Engenharia Bioquímica

Cinética enzimática
Parte I

Prof. Luciano Jacob Corrêa

Departamento de Engenharia
Universidade Federal de Lavras
Obs: Material de apoio referente ao conteúdo visto na sala de aula!
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3. Cinética Enzimática: Introdução

❑ Estudo de transformações que acontecem em um processo

dinâmico, da sua velocidade e dos fatores que afetam esta
velocidade (T, [S], [P], [I])

❑ Devem ser conhecidas as velocidades de formação do produto e

de consumo (desaparecimento) de substrato (reagente).

❑ Nos alimentos ocorrem muitas transformações (alteração de

sabor, cor, textura, valor nutricional, etc.)
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3. Cinética Enzimática: Introdução

❑ Cinética enzimática: fornece informações sobre o mecanismo da

reação e parâmetros que caracterizam as propriedades da enzima.

❑ Modelos matemáticos: aplicados no cálculo do tempo e da

produtividade de uma reação e na definição das condições
econômicas ótimas, importantes no projeto de um reator.
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3. Cinética Enzimática: Enzima e suas características

❑ As enzimas são moléculas de proteínas: função de reconhecer e

se ligar a reagentes específicos.

❑ As enzimas aumentam a velocidade das reações espontâneas:

redução da energia de ativação.

❑ Combinam temporariamente com substratos durante a reação.

❑ São liberadas sem alteração em sua estrutura após a conversão de

substratos em produtos.
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3. Cinética Enzimática: Enzima e suas características

❑ Catalisadores biológicos.

❑ São específicas em sua atividade.

❑ São saturadas por altas concentrações de substrato.

❑ Grande parte das enzimas são sensíveis ao pH e à temperatura.

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3. Cinética Enzimática: Enzima e suas características

❑ Vantagens do uso de enzimas em relação à catalisadores químicos

convencionais:

✔ São aplicáveis sob condições brandas de temperatura, pH e

pressão;

✔ Apresentam alta especificidade: reduzem a formação de produtos

indesejáveis;

✔ São biodegradáveis;
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3. Cinética Enzimática: Enzima e suas características

❑ As enzimas foram classificadas de acordo com a natureza da
reação química que catalisam.

1. Oxido-redutases: reações de oxidação-redução.

2. Transferases: transferem grupos funcionais como amina,

fosfato, acil, carboxil.

3. Hidrolases: reações de hidrólise de ligação covalente.

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3. Cinética Enzimática: Enzima e suas características

❑ As enzimas foram classificadas de acordo com a natureza da
reação química que catalisam.

4. Liases: catalisam a quebra de ligações covalentes e a remoção

de moléculas de água, amônia e gás carbônico.

5. Isomerases: Catalisam a modificação de uma única molécula,

sem participação de outra.

6. Ligases: catalisam reações de formação de novas moléculas a

partir da ligação entre duas pré-existentes.
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3. Cinética Enzimática: Enzima e suas características

❑ As enzimas são comumente denominadas adicionando-se o sufixo “ase” ao
nome do substrato, ou a uma expressão que descreva sua ação catalítica.

⮚ Urease: hidrólise da uréia.

⮚ Celulase: degradação da celulose.

⮚ Lipase: digestão de lipídios.

⮚ Lactase: hidrólise da lactose

⮚ Amilase: degradação do amido.

⮚ Carboidrase: degradação de carboidratos.

⮚ Álcool desidrogenase: oxidação de álcoois em seus aldeídos.

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3. Cinética Enzimática: Enzima e suas características

❑ Cada enzima recebe um número de classificação, conhecido por “E.C.”

(Enzyme Commission of the International Union of Biochemistry and
Molecular Biology), que é composto por 4 dígitos:

1. Classe
2. Sub-classe dentro da classe
3. Grupos químicos específicos que participam da reação
4. Substrato

Exemplo: celulase (EC 3.2.1.4)

http://www.sbcs.qmul.ac.uk/iubmb/enzyme/
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3. Cinética Enzimática: Enzima e suas características

❑ Indústrias de Detergentes
⮚ Proteases
⮚ Lipases

❑ Indústrias Alimentícias
⮚ Amilases
⮚ Invertase
⮚ Proteases
⮚ Pectinases
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3. Cinética Enzimática: Enzima e suas características

❑ Indústrias Têxteis
⮚ Celulases
⮚ Amilases

❑ Biocombustíveis
⮚ Lipases
⮚ Celulases
⮚ Amilases
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3. Cinética Enzimática: Enzima e suas características

❑ Enzimas digestivas
⮚ Amilases
⮚ Lactase
⮚ Protease
⮚ Lipase
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3. Cinética Enzimática: Fatores que afetam a cinética enzimática

❑ Temperatura

❑ pH

❑ Concentração de substrato

❑ Presença de inibidores

❑ Concentração enzimática
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3. Cinética Enzimática: Fatores que afetam a cinética enzimática

❑ Temperatura
⮚ Aumento da temperatura resulta em aumento da atividade
enzimática: movimento das moléculas aumenta.

⮚ Caso a temperatura aumente acima

de um certo ponto, a atividade
enzimática declina rapidamente:
desnaturação.

Figura 1: velocidade da reação em função da temperatura

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3. Cinética Enzimática: Fatores que afetam a cinética enzimática

❑ pH
⮚ Cada enzima tem uma faixa ótima de pH na qual mantém sua
configuração normal no meio em que atua.

⮚ A variação no pH pode alterar a ionização de cadeias de aminoácidos

no sítio ativo da enzima: desnaturação.

Figura 2: Atividade enzimática em função do pH

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3. Cinética Enzimática: Fatores que afetam a cinética enzimática

❑ pH
Tabela 1: Valores de pH ótimo para algumas enzimas

Fonte: ATKINSON e MAVITUNA,

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3. Cinética Enzimática: Modelos mecanísticos da cinética enzimática

[P]

Velocidade
Concentração

de reação?

[S]

Tempo
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3. Cinética Enzimática: Modelos mecanísticos da cinética enzimática

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3. Cinética Enzimática: Modelos mecanísticos da cinética enzimática

Etapa rápida Etapa lenta

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3. Cinética Enzimática: Geração de dados experimentais

❑ Estudar o efeito da [S] na velocidade da reação (em curso)

requer cuidados, uma vez que a [S] varia ao longo do tempo, à
medida que o S é consumido.

Técnica da velocidade inicial

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3. Cinética Enzimática: Determinação dos parâmetros cinéticos

❑Regressão linear

⮚ Lineweaver-Burk

⮚ Langmuir, Augustinsson ou Hanes-Woolf

⮚ Eadie-Hofstee

❑Regressão não -linear

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Aplicação 1

Uma determinada enzima realiza a seguinte reação química:

Um analista verificou que para uma determinada concentração de

enzima, a reação se estabiliza após as duas primeiras horas. No
entanto, para o cálculo da velocidade inicial, quantificou as seguintes
concentrações do substrato A. Determine a velocidade da reação.
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Aplicação 2

De uma série de experimentos com uma concentração constante de enzima, os

seguintes dados de velocidade inicial foram obtidos como função da
concentração inicial de substrato:

Estime os valores dos parâmetros cinéticos da equação de Michaelis-Menten

usando os métodos de Lineweaver-Burk, de Langmuir e de Eadie-Hofstee.
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Aplicação 3

A enzima E catalisa a produção de um composto B a partir de um substrato A.

Esta enzima foi imobilizada em um suporte e após alguns ensaios

experimentais, os seguintes resultados foram observados para o início da
reação:

Determine:
(a) as velocidades iniciais para cada concentração de substrato.
(b) os parâmetros cinéticos Vmáx e Km da enzima utilizando a linearização de
Lineweaver-Burk.