• Entre a 11a e a 14a semanas de
gestação,
• espessura subcutânea da nuca
fetal em relação à idade
gestacional.
• Aumentada nas trissomias do
13, 18, 21 e monossomia do X.

• Medida do osso nasal

• Ausente em grande parte dos
fetos com trissomia do 21
durante o prime o primeiro
trimestre de gestação.
 Quando os cromossomos são Estudados?

Procedimentos
invasivos no pré-natal:

Suspeita de anomalias
citogenéticas com base Gestantes com idade
nos exames de rotina Risco aumentado avançada (superior a 35
pré-natal. de anomalia fetal anos)

Histórico familiar de exposição da mãe a

cromossomopatia agentes mutagênico
Alterações Citogenéticas -
Dignóstico pré-natal

• Coleta de material biológico feita

diretamente do material fetal.

• Três testes invasivos :

• Amniocentese,
.
• Punção de vilosidades
• coriônicas

• Cordocentese
Indicações para análise de cromossomos
PÓS NATAL
Homens com
Padrão não reconhecível de duas
ginecomastia Neoplasias.
ou mais mal formações primárias
acentuada e
em crianças polimalformadas;
hipogonadismo;

Mulheres com baixa Homens com hipertrofia Natimortos com malformações

estatura proporcional e peniana, hipergonadismo e ou sem motivo reconhecível para
amenorréia primária; retardo mental; a morte fetal;

Recém-nascidos com Retardo mental ou atraso de

genitália ambígua- Casal com historial de desenvolvimento em crianças
definir o sexo; abortos repetitivos; disfórmicas ou com múltiplas
malformações;
 Como identificar os cromossomos...
• Mais facilmente visualizados durante a divisão celular
(metáfase).

•Classificação:
•Tamanho
•Posição do
Centrômero
•Bandeamento

•Diferentes corantes - diferentes padrões de bandeamento.

Morfologia Cromossômica
Constrições Secundarias
A B
 C

D
 E

F G
Padrão de Bandeamento Bandas G
Tipos e Colorações

Bandas Q

Bandas G

Bandas R

Bandas C
 Tipos e Colorações

Bandas Q Tripsina, para a desnaturação das

proteínas cromossômicas e em
seguida são corados com o corante
Giemsa
Bandas G Evidenciam um típico padrão de
bandas claras e escuras
Faixas escuras DNA rico em
bases AT e poucos genes ativos;
Bandas R Faixas claras têm DNA rico em
bases GC e apresentam muitos
genes ativos.
Bandas C
Meiose

• Meiose (da palavra grega que significa diminuição) envolve a redução

do número de cromossomos à metade em nossos gametas,
• Sem meiose?
• o número de cromossomos duplicaria a cada geração, desiquilibrando o
metabolismo celular.
Meiose

• Nossos gametas haploides (n=23)

• Células diploides (2n=46)
• Divisão Celular com finalidade de geração de gametas.
• Momento de transmitir as características hereditárias para a próxima
geração
• Redução do numero de cromossomos para a metade.
• Momento crítico. Principal causa das aneuploidias.

http://www.youtube.com/watch?v=47vf2m-Iyb8
Aneuploidias
Anomalias Cromossômicas
Numéricas
Tipos e prevalência de anormalidades
cromossômicas em produtos de
concepção

https://www.scielo.br/scielo.php?pid=S1519-38292018000200265&script=sci_arttext&tlng=pt#t5
Principais Aneuploidias Humanas

os
m s
s so ico
o om
o m s
Cr utos
A • Síndrome de Down
• Síndrome de Edwards
• Síndrome de Patau

s i
xua
• Síndrome de Turner

s Se
• Síndrome de Klinefelter

mo
sso
mo
Cro
Consequências

Fenótipo
depende de
vários fatores:

região de qual genes específicos

tamanho da
cromossomo está presentes na
alteração,
envolvida região afetada.
Síndrome de Klinefelter
(a) Estatura alta, atraso do desenvolvimento pubertário;
(b) Redução dos Testículos
Anomalias Cromossômicas
Estruturais
Organizando Cariótipo
 Anomalias Estruturais

Perda ou ganho Rearranjo de

de parte dos parte dos
cromossomos cromossomo

Balanceadas
Não-balanceadas

Duplicação
Deleção Inversão Translocação
(Adição)
Alterações Estruturais

Deleção Duplicação

Inversão Translocação
Anomalias Estruturais
Desbalanceadas
Deleção e Duplicação
Alterações Estruturais

Deleção Duplicação

Inversão Translocação
 Deleção ou Deficiência
● Quebra e subsequente perda do seguimento
cromossômico
● Envolve perda de um a vários genes;
Deleção ou Deficiência
Deleção ou Deficiência
HETEROZIGOTO HOMOZIGOTO
Consequências das Deleções...

Pseudo-dominância. - Como o
A homozigosidade para dominante está ausente no
uma deleção é letal cromossomo deletado, o único alelo
recessivo é fenotipicamente expresso.

Haploinsuficiencia – A presença de uma

cópia não é suficiente

A heterozigosidade pode
ter efeitos graves no Imprinting Genômico – A copía funcional é
desenvolvimento. herdada de um genitor apenas
eraldaslomp@gmail.com
Infertilidade na Prática

Professora: Eralda Slomp

 Investigar, orientar e indicar exames e consulta de aconselhamento genético
através de um fluxograma escalonando para cada tipo de apresentação clínica
que possa surgir.

Infertilidade Perda Gestacional Transmissão de

Conjugal: Recorrente: Doenças Genéticas:

+ 01 ano em tentativa de 02 ou + perdas ~ 4,5% a 6% dos

engravidar espontâneas RNs são afetados
ou (antes da 20ª semana por uma doença
+ 06 meses de gestação). genética.
(mulheres +35 anos).

~ 50% dos casos de infertilidade envolvem algum mecanismo genético pré ou

pós concepção
 Nossa Atuação
Femino \ Masculino \ Combinados \ Idiopática

Avaliação da Ovulação: Avaliação do Esperma: Avaliação do

Caminho:
Estudo Hormonal Espermograma
Imagem das
Trompas
e Útero

~ 50% dos casos de infertilidade envolvem algum mecanismo genético pré ou

pós concepção
 Escalonamento:
Cariótipo Banda G em sangue periférico de ambos os parceiros
Se alterado solicitar aconselhamento genético para avaliar
complementar com estudo de 100 células ou SNP-array.
 Escalonamento:
Casos de infertilidade masculina com alteração em espermograma podem ser
investigados através de:

✔ Teste de ✔ Pesquisa de ✔ Pesquisa de ✔ Pesquisa de

fragmentação Microdeleção aneuploidia dos mutação do
do DNA do espermatozóides CFTR
espermático Cromossomo (FISH) (azoospermia)
Y
 Escalonamento:
✔ Teste de fragmentação do DNA espermático

Investiga o grau de integridade do material genético dos

espermatozoides (complementar ao espermograma)

Técnica de dispersão da cromatina espermática (SCD):

desnaturação do DNA e + remoção proteínas dos
espermatozoide (halo = DNA intacto| sem halo = DNA ÍNTEGRO
fragmentado)

Técnica de TUNEL: enzima identifica os pontos de quebra na fita

de DNA na extremidade livre 3′OH.
Locais de quebra são marcados com sonda fluorescente (DNA
íntegro = azul | DNA fragmentado = verde)
 Escalonamento:
✔ Pesquisa de Microdeleção do Cromossomo Y
Braço longo = AZFa, AZFb e AZFc (“azoospermia factors”: múltiplos
genes essenciais para a espermatogênese)

Gravidade: síndrome de células de sertoli (deleção do AZFa) à

hipoespermatogênese (deleção do AZFc) e passam pela parada da
maturação dos genomas na meiose (deleção do AZFb).

Braço curto = gene SRY: fundamental para a diferenciação e o

crescimento testicular)
 Escalonamento:
✔ Pesquisa de aneuploidia dos espermatozóides (FISH):

Teste de aneuploidias espermáticas (SAT): avalia a porcentagem

de espermatozóides com anormalidades cromossômicas em uma amostra de sêmen.

✔ Pesquisa de mutação do CFTR (azoospermia): agenesia bilateral dos ductos

deferentes
 Escalonamento:
Pesquisa de Trombofilias Hereditárias.

Pesquisa de X frágil em mulheres com história de menopausa

precoce.

Nas suspeitas de disgenesias gonadais é indicado

aconselhamento genético para elucidação diagnóstica.

Nos casos de perdas recorrentes verificar se foi avaliado

geneticamente o material de aborto (cariótipo de restos ovulares
ou CGH-Array)

Avaliação de causas imunológicas e infecciosas

 Escalonamento:
AVALIAÇÃO GENÉTICA DO CASAL CONSANGUÍNEO

Casamento consanguíneo: compartilham um antepassado comum

Pesquisa de mutações recessiva de ambos os parceiros

Cariótipo Banda G em Sangue periférico de ambos os parceiros

 Escalonamento:
AVALIAÇÃO GENÉTICA NOS CASOS DE ALTERAÇÃO EM PRÉ-NATAL

Se identificado alguma malformação fetal: aconselhamento genético

Amniocentese ou biópsia de vilosidade coriônica: investigação citogenética ou

molecular

NIPT: analisar o DNA fetal através do sangue materno para diagnosticar

possíveis alterações cromossômicas no feto e avaliar a saúde do bebê.
 Escalonamento:
AVALIAÇÃO GENÉTICA NAS SUSPEITAS DE CÂNCER HEREDITÁRIO

Realização de estudo genético para câncer hereditário através de painéis ou

investigação de genes isolados
 Lista Rápida:
Exames e Procedimentos:

✔ Aconselhamento Genético Pré-Exame;

✔ Aconselhamento Genético Pós-Exame;
✔ Sexagem fetal;
✔ NIPT;
✔ Cariótipo;
✔ FISH;
✔ CGH/SNP Array;
✔ PCRs
✔ Painel NGS Casais Consanguíneos;
✔ Mutação Familiar;
✔ Exoma
 Nossa Meta:
Orientar pacientes
sobre a importância do
aconselhamnto genético
familiar e individual
antes e depois da
realização de exames
genéticos;

Orientar pacientes sobre

tipos de exames
genéticos que podem
ser solicitados em
investigações nas quais
existe suspeita de
desordens genéticas.
-
eraldaslomp@gmail.com