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com #rQe3Khiu2P
 1- IMUNOFLUORESCÊNCIA (IF)
Tem a função de identificar anticorpos (Ac) nos tecidos ou no soro.
➔ A imunofluorescência direta (IFD) é baseada na reação antígeno-
anticorpo e demonstra a reação mediante fluorocromos excitáveis em luz
ultravioleta. Utiliza a bióspsia de pele do paciente.
➔ A imunofluorescência indireta (IFI) utiliza pele normal de outro local, com
o soro do paciente associado ao anticorpo conjugado à fluoresceína.
➔ Fator HG: técnica de IFI amplificada, em que se adiciona uma fonte de
complemento (soro humano normal fresco). Aumenta a sensibilidade da IFI.
Usada no penfigoide gestacional

2- SALT SPLIT SKIN (SSS)

➔ Técnica que incuba tecido de um outro local (como pele de prepúcio) em
uma solução de NaCl, provocando uma clivagem na lâmina lúcida.
Divergência de literatura: Solução de NaCl a 1M (Bolognia) ou NaCl 0,9% (Belda 3.edição pág 81)
➔ Faz-se a imunofluorescência indireta com o soro do paciente, avaliando o
local de depósito do anticorpo no teto (lado epidérmico) ou assoalho (lado
dérmico).

TETO

ASSOALHO
Bolognia JL, Jorizzo JL, Schaffer JV. Dermatology. 3rd ed. Philadelphia, PA: Elsevier Saunders

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 Pênfigo Foliáceo
➔ PADRÕES DE IFD • Ac contra Dsg1
• Clínica: Bolhas superficiais + áreas erosadas
• Não acomete a mucosa
• AP: Bolhas acantolíticas altas abaixo da
granulosa.
• IFD: Depósito de IgG e C3 nos espaços
intercelulares,
INTRAEPIDÉRMICO INTERCELULAR

Pênfigo Vulgar
• Forma mucosa: Ac contra Dsg 3
• Forma mucocutânea: Ac contra Dsg 1 e Dsg3
• Clínica: Lesões exulceradas em mucosa
• Lesões vesicobolhosas superficiais
• AP: Bolhas acantolíticas suprabasais.
• IFD: Depósito de IgG e C3 nos espaços
intercelulares da pele e da mucosa

Pênfigo por IgA

• Dermatose acantolítica neutrofílica
classificada em 2 tipos:
1-Dermatose pustulosa subcórnea:
autoantígeno é a desmocolina 1
2-Dermatose neutrofílica intraepidérmica
• IFD: Depósito de IgA intercelular

INTERCELULAR +
ZONA DA Pênfigo Paraneoplásico
MEMBRANA BASAL (ZMB) • Ac contra Dsg1 e 3, plaquinas, BP230 e
desmocolinas...
• Clínica: Lesões polimorfas: bolhas, erosões
e acometimento grave de mucosas
• AP: Dermatite de interface, queratinócitos
necróticos e acantólise.
• IFD: Depósito de IgG e C3 na ZMB e
espaços intercelulares da epiderme.
• IFI: + em bexiga de rato

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 Penfigoide Bolhoso
• Ac contra BP 230 e BP180.
• Lesões: Bolhas grandes e tensas.
• AP: Bolha subepidérmica com muitos
eosinófilos.
• IFD: Depósito linear de IgG e C3 ao longo da Penfigoide gestacional
zona da membrana basal (ZMB).
• Salt split (SS): Fluorescência no lado • Ac contra BP 180
epidérmico da bolha (teto). • Lesões: Iniciam no 2º ou 3º trimestre
da gestação, com pápulas, vesículas e
bolhas que começam na região
umbilical.
• AP: Bolha subepidérmica com
eosinófilos.
• IFD: Depósito linear de C3 na ZMB
(100% dos casos) e IgG (30%-40%)

LINEAR NA ZMB Dermatose por IgA linear

• Lesões bolhosas tensas agrupadas em
forma anular.
• AP: Bolha subepidérmica com ou sem
infiltrado neutrofílico.
• IFD: Depósito de IgA linear na ZMB.
Eventual depósito de IgG e C3
• SS: + no lado epidérmico (60%-70%)

Penfigoide das membranas mucosas

• Ac contra laminina 5, BP180 e proteína
a6b4.
• AP: Bolha subepidérmica.
• IFD: IgG e C3 linear na ZMB. Pode
Epidermólise bolhosa adquirida(EBA) depositar IgA (20%).
• Ac contra o colágeno VII. • SS: + no lado epidérmico e dérmico da
• Lesões: Bolhas em áreas de trauma. clivagem.
• AP: Bolha subepidérmica
• IFD: Depósito linear de IgG e C3 ao longo
da ZMB.
Depósito de outras Ig pode ocorrer.
• SS: Fluorescência no lado dérmico da
bolha (assoalho).

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 GRANULAR NA ZMB Dermatite herpetiforme
• Associada à enteropatia ao glúten.
• Lesões papulovesiculosas pruriginosas e
bolhas tensas.
• AP: Bolha não acantolítica subepidérmica
com microabcesso neutrofílico na derme
papilar.
• IFD: Depósito granular de IgA nas papilas
dérmicas e na ZMB.
Raro depósito de C3 e outas Ig.

AO REDOR DOS VASOS

E NA ZMB Porfiria cutânea tarda
• Lesões vesicobolhosas
• Ac contra colágeno VII
• AP: Bolhas subepidérmicas e papilas
dérmicas festonada.
• IFD: depósitos de IgG, IgM (raro), C3 e
IgA na parede de vasos dilatados na
derme papilar e ao longo da ZMB

GRANULAR NA ZMB Lupus eritematoso

• Ac contra componentes nucleares dos
queratinócitos e de estruturas da ZMB
(colágeno VII)
• IFD: IgG, IgM, IgA e C3, além de outros
imunorreactantes na ZMB.
• Existem vários padrões de depósitos na
ZMB (homogêneo, o fibrilar, linear e o
granuloso)...

OBS: Não fiquem preocupados! Vão ter aulas específicas tanto de clínica
quanto de patologia de dermatoses bolhosas. Essa aula é apenas para
apresentar as técnicas e descrever algumas características gerais que
são úteis para o diagnóstico dessas doenças.

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 3- TABELA DE COLORAÇÕES:

COLORAÇÕES ESTRUTURA EVIDENCIADA COR INDICAÇÃO

Alcian Blue e Mucinas ácidas Azul Granuloma anular, mucinose e lúpus

ferro coloidal

Azul da Prússia Ferro (hemossiderina) Azul Púrpura pigmentosa e sarcoma de Kaposi

(Perls)

Fontana Mason Melanina Preto Melanoma, feohifomicose e hipermelanoses

Azul de Grânulos de mastócitos Roxo Mastocitoses

toluidina

PAS Zona da membrana basal, Rosa Lúpus, micoses e porfirias

fungos e doenças de depósito

Sudan (III, IV ou Lipídeos III: laranja Xantomas, xantogranulomas e

black)
IV: vermelho dermatites factícias

Black: preto

Tricômio de Colágeno e músculo Colágeno: azul Nevos conjuntivos

Masson
Músculo: vermelho Leiomiomas

Van Gieson Colágeno Vermelho Colagenomas

VerhoEFf Fibras Elásticas Preto Anetodermias, pseudoxantomas elástico e

cútis laxa

Von Kossa Cálcio no tecido Preto Pseudoxantoma elástico com calcificação

Vermelho do Substância amiloide Vermelho Amiloidoses

Congo
Luz polarizada:
verde maçã

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 TABELA DE COLORAÇÕES:

COLORAÇÕES ESTRUTURA COR INDICAÇÃO

EVIDENCIADA

Gram Bactérias Gram+ e Gram (+): roxo Actinomicetomas e

Gram - botriomicoses
Gram (-): vermelho

Grocott Fungos Preta (lobomicose e Micoses superficiais e

histoplasma) profundas

Castanho (esporo)

Mucicarmim de Criptococos Vermelho Criptococose

Mayer

Whartin Starry Espiroquetas Preto Sífilis e bartoneloses

Ziehl-Neelsen BAAR Vermelho Hanseníase

Micobacterioses

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 4- TABELAS DOS MARCADORES / IMUNOHISTOQUÍMICA
➔ Combinação de métodos imunológicos e histológicos.
➔ Utilizado para a localização de antígenos (proteínas) em tecidos, explorando
o princípio da ligação específica de anticorpos a antígenos.
➔ Marcadores moleculares específicos são característicos de eventos celulares
particulares e podem ser utilizados para identificar móleculas-alvo.

MARCADOR IMUNOEXPRESSÃO NA TUMORES PRIMÁRIOS

PELE

EMA Glândulas écrinas, Doença de Paget, carcinoma sebáceo,

apócrinas e sebáceas
(antígeno membrana tricoepitelioma, poromas e siringomas
epitelial) (negativa para CBC e
eventualmente positiva
focal no CEC)

Citoqueratina AE1AE3 Epiderme e epitélio folicular Para diagnosticar uma neoplasia epitelial (CEC ou carcinoma
anexial) e excluir tumores mesenquimais e melanocíticos.

CK 5/6 Camada basal do epitélio Para células fusiformes

escamoso estratificado
Pode auxiliar na distinção de carcinomas cutâneos primários
de metástase

CK7 Epitélio écrino e apócrino Doença de Paget e carcinoma de mama

CK15 Queratinócitos da camada Imunoexpressão mais forte no tricoepitelioma (para

basal diagnóstico diferencial com CBC)

CK20 Epitélios simples e células Carcinoma de células de Merkel

de Merkel

CEA Epitélio écrino e apócrino Doença de Paget

Detecta diferenciação entre tumores cutâneo primário

(écrino/apócrinos) e adenocarcinoma metastático

Bcl2 Camada basal da epiderme Auxilia no diagnóstico diferencial entre CBC e tricoepitelioma
e células linfoides
Presente em alguns linfomas de células B
Regula a apoptose

CD34 Células endoteliais Neoplasia vasculares benignas e malignas

Dermatofibrossarcoma protuberans (negativo no

dermatofibroma)

Estroma peritumoral de tricoepiteliomas

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 CD10 Algumas células histiocíticas Dermatofibroma e fibroxantoma atípico
e linfoides
Diferenciação entre CBC (+ nas células neoplásicas) e
tricoepitelioma (estroma neoplásico)

Ki67 Células da camada basal Diferenciação entre CBC e tricoepitelioma

germinativa
Tumores malignos apresentam alta atividade proliferativa
(Avaliação da atividade
proliferativa )

p53 Células que apresentam Expressão nuclear aumentada nas células com fotodano:
alterações no DNA CBC, CEC e queratose actiníca

Baixa expressão em neoplasia anexiais benignas

• Carcinoma de células de Merkel: Imunoexpressão de CK20, enolase neuro-

específica e cromogranina.
• Histiocitose de células de Langerhans: Imunoexpressão de CD1a (principal
marcador), S100 e langerina (CD207).
• Dermatofibrossarcoma protuberans: Marcador CD34 positivo e fator XIIIa
negativo.
• Dermatofibroma: Fator XIIIa positivo e CD34 negativo.
• Fibroxantoma atípico: Vimentina, CD68, CD 163, CD99 e CD10.
• Neoplasia vasculares (angiossarcoma): Imunoexpressão de fator VIII e CD31.
• CBC: BerEP4 (possui alta sensibilidade e especificidade na detecção de CBC).

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 MARCADORES DE CARACTERÍSTICAS
CÉLULAS
MELANOCÍTICAS

HMB-45 Identifica melanócitos atípicos de nevos atípicos e Sensibilidade de 70% dos melanomas
melanomas
Negativo nos melanomas desmoplásicos
Células melanocíticas usuais não apresentam e fusocelulares
imunoexpressão

MELAN A Alta sensibilidade e especificidade para Negativo nos melanomas desmoplásicos

melanócitos em geral e os de células fusiformes
(MART-1)

S100 Sensível para melanoma desmoplásico e de células Baixa especificidade

fusiformes
-> marca melanócitos normais, células
neurais, adipócitos, células de
Langerhans, entre outros

SOX 10 Fator de transcrição da crista neural na Para melanomas desmoplásicos e

diferenciação das células de Schwann e neurotrópicos, esse marcador tem se
melanócitos mostrado mais sensível que o S100

PAINEL LINFOMAS

CD2, CD3, CD4, CD5 e Linfomas de células T

CD7

CD8 Linfomas de células T subcutâneo “paniculite like”

CD10, CD 20, CD79 Linfoma de células B

CD30 Linfoma anaplásico de grandes células (B ou T) e papulose linfomatoide

CD56 Neoplasia de células T/NK

CD45 Células linfo-hematopoiéticas

Linfomas B e T

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 5- MÉTODO DE TZANCK
➔ Exame citológico útil para uma confirmação diagnóstica imediata
principalmente nos pênfigos, pela presença de células acantolíticas, e
nas infecção por HSV e HVZ, pela identificação de células balonizantes.
➔ Material: raspado de lesões cutâneas ou conteúdo da bolha

PÊNFIGO HERPES
Células acantolíticas Células balonizantes
Células redondas e soltas Células gigantes e multinucleadas
(perda de adesão entre as células)

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