Bioquímica

Dr. Roberto T. Araujo Júnior

Enzimas
Aula
 Os conteúdos e mídias disponíveis nas
aulas da Cruzeiro do Sul Educacional têm

SOBRE DIREITOS AUTORAIS E REPRODUÇÃO

finalidade educacional e são destinados
para o seu estudo individual. É proibida a
cópia, reprodução (total ou parcial) ou
disponibilização deste material, por
quaisquer meios existentes ou que
venham a ser criados, sem autorização
ATENÇÃO
prévia de seus autores.
!
O que são enzimas?
REAÇÕES DE COMBUSTÃO
➢ No automóvel:
Gasolina (hidrocarbonetos) CO2 + H2O
T = 2000-3000oC

➢ No corpo humano:
Glicose CO2 + H2O
T = 37oC

➢ Sacarose é estável se deixada exposta ao ar!

Quais as razões para esta diferença?
ENZIMAS
CATALISADORES BIOLÓGICOS
❖ Aumentam significativamente a velocidade das reações (105 – 1017 vezes).

Ex: Decomposição do H2O2

Catalase
H2O2 H2O + O2
Condições da Reação Velocidade
Relativa
Sem catalisador 1

Platina 2,77 x 104

Enzima Catalase 6,51 x 108

ENZIMAS
❖ Não são consumidas na reação.
E+S→E+P

❖ Atuam em concentração muito baixa.

Ex: Catalase

Decompõe 5.000.000
1 molécula de Catalase moléculas de H2O2/min
em pH=6,8

Número de renovação ou transformação = no de moléculas de S convertidas em P por uma

única molécula de E em uma dada unidade de tempo.
ENZIMAS
❖ Condições de reações (pH, T, Pressão) mais brandas do que
catalisadores químicos.

❖ Alta especificidade (eficiência catalítica deriva da ligação do S ao

sítio ativo da E).

❖ Não formam produtos secundários.

❖ Concentração e atividade reguladas.

❖ Atividade depende da integridade da conformação.

 G<0 → reação espontânea

Lentas e Inespecíficas
Para que as reações químicas ocorram é necessário
que os reagentes entrem em contato
→ rompimento e formação de ligações
As reações somente ocorrem se houver colisão
favorável, ou seja, o choque deve ocorrer com E
suficiente e orientação espacial apropriada.
Qualquer fator que  no colisões favoráveis, 
velocidade da reação.
 Velocidade da reação  no colisões favoráveis
Estado intermediário com contém o E de ativação
complexo ativado (estrutura instável)

Variação na E
livre da reação
(≠ entre G dos estados
fundamentais de S e P:
equilíbrio)

(quebra e formação de ligações)

Energia de ativação: Energia mínima para que 1 colisão entre moléculas seja favorável
3 formas de aumentar a velocidade das reações:

❖ Aumentar a [reagentes]
Aumentam o no colisões
❖ Aumentar a temperatura

❖ Diminuir a E de ativação → ENZIMAS

Catalisadores: não atuam sobre o no de colisões, mas sua

ação baseia-se na formação de um caminho alternativo,
que requer um menor consumo de energia
→ menor Energia de ativação
Posição de equilíbrio não é afetada pelo catalisador
e não apresenta efeito termodinânico global!

G’0
não é afetado

Intermediários da reação: E + S ES EP E+P

 ENZIMAS
❖ Na ausência de catálise, reações químicas de importância
biológica não ocorreriam numa escala de tempo compatível com
a vida!

❖ Essenciais a todos os processos biológicos!

❖ Algumas doenças são causadas por deficiências em enzimas

específicas. Outras são causadas por excesso de atividade de
uma enzima → Alvos terapêuticos!

❖ Medidas de atividade enzimática são utilizadas no

diagnóstico de algumas doenças → Biomarcadores!

❖ Úteis em inúmeros processos industriais → Importância

econômica!
 Vias Metabólicas
dependem da atuação
coordenada de
Enzimas!

Desenvolvimento
da Bioquímica!
Sítio Catalítico

enzima

sítio ativo substrato

 S

Sítio ativo
 (a) Ausência de enzima

Substrato Estado de Transição Produtos

(b) Sítio ativo da enzima complementar ao substrato

(c) Sítio ativo da enzima complementar ao estado

de transição
Especificidade pelo Substrato
❖ O sítio de ligação ao substrato
consiste em geral de uma cavidade
na superfície da proteína que é
geometricamente complementar ao
substrato.
❖ Os aa do sítio ativo se organizam
de maneira a interagir com o
substrato.
❖ Após a ligação ao substrato,
ocorre um ajuste induzido no sítio
ativo da enzima.
Toda enzima é proteína?!
Não!, há alguns RNAs que funcionam enquanto
enzimas também

Componente químico adicional necessário para a função

Cofator: íons inorgânicos
Coenzima: moléculas orgânicas complexas
Se liga muito firmemente: grupo prostético

Enzima completa: holoenzima

Parte protéica: apoenzima ou apoproteína
 Classificação das Enzimas
CLASSE SUBCLASSE

Isomerases • Racemases
• Epimerases

Formação de isômeros por transferência de grupos na molécula

• Aldolases
Liases • Hidratases
• Descarboxilases
Formação/remoção de duplas ligações

• Sintetases
Ligases • Carboxilases
Formação de ligações C-C, C-S, C-O e C-N acoplada à clivagem de ATP
 CLASSE SUBCLASSE

• Peroxidases
Óxido Redutases • Oxidases
• Desidrogenases

Transferência de e-

• Transaldolases
• Fosfomutases
Transferases
• Quinases
• Sintases
Transferência de grupos

• Esterases
Hidrolases • Peptidases
• Fosfatases
• Fosfolipases
Transferência de grupos funcionais para a água (hidrólise)
Nomenclatura de enzimas
❖ Outras são denominadas por nomes ligados a sua descoberta antes que a
reação catalisada fosse conhecida: pepsina, lisozima.

❖ Com o aumento do número de enzimas descobertas, tornou-se necessário

um sistema para uma classificação mais eficiente:

Comissão de Enzimas (EC) da União Internacional de Bioquímica

(IUB)

→ nomear e classificar
 Nomenclatura de enzimas - IUB
Cada enzima → código com 4 dígitos que caracteriza o tipo de
reação catalisada:
✓ 1° dígito - classe
✓ 2° dígito - subclasse
✓ 3° dígito - sub-subclasse
✓ 4° dígito - substrato

Glicoquinase
ATP + Glicose ADP + Glicose-6-P
IUB = ATP:glicose fosfotransferase
EC: 2 . 7 . 1 . 1
Glicose como aceptor do grupo P
Fosfotransferase que usa grupo -OH como aceptor
Subclasse: Fosfotranferase
Classe: Transferase
Fatores que afetam a atividade enzimática:

• Temperatura
• pH
• Concentração de substrato
• Concentração de enzima
Temperatura e pH
CINÉTICA ENZIMÁTICA
Concentração de Substrato
A concentração de substrato afeta a
velocidade de uma reação enzimática
E+S P
Mas como estudar o efeito da [S] sobre a velocidade da
reação enzimática se [S] varia com o tempo?

Aproximação

Medir a velocidade inicial (v0), quando a

concentração de [S] é muito maior que a [E]
Concentração de
Substrato
Efeito da [S] sobre v0

conforme  [S], v0  até atingir platô

(Vmáx) → saturação da E pelo S
→ toda E na forma de ES

[S] em que  [S], v0  linearmente em função de [S]

v0 = ½Vmáx (fator limitante da reação), toda E livre

[S] = Km
(satura a E
em 50%) Km: afinidade da E pelo S
 [ES] não é facilmente medida
experimentalmente. O que fazer?
➢ Assume-se que a velocidade inicial da reação reflete um
estado estacionário em que [ES] é constante (velocidade de
formação de ES é igual à velocidade de quebra).

Equação de Michaelis-Menten
Quanto menor for o valor de Km, maior
será a afinidade da enzima pelo substrato
 Como determinar Km e Vmáx experimentalmente?

Transformada de Lineweaver-Burk
ou Gráfico Duplo-Recíproco

v0 = Vmáx [S] 1 = Km + [S] 1 = Km [S]

+
Km + [S] v0 Vmáx [S] v0 Vmáx [S] Vmáx [S]
Gráfico duplo-recíproco
Equação de reta a

1 = Km 1 + 1
y = ax + b
v0 Vmáx [S] Vmáx
Concentração de Enzima
➢ Variando-se a [E], a velocidade sempre irá variar, qualquer
que seja a [S].
k2
E+S ES P+E
[E]=2E → como [S] está em excesso: [S] – [2ES]  [S]

Mas, [ES] em um caso será o dobro da outra e, sendo

v2 = k2 [ES]

→ velocidade da reação também será o dobro!

Concentração de Enzima

v0 Vmax [2E]

Vmax [E]

[S]

➢ Velocidade da reação é diretamente proporcional à [E].

A

B
 A

C
B
INIBIÇÃO ENZIMÁTICA
INIBIDORES ENZIMÁTICOS

São substâncias que diminuem a atividade

enzimática. Alguns são constituintes normais
das células. Outros são estranhos ao
metabolismo.

Cumprem um papel regulador importante.

Inibição Enzimática
1. Irreversível: modificação covalente e
definitiva no sítio ativo

2. Reversível:
- Competitiva
- Não-competitiva
Aplicações:
• Estrutura da enzima
• Compreensão das vias metabólicas
• Mecanismo de catálise
• Processos patológicos
• Fármacos
INIBIDORES IRREVERSÍVEIS
Penicilina → Seu emprego terapêutico se deve a sua
propriedade de inibidor irreversível. Este antibiótico
liga-se especificamente a enzimas da via de síntese da
parede bacteriana (transpeptidase), inibindo-as.
Desprovidas de parede, as células ficam sujeitas a lise.

Agente terapêutico atua sobre uma enzima que o

parasita apresenta e o indivíduo hospedeiro não.
INIBIDORES IRREVERSÍVEIS
Omeprazol® → inibidor irreversível da enzima K+/H+ ATPase (bomba de
prótons) das células parietais gástricas.

A longo prazo, câncer gástrico (?)

Xenical® → inibe a lipase pancreática, impedindo a absorção de

aproximadamente 30% da gordura alimentar no intestino delgado.

Efeitos colaterais: evacuação solta, diminuição da absorção de vitaminas

lipossolúveis (A, D, E e K)
INIBIDORES REVERSÍVEIS COMPETITIVOS
❖Competem com o substrato pelo sítio ativo da enzima.

❖ Em geral, são moléculas que apresentam estrutura química semelhante à do

S. São capazes de se ligar ao sítio ativo de E, produzindo um complexo
enzima-inibidor (EI), semelhante ao complexo enzima-substrato (ES). O
complexo EI nunca gera produto.

❖ A Vmáx é atingida e o valor de Km aumenta aparentemente, uma vez que o

inibidor está competindo pelo substrato.
Inibição Competitiva
Alteração de parâmetros cinéticos pelo
inibidor competitivo

 [S] desloca o I e Vmáx é atingida

Duplo-recíproco

-1/Km
INIBIDORES COMPETITIVOS
AZT (tratamento da AIDS)

3’ 3’

H H

Zidovudina, Retrovir
Intoxicação por Metanol

URINA
Metanol
Álcool
desidrogenase

Formaldeído

causa lesão
Infusão IV tecidual
Etanol
cegueira
 INIBIDORES REVERSÍVEIS
NÃO-COMPETITIVOS
❖ Não apresentam qualquer semelhança estrutural com o substrato da reação
que inibem.

❖ Ligam-se a radicais que não fazem parte do sítio ativo; o inibidor se liga à
cadeia lateral de um determinado aminoácido, inativando a enzima
reversivelmente.

❖ Cineticamente, há uma redução aparente na [E]. KM não muda, porém, Vmáx é

reduzida.

Ex: metais pesados: Hg+2, Pb+2, Ag+ (reagem com grupos –SH de proteínas).
Pouco específicos e amplo espectro de ação.
Alteração de parâmetros cinéticos pelo
Inibidor NÃO-Competitivo
Enquete
Qual o tipo de inibição está acontecendo?
Enquete
É possível afirmar que:

Inibidor competitivo altera o Km aparente

Inibidor não competitivo altera o Vmax

 Mecanismos de Regulação da
Atividade Enzimática
• Disponibilidade de substrato
• Enzimas alostéricas
• Modificação covalente
• Clivagem proteolítica de pró-enzimas
• Degradação
• Controle ao nível gênico
– indução
– repressão
Regulação da Atividade Enzimática

Síntese Degradação

Degradação
Enzimas Alostéricas ou Regulatórias
• Reguladas por:
efetores ou moduladores alostéricos

fora do sítio ativo

não covalente

positivos negativos
Enzimas Alostéricas ou Regulatórias
Enzimas Alostéricas
Efetores:

Homotrópicos Substrato +

Heterotrópicos Não é o substrato Feedback

negativo


-
A B C D E

Coordena o fluxo de moléculas por uma via metabólica

 Feedback negativo

Feedback positivo
As enzimas alostéricas não obedecem
à cinética de Michaelis-Menten
ATÉ A
PRÓXIMA!
Bibliografia
ATÉ A
PRÓXIMA!